藤茶抗氧化活性成分及其應(yīng)用研究進(jìn)展

吳海順 李偉業(yè) 于華忠

摘要 藤茶具有抗氧化、抗感染、抗腫瘤、保肝、調(diào)節(jié)血脂和血糖等藥理功效，可以預(yù)防肥胖、高血壓等疾病。目前關(guān)于藤茶化學(xué)成分、藥理作用等方面的研究很多，尤其是對(duì)其抗氧化活性的研究具有很大的發(fā)展前景。從藤茶抗氧化活性成分及其提取、測(cè)定方法和應(yīng)用等方面研究情況進(jìn)行綜述，為更好地開(kāi)發(fā)利用藤茶藥用、食用價(jià)值提供一定的科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞 藤茶;抗氧化活性成分;提取;測(cè)定方法;應(yīng)用

中圖分類號(hào) R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2021）17-0026-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.17.007

Abstract Vine tea has pharmacological effects such as anti-oxidation， anti-infection， anti-tumor， liver protection， regulation of blood lipids and blood sugar， and can prevent obesity， hypertension and other diseases.At present， there are many researches on the chemical components and pharmacological effects of vine tea， especially the research on its antioxidant activity has great development prospects.This article reviewed the research status of the antioxidant active components of vine tea and its extraction， determination methods and applications， and provided a scientific basis for the better development and utilization of the medicinal and edible value of vine tea.

Key words Vine tea;Antioxidant active ingredients;Extraction;Determination method;Application

藤茶Ampelopsis grossedentata（Hand-Mazz）W.T.Wang為葡萄科蛇葡萄屬顯齒蛇葡萄的嫩莖葉[1]加工而成，富含二氫楊梅素（DMY）為主的黃酮類[2]、多糖類、多酚類等活性成分[3]，具有抗菌[4]、降血壓、降血脂、抗腫瘤、抗血栓等藥理功效[5-7]，藤茶作為代用茶因其功效及回甘味逐漸被多數(shù)現(xiàn)代人接受和喜愛(ài)[8]。其中藤茶的抗氧化活性近年來(lái)研究較多，涉及生物醫(yī)藥、食品行業(yè)、畜禽養(yǎng)殖等。筆者總結(jié)了藤茶抗氧化活性成分的研究概況及應(yīng)用研究進(jìn)展，以期為藤茶的下一步深度開(kāi)發(fā)提供參考。

1 藤茶的抗氧化活性成分

藤茶的抗氧化活性成分主要有黃酮類、多糖類和多酚類。秦振華等[9]研究發(fā)現(xiàn)，藤茶具有比綠茶更優(yōu)異和穩(wěn)定的抗氧化活性。王元等[10]驗(yàn)證了藤茶具有確切的體外抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)藤茶80%醇提取物對(duì)1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH·）、羥基自由基（·OH）和超氧陰離子自由基（O2·-）均顯示出明顯的清除或抑制作用，且作用均呈一定的劑量依賴性。

1.1 藤茶黃酮

歐賢紅等[11]研究發(fā)現(xiàn)，藤茶中主要抗氧化活性成分為藤茶黃酮中的楊梅素和DMY，其均有不同程度的體外抗氧化效果，其中楊梅素對(duì)DPPH·和·OH的清除作用最強(qiáng)，紅細(xì)胞溶血率IC50為（2.91±0.28）mg/L;DMY對(duì)O2·-清除作用最強(qiáng)，IC50為（3.88±0.99）mg/L。甘小娜等[12]和李峰[13]也明確了藤茶中主要抗氧化活性成分為DMY。李峰[13]還發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素的抗氧化性呈現(xiàn)良好的劑量效應(yīng)關(guān)系，且其抗氧化能力相當(dāng)或略低于陽(yáng)性對(duì)照VC，對(duì)金屬離子的螯合能力較弱，小鼠試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)DMY能夠劑量依賴性地提高衰老小鼠各臟器指數(shù)以及衰老小鼠體內(nèi)各抗氧化酶表達(dá)水平，降低脂質(zhì)過(guò)氧化水平。秦亞茹[14]評(píng)價(jià)了DMY和二氫楊梅素降解產(chǎn)物混合物的體外抗氧化和促氧化活性，結(jié)果表明，DMY、藤茶總黃酮和二氫楊梅素降解產(chǎn)物混合物對(duì)ABTS（2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽）和DPPH·均有一定的清除能力，且DMY的自由基清除能力更強(qiáng)。

藤茶總黃酮有很好的抗氧化和降血脂效果，并能有效抑制肝臟脂肪變性[15]。研究表明，茶作為抗氧化劑，與體內(nèi)脂質(zhì)代謝具有密切聯(lián)系，具有調(diào)節(jié)血脂代謝的作用，與血脂和相關(guān)疾病關(guān)系密切[16]。李自強(qiáng)等[17]研究發(fā)現(xiàn)，藤茶中的總黃酮和二氫楊梅素通過(guò)調(diào)節(jié)血脂和切斷炎癥機(jī)制防止動(dòng)脈粥樣硬化來(lái)保障血管健康，通過(guò)抗血栓、降低血液黏度改善血液流變異常，通過(guò)控制血糖、降低紅細(xì)胞與血小板聚集指數(shù)調(diào)節(jié)血液成分，通過(guò)降低高血壓維持正常血流動(dòng)力，通過(guò)防止心肌損傷與減少細(xì)胞凋亡來(lái)保護(hù)心肌細(xì)胞。

藤茶中DMY能夠顯著改變腸道微生物群落的豐富度和多樣性，并調(diào)節(jié)腸道微生物群落的組成。目前藤茶活性成分DMY主要作用于胃腸道，口服生物利用度較低[18]。Xie等[19]對(duì)藤茶提取物進(jìn)行了小鼠試驗(yàn)，通過(guò)對(duì)小鼠的肝和腸組織分析、蛋白質(zhì)印跡分析、肝硫代巴比妥酸活性物質(zhì)的定量分析、腸道微生物分析以及血清和肝臟生化指標(biāo)的測(cè)定，結(jié)果表明，藤茶提取物可以降低血脂積聚和血清轉(zhuǎn)氨酶水平、血清和肝臟的脂質(zhì)水平、胰島素抵抗作用，提高肝臟抗氧化酶的水平，從而調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝，還可以改良腸道微生物群組成來(lái)增強(qiáng)的腸道屏障功能，對(duì)小腸結(jié)構(gòu)有保護(hù)作用。這說(shuō)明含有高含量二氫楊梅素的藤茶是預(yù)防非酒精性脂肪性肝病的潛在資源。

1.2 藤茶多糖

多糖也是植物中一種重要的抗氧化活性成分之一[20]，藤茶中含有豐富的多糖，老葉總糖含量可達(dá)1312%[21-22]。王慧賓等[22]研究發(fā)現(xiàn)，藤茶多糖是一種富含糖醛酸的多糖，其中性糖含量為40.11%，糖醛酸含量為4137%，在超聲功率1 000 W、提取溫度50 ℃、提取時(shí)間15 min、液料比30∶1的工藝條件下，藤茶嫩葉粗多糖得率最高，可達(dá)6.74%。羅祖友等[23-24]探討藤茶多糖的體內(nèi)外抗氧化作用，發(fā)現(xiàn)藤茶多糖具有一定的還原能力，一定濃度范圍內(nèi)具有顯著的體外抗活性氧能力并能抑制小鼠肝組織及肝線粒體丙二醛（MDA）的生成，還可減少紅細(xì)胞誘導(dǎo)溶血和肝線粒體腫脹程度，對(duì)小鼠體內(nèi)肝組織 MDA的生成產(chǎn)生顯著的抑制作用。

1.3 藤茶多酚

植物中的多酚類物質(zhì)也具有較好的抗氧化活性[25-27]，藤茶富含多酚類物質(zhì)。肖浩等[28]研究發(fā)現(xiàn)，在一定質(zhì)量濃度條件下，藤茶多酚對(duì)·OH和O2·-清除能力比VC強(qiáng)。王嵐等[29]研究發(fā)現(xiàn)，在80%乙醇、70 ℃恒溫水浴浸提45 min、浸提3次的工藝條件下，梵凈山野生藤茶多酚含量為23.64 mg/g。楊天友等[30]采用超聲波法提取藤茶多酚，發(fā)現(xiàn)在超聲功率300 W、超聲溫度50 ℃、超聲時(shí)間25 min、乙醇體積濃度60%的工藝條件下，藤茶多酚得率為6 146.4 mg/kg。蔣旭東等[26]研究?jī)?yōu)選出HPD-100型樹(shù)脂，在藤茶多酚質(zhì)量濃度2.4 g/L、流速2.0 BV/h、體積6.5 BV;洗脫劑乙醇體積濃度60%、流速3 BV/h、用量7.5 BV的純化條件下，藤茶多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)由29.9%提高至69.8%。

2 藤茶的抗氧化活性作用

藤茶與葛根、玉米低聚肽復(fù)合組方后具有解酒功能和保護(hù)肝臟的功效[31]。其作用機(jī)理可能與其中的抗氧化活性和抑制炎癥的相關(guān)成分有關(guān)。

藤茶抗氧化活性成分可以研發(fā)具有替代抗生素的新型飼料添加劑。陳麗等[32]研究藤茶提取物對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能、腹瀉率和抗氧化性能的影響，發(fā)現(xiàn)日糧中添加藤茶提取物能夠提高小鼠的生長(zhǎng)性能及抗氧化性能，降低小鼠的腹瀉率，對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能有改善作用，與抗生素組結(jié)果接近。

3 藤茶抗氧化活性的穩(wěn)定性研究

藤茶抗氧化活性穩(wěn)定性會(huì)受培育繁殖方式、藤茶不同組織、藤茶沖泡方式、提取條件（提取溶劑濃度、酸堿環(huán)境、金屬離子等）、體內(nèi)作用時(shí)間等因素的影響。

陳耀兵等[33] 測(cè)定普通扦插、兩段式扦插和組織培養(yǎng)藤茶葉片的抗氧化酶活性，綜合藤茶有效成分的含量和抗氧化酶活性，結(jié)果表明兩段式扦插法最佳。Jia等[34]研究發(fā)現(xiàn)藤茶葉提取物表現(xiàn)出較高的抗氧化能力，顯示出與合成抗氧化劑BHT相似的活性，其次是果實(shí)提取物。由此可以看出藤茶不同組織部位其抗氧化能力不同。秦振華等[9]研究不同沖泡方式和條件對(duì)藤茶抗氧化活性的影響，發(fā)現(xiàn)采用去離子水在80 ℃條件下單次沖泡 20 min，此時(shí)藤茶茶湯具有最優(yōu)的抗氧化活性，對(duì)羥基自由基的清除率可以達(dá)到81.9%。

提取條件對(duì)藤茶提取物的活性有較大影響。Muhammad等[35]研究發(fā)現(xiàn)萃取劑極性、提取時(shí)間和提取溫度等萃取參數(shù)對(duì)藤茶中活性物質(zhì)多酚類的提取效果及其藥理活性有顯著影響。提取溶劑濃度會(huì)影響藤茶活性物質(zhì)溶解度進(jìn)而影響活性成分的功效。江丹等[36]以乙醇為溶劑溶解藤茶提取物DMY，發(fā)現(xiàn)不同濃度溶解性不同，即藤茶提取物在60%～95% 乙醇中有較好的溶解性，在70%～80%的乙醇中溶解性最好。因此，可將藤茶提取物應(yīng)用于酒中。藤茶抗氧化活性成分DMY活性會(huì)受酸堿條件的影響，姚元勇等[37]研究發(fā)現(xiàn)在有氧且堿性溶液中，DMY分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，產(chǎn)生O2·-。黃酮類抗氧化活性物質(zhì)具有時(shí)間依賴性，Zheng等[38]以100 mg/kg劑量大鼠給藥DMY后，其血清抗DPPH·的還原水平在第4小時(shí)達(dá)到最高，第4小時(shí)后下降，總黃酮也具有同樣的時(shí)間依賴性，且抗氧化活性更高。藤茶抗氧化活性物質(zhì)二氫楊梅素還會(huì)與金屬離子相互作用進(jìn)而影響抗氧化活性，Wang等[39]采用紫外吸收和熒光猝滅光譜法研究了藤茶中提取的DMY在pH 3.0、5.0、7.0條件下與鐵離子（Fe（Ⅱ）和Fe（Ⅲ））的相互作用，研究了DMY對(duì)鐵離子穩(wěn)定性和溶解度的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鐵離子的存在改變了DMY紫外吸收光譜，鐵離子對(duì)DMY有熒光增強(qiáng)效應(yīng)，DMY還能夠保護(hù)Fe（Ⅱ）免受氧化，提高Fe（Ⅲ）的溶解度。藤茶中抗氧化活性成分DMY還原能力強(qiáng)、安全性高、穩(wěn)定性好，適合于食品添加劑和保健藥物的研發(fā)，在食品工業(yè)和醫(yī)藥領(lǐng)域有廣闊的發(fā)展前景。

4 抗氧化活性成分提取及其測(cè)定方法

目前有關(guān)藤茶抗氧化活性成分提取方法很多，相比傳統(tǒng)單純的溶劑萃取方法，與酶解、微波、超聲波等物理方法聯(lián)合使用成為趨勢(shì)。已有研究表明，超聲提取藤茶中二氫楊梅素含量較高，微波提取用時(shí)短，破壁式提取批次處理量大[40]。超聲微波雙輔助提取藤茶中抗氧化活性物質(zhì)的最佳提取工藝參數(shù)為乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)67%～68%、超聲提取溫度45～48 ℃、時(shí)間27～28 min、料液比1∶25，在此工藝下藤茶活性成分提取率最高[13]。70%乙醇超聲提取藤茶，該方法獲得的生物活性成分有較強(qiáng)的DPPH·清除能力和氧化自由基吸收能力（ORAC）[41]。Gao等[42]運(yùn)用高速逆流色譜（HSCCC）與高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-DAD-QTOF-MS/MS）的方法，對(duì)不同極性藤茶提取物中總黃酮含量及其抗氧化活性進(jìn)行了研究，首次報(bào)道藤茶中具有4種微量藤茶黃酮抗氧化劑，分別為 Quercetin-3-O-β-D-xylosid、Phloridzin、Phloretin、Kaempferol-3-O-α-L-rhamnoside，該方法有效地從復(fù)雜的天然草藥中綜合開(kāi)發(fā)抗氧化劑，為生物活性物質(zhì)的研究提供了一條從復(fù)雜體系中分離化合物的有效途徑，尤其是微量化合物的分離方法和手段為其他植物微量成分的分離提供參考。Wang等[43]開(kāi)發(fā)了新的綠色提取方法，采用β-環(huán)糊精（β-CD）和離子液體（IL）替代藤茶中二氫楊梅素傳統(tǒng)的提取方法，該方法（β-CD-UAE和IL-UAE）對(duì)藤茶DMY的提取效果優(yōu)于水和70%乙醇水溶液等常規(guī)溶劑，且容易應(yīng)用于食品或功能性食品的實(shí)驗(yàn)，以β-環(huán)糊精（β-CD）和離子液體（IL）為萃取劑，采用單因素和響應(yīng)面法優(yōu)化提取DMY的最佳工藝條件為3.6%β -CD、超聲時(shí)間8 min、液固比33∶1、超聲功率360 W，DMY的提取率可達(dá)40%左右。

藤茶抗氧化活性物質(zhì)含量測(cè)定方法較多，主要有分光光度法、高效液相色譜法。秦亞茹[14]運(yùn)用差示分光光度法檢測(cè)藤茶總黃酮含量發(fā)現(xiàn)，此方法能較準(zhǔn)確測(cè)定藤茶原料中總黃酮的含量，當(dāng)存在單一干擾物時(shí)，直接測(cè)定法和硝酸鋁比色法較好;當(dāng)存在復(fù)合干擾物時(shí)，三氯化鋁比色法測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確。王曉琴等[44]建立反相高效液相色譜（RP-HPLC）法可同時(shí)測(cè)定二氫楊梅素、楊梅素等成分含量，此方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確、重復(fù)性良好。張紅芹[45]采用氫核磁共振定量法測(cè)定二氫楊梅素的絕對(duì)含量，此方法操作簡(jiǎn)單、測(cè)試時(shí)間短。

5 藤茶抗氧化活性物質(zhì)的應(yīng)用

5.1 食品中的應(yīng)用

藤茶提取物抗氧化性在食品中已有較為廣泛的應(yīng)用。張喻等[46]綜述了二氫楊梅素調(diào)節(jié)糖脂代謝在食品中的應(yīng)用。張煊等[47]研究發(fā)現(xiàn)一定劑量的藤茶提取物可以顯著抑制素肉丸在冷藏期間的脂質(zhì)氧化和蛋白質(zhì)氧化。Zhang等[48]研究發(fā)現(xiàn)在冷凍肉餅中也有同樣的抑制效果。Ye等[49]研究發(fā)現(xiàn)在防止大豆油氧化方面，二氫楊梅素的效果比丁基羥基茴香醚（BHA）強(qiáng)。藤茶提取物在大豆油方面不如BHA或二氫楊梅素有效，在熟牛肉中，3種抗氧化劑均顯著降低其氧化水平，三者之間無(wú)差異。倪書(shū)干等[50]總結(jié)出二氫楊梅素在pH≤4、低溫以及避光條件下能穩(wěn)定存在，在高溫、金屬離子、光線以及堿性條件下均可加速二氫楊梅素的氧化，并研究了添加藤茶的酒類產(chǎn)品的貨架期，結(jié)果表明，添加藤茶提取物的酒體顏色在不同環(huán)境下變化趨勢(shì)不同，酒在避光及室內(nèi)相對(duì)恒定條件下，色度值呈現(xiàn)出先較快速上升，然后長(zhǎng)時(shí)間維持在較高水平，在高溫、光照條件下，穩(wěn)定性非常差，由此，在不采用其他抑制或防護(hù)藤茶穩(wěn)定性的前提下，藤茶提取物是不適合作配制酒。

藤茶提取物二氫楊梅素還可以顯著抑制面包中丙烯酰胺的形成，尤其是低劑量藤茶提取物（1.25 g/kg），使丙烯酰胺的形成減少了58.23%，且對(duì)面包的色澤和質(zhì)構(gòu)有顯著影響[51]。添加藤茶提取物可用于開(kāi)發(fā)低丙烯酰胺含量的新型健康面包產(chǎn)品，并可將其應(yīng)用于開(kāi)發(fā)添加藤茶提取物的低丙烯酰胺含量的新型健康食品。

5.2 畜禽生產(chǎn)上的應(yīng)用

藤茶抗氧化活性物質(zhì)對(duì)于脂肪氧合酶的粗酶活性抑制作用較強(qiáng)，能夠預(yù)防氧化性損傷，用它作為天然抗氧化劑，可以提高動(dòng)物雞肉的品質(zhì)，防止熱反應(yīng)、高溫所帶來(lái)的動(dòng)物肌肉品質(zhì)下降，強(qiáng)化抑菌殺菌作用[52]。

已有研究發(fā)現(xiàn)，日糧中長(zhǎng)期添加0.03%藤茶提取物可以顯著改變肥育豬血清游離氨基酸組成，并一定程度改善豬肉嫩度[53]。

5.3 與納米材料聯(lián)用

藤茶提取物可以與納米材料聯(lián)用，呈現(xiàn)出更好的抗氧化活性。羅帆等[54]以藤茶黃酮為原料，研究了采用溶液燃燒法綠色制備納米氧化鋅（Nano ZnO）粉末的抗氧化性能和抑菌性能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以藤茶黃酮為生物模板制備的Nano ZnO粒子結(jié)晶度良好，且具有良好的抗氧化活性，2.5 g/L的Nano ZnO溶液對(duì)DPPH·的清除率為9824%。

6 展望

食品抗氧化劑可以阻止或延緩食品氧化變質(zhì)、提高食品穩(wěn)定性、延長(zhǎng)貯存期等功能。抗氧化劑分為天然抗氧化劑和合成抗氧化劑，目前，食品中應(yīng)用的合成抗氧化劑有丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）和特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）等。合成抗氧化劑具有一系列的安全性問(wèn)題，例如自身氧化生成過(guò)氧化氫等有害物質(zhì)，使得消費(fèi)者更青睞于天然抗氧化劑。由此開(kāi)發(fā)更多的天然抗氧化劑顯得尤為重要。

目前天然抗氧化劑有維生素A、C、E、P、多酚等，藤茶中含有豐富的黃酮類、多酚類、多糖類等抗氧化活性物質(zhì)，且具有很好的抗超氧陰離子能力[55]，將這些抗氧化活性物質(zhì)加以充分開(kāi)發(fā)利用，開(kāi)發(fā)新的天然食品抗氧化劑，對(duì)豐富食品添加劑種類、滿足消費(fèi)者對(duì)綠色天然產(chǎn)物的健康追求具有重要意義。

二氫楊梅素是藤茶中重要的抗氧化活性物質(zhì)，目前對(duì)其的研究主要集中于提取、功效分析等方面，需進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行更深入的基礎(chǔ)研究。Li等[56]對(duì)藤茶二氫楊梅素高產(chǎn)相關(guān)基因進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組分析，為深入研究二氫楊梅素生物合成相關(guān)基因在藤茶中表達(dá)提供了參考依據(jù)。但目前對(duì)藤茶活性成分二氫楊梅素代謝機(jī)制研究不清楚，因此對(duì)藤茶中抗氧化活性成分的深入研究顯得尤為重要。

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