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    新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量管理研究

    2021-09-10 07:54:54王迪
    醫(yī)學(xué)前沿 2021年5期
    關(guān)鍵詞:新冠病毒生物安全質(zhì)量控制

    王迪

    摘要 隨著疫情在全世界范圍內(nèi)的傳播,新冠病毒的檢測對(duì)實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境、實(shí)驗(yàn)室人員的能力都需要較高的要求。而實(shí)驗(yàn)室作為新冠病毒感染標(biāo)本最集中的區(qū)域,其特殊的操作流程需要綜合考慮生物安全性,同時(shí)保證實(shí)驗(yàn)室的檢測質(zhì)量與報(bào)告的及時(shí)性。

    關(guān)鍵詞 新冠病毒;質(zhì)量控制;生物安全

    2019新型冠狀病毒(2019-nCoV/SARS-CoV-2,以下簡稱新冠病毒)屬于冠狀病毒科,β冠狀病毒屬,是一種單股正鏈RNA病毒。SARS-CoV-2對(duì)紫外線和熱敏感,在56℃加熱30分鐘即可失活,對(duì)乙醚、75%乙醇、氯、過氧乙酸和氯仿等脂溶性消毒劑敏感,但氯己定不能有效滅活病毒(1)。國家衛(wèi)健委15日發(fā)布《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第八版)》,其中明確,新型冠狀病毒核酸檢測陽性為確診的首要標(biāo)準(zhǔn)(2)。由于新冠病毒為新發(fā)病毒,人群普遍易感,在核酸檢測過程中的各個(gè)環(huán)節(jié)中存在較多需要注意的問題。本人圍繞目前新冠病毒核酸檢測中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)、生物安全、月度質(zhì)控等進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室評(píng)述。

    1.新冠病毒核酸檢測方法及注意事項(xiàng)

    1.1新型冠狀病毒感染的基因組是單股正鏈RNA,進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)需要將RNA轉(zhuǎn)變成DNA,然后進(jìn)行DNA 的擴(kuò)增,即為RT-PCR,目前實(shí)時(shí)熒光RT-PCR是新冠病毒檢測使用最為普遍的方法。根據(jù)新型冠狀病毒肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)指南(第六版)核酸檢測方法主要針對(duì)新型冠狀病毒基因組中開放讀碼框1ab和核殼蛋白N(3)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)室新冠病毒核酸檢測可為新冠的診斷提供直接證據(jù),更加需要嚴(yán)格要求,規(guī)范操作,注意實(shí)驗(yàn)過程中的操作細(xì)節(jié)。從試劑的準(zhǔn)備來說,從冰箱冷凍取出的試劑一定要混勻離心,如果試劑融化后沒有混勻,這時(shí)候取出的試劑不是均一的,會(huì)影響后面的擴(kuò)增。用于新冠檢測的標(biāo)本應(yīng)盡快進(jìn)行檢測,24小時(shí)內(nèi)能檢測的標(biāo)本可置于4℃保存,24小時(shí)內(nèi)無法檢測的標(biāo)本則應(yīng)置于-70℃或以下保存(4)。

    1.3 現(xiàn)核酸提取使用較多的方法為磁珠分離法盒離心柱分離法。本實(shí)驗(yàn)室采用磁珠分離法提取核酸。核酸提取是檢測結(jié)果精密度的保證,提取使用的標(biāo)本量和檢測過程應(yīng)按照試劑說明書進(jìn)行,因?yàn)檫@些因素都可能對(duì)核酸的提取成功與否產(chǎn)生影響。同時(shí)在提取儀器使用過程中應(yīng)嚴(yán)格按照要求進(jìn)行設(shè)備的清潔與維護(hù),避免造成批次內(nèi)和批次間的污染,并在提取過程中采用3個(gè)空白對(duì)照隨機(jī)放于樣本中參與提取過程以監(jiān)控可能發(fā)生的環(huán)境污染。每次實(shí)驗(yàn)后用75%的酒精濕巾擦拭提取儀的工作臺(tái)面,嚴(yán)禁用酒精擦拭機(jī)器的有機(jī)玻璃部分。

    1.4 根據(jù)試劑說明書設(shè)置核酸擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)程序,確保時(shí)間、溫度、循環(huán)數(shù)等設(shè)置正確。定量PCR預(yù)混液跟核酸提取物一定要混勻,盡量避免發(fā)生光學(xué)混勻的現(xiàn)象,還有上機(jī)的反應(yīng)體系里盡量不要有大的氣泡,有氣泡容易形成折射干擾熒光采集,可以采用八連管和96孔板離心機(jī)離心去除氣泡,最后,在加完試劑上機(jī)前,一定要檢查是否已經(jīng)密封完全,防止試劑的蒸發(fā),導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室核酸的污染與實(shí)驗(yàn)的失敗。

    2.新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室的生物安全

    2021年4月15日。中華人民共和國生物安全法正式生效。

    隨著病毒檢測工作量與日俱增,實(shí)驗(yàn)室是感染性標(biāo)本最集中的區(qū)域,其操作環(huán)境具有一定的生物危害性,加強(qiáng)和普及生物安全只是對(duì)每一位實(shí)驗(yàn)員都至關(guān)重要,進(jìn)一步規(guī)范生物安全的管理,保障實(shí)驗(yàn)室工作的正常進(jìn)行。根據(jù)目前掌握的新冠病毒的生物學(xué)特點(diǎn)、流行病學(xué)特征、致病性、臨床表現(xiàn)等信息,該病原體暫按病原微生物危害程度分類中第二類病原微生物進(jìn)行管理。

    隨著對(duì)新冠病毒研究的深入,合理正確使用PPE可以減少實(shí)驗(yàn)人員過度防護(hù)中帶來的不適和恐懼的心理,應(yīng)該把更多的關(guān)注點(diǎn)放在實(shí)驗(yàn)人員操作的合理性和規(guī)范化程度,以及對(duì)生物安全柜、核酸提取儀等實(shí)驗(yàn)儀器的正確規(guī)范的使用來保證實(shí)驗(yàn)室的生物安全性。

    3.質(zhì)量控制

    實(shí)驗(yàn)室工作質(zhì)量的保證應(yīng)覆蓋整個(gè)核酸檢測的流程的各個(gè)環(huán)節(jié),室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量控制都是質(zhì)量保證的重要部分。為了監(jiān)測新冠核酸擴(kuò)增檢測的分析中環(huán)節(jié),即核酸的提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取質(zhì)量控制方法和步驟,為了監(jiān)測更大范圍的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)如結(jié)果分析和解釋,并客觀比較本實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果與其他實(shí)驗(yàn)室的差異性,實(shí)驗(yàn)室則需常態(tài)化參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)/能力驗(yàn)證(5)。

    本實(shí)驗(yàn)室采用室內(nèi)質(zhì)控品和日常臨床標(biāo)本同時(shí)檢測的方法來判定批次檢測標(biāo)本的檢測結(jié)果是否在控。每批檢測設(shè)立1份弱陽性質(zhì)控品(第三方質(zhì)控品),1份空白對(duì)照品(生理鹽水),1份陰性對(duì)照,弱陽性質(zhì)控品與空白對(duì)照品放于樣本中間參與提取過程。弱陽性質(zhì)控定為陽性,兩個(gè)陰性質(zhì)控全部測定為陰性,視為在控,反之則為失控,應(yīng)立即分析原因,必要時(shí)重新檢測樣品(6)。除此之外,也要考慮實(shí)驗(yàn)室管理的多種要素,人員操作規(guī)范、機(jī)器日常維護(hù)和保養(yǎng)、標(biāo)本的質(zhì)量、使用耗材和試劑等都有可能出現(xiàn)問題,要全方位考慮失控原因。

    4.結(jié)論

    核酸檢測結(jié)果是確診新冠病毒的金標(biāo)準(zhǔn),從事核酸檢測的實(shí)驗(yàn)室必須有嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理體系,實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證要覆蓋到整個(gè)檢測的流程,從而保證實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和及時(shí)性。

    隨著國家研究團(tuán)隊(duì)對(duì)新冠的深入研究,更靈敏的核酸檢測方法如數(shù)字PCR也開始應(yīng)用于新冠病毒的核酸檢測,同時(shí)探索更加高效的實(shí)驗(yàn)室診斷方法,有望在新冠病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測方面大大提高檢測效率,降低實(shí)驗(yàn)室的時(shí)間成本與耗材成本。

    參考文獻(xiàn)

    [1]國家衛(wèi)生健康委和中醫(yī)藥局 《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版修訂版)

    [2]國家衛(wèi)生健康委和中醫(yī)藥局 《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第八版修訂版)》

    [3][4]新型冠狀病毒肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)指南(第六版)

    [5]國務(wù)院應(yīng)對(duì)新型冠狀病毒肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制綜合組.關(guān)于進(jìn)一步做好疫情期間新冠病毒檢測有關(guān)工作的通知.聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制綜發(fā)(2020)152號(hào)

    [6]中華人民共和國衛(wèi)生健康委員會(huì).國家衛(wèi)生健康委辦公廳關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展新型冠狀病毒核酸檢測有關(guān)要求的通知.國衛(wèi)辦醫(yī)函{2020}53號(hào)

    (常州市武進(jìn)區(qū)疾病預(yù)防控制中心 江蘇常州 213100)

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