小鼠痔瘡模型構(gòu)建方法比較及其中藥治療效果評(píng)價(jià)

郭露寒 涂蓮茜 胡航軍 金衛(wèi)華

摘要：比較了冰醋酸和巴豆油兩種試劑用于小鼠痔瘡模型構(gòu)建的效果，用地龍商路藥膏對(duì)痔瘡模型小鼠進(jìn)行治療。結(jié)果顯示使用99%濃度冰醋酸建立小鼠痔瘡模型，效果差異不大;商陸與地龍質(zhì)量比為4： 1時(shí)，治療痔瘡模型小鼠效果最佳。

關(guān)鍵詞：小鼠痔瘡模型;商陸;地龍

痔瘡動(dòng)物模型的構(gòu)建方法中，醋酸法、巴豆油法、細(xì)菌法等，其中因醋酸法、巴豆油法操作簡單，被廣泛使用[1]。地龍?jiān)诿耖g應(yīng)用于治療痔瘡具有特效[2]，商陸別名“見腫消”，其性寒，味苦，有毒;有治毒瘡、通二便、消水腫的功效[3]。在此，對(duì)不同的小鼠痔瘡模型構(gòu)建方法進(jìn)行了比較，同時(shí)，采用商路和地龍熬制的藥膏對(duì)痔瘡模型小鼠進(jìn)行了治療效果評(píng)估，目的是為痔瘡模型小鼠的構(gòu)建和治療藥物開發(fā)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)昆明鼠，體重30g（±5）;華中農(nóng)業(yè)大學(xué)提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（鄂）2015-0019。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥材 商陸、地龍。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑

1.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器 粉碎機(jī);電熱鼓風(fēng)干燥箱;電子天平;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器;集熱式恒溫加熱磁力攪拌器;體視鏡;循環(huán)水式多用真空泵;高速冷凍離心機(jī);恒溫水浴鍋。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑 HAc、鹽酸、無水乙醚、無水乙醇、十八醇、單硬脂酸甘油酯、液體石蠟、三乙醇胺、白凡士林、甘油、SDS、NaCl;巴豆油;馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 使用冰醋酸建小鼠痔瘡模型

體重規(guī)格30g（±5）的小白鼠，分4組（10只/組），分別用99%、75%、50%、25%濃度冰醋酸浸潤直徑為0.5cm的圓形濾紙片，貼于小鼠肛周，30秒后重復(fù)用藥一次，以生理鹽水作空白對(duì)照，48h后進(jìn)行建模效果評(píng)價(jià)。

1.3.2 使用巴豆油建小鼠痔瘡模型

10mL巴豆油加無水乙醚90mL，攪拌均勻后，用棉簽蘸取，插入小鼠肛門約20mm處，保持30s，同時(shí)慢速捻轉(zhuǎn)5圈，建立小鼠肛門巴豆油腫脹模型。以生理鹽水作空白對(duì)照，6小時(shí)后檢查建模效果。

1.3.3 建模效果評(píng)價(jià)方法

以上述方式建模6組小鼠，將小鼠頸椎脫臼處死，切下其肛門直腸1.5cm左右，將所切部分稱濕重后，在烘干16h稱干重，計(jì)算小鼠肛門炎癥程度，其中干濕重均取平均值。

1.3.4 地龍商陸軟膏的制備

將商陸和地龍烘干至恒重后粉碎，稱取15g于燒杯中混合均勻，其中商陸與地龍的質(zhì)量比分別為1：4、4：1、3：2、2：3、1：1，用85%的乙醇300mL加熱冷凝回流2h，抽濾濾液并減壓蒸餾濃縮至浸膏狀。用十八醇1.0g、單硬脂酸甘油酯0.5g、液體石蠟1.0g、三乙醇胺0.22g、白凡士林1.0g、SDS 0.2g、甘油1.0g、蒸餾水5.0g，加熱攪拌成藥膏基質(zhì)，每克基質(zhì)中分別加入0.0g、0.1g、0.5g、1.0g地龍商陸浸膏，研磨均勻后即得地龍商陸軟膏。

1.3.5痔瘡模型小鼠的治療

隨機(jī)選取以上由99%冰醋酸方法構(gòu)建的小鼠痔瘡模型，分為8組（10只/組），其中5組用含不同質(zhì)量比的商陸、地龍制成的軟膏進(jìn)行肛周涂抹給藥，商陸與地龍的質(zhì)量比為1：4的為治療組1，4：1的為治療組2，3：2為治療組3，2：3為治療組4，1：1為治療組5，以未加浸膏的軟膏基質(zhì)作空白組，馬應(yīng)龍痔瘡膏給藥組為陽性對(duì)照組，不給任何藥物治療組為模型組，1次給藥0.5g，1天2次，連續(xù)給藥7天后第8天觀察藥效。

1.3.6 痔瘡模型小鼠治療效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)：[4]。

2 結(jié)果

2.1 不同方法建模后炎癥程度結(jié)果

巴豆油和冰醋酸造模后，小鼠肛周炎癥明顯加重，計(jì)算結(jié)果顯示巴豆油和99%冰醋酸的促炎作用差異不大，但從干濕重?cái)?shù)據(jù)上看，醋酸的促炎效果略強(qiáng)，隨著醋酸濃度下降，炎癥程度也相應(yīng)下降。

2.2 地龍商陸軟膏對(duì)痔瘡小鼠的治療效果

1：1、3：2和4：1的痔瘡藥膏均有助于小鼠肛周潰爛愈合，商陸與地龍的質(zhì)量比為4：1時(shí)效果最好，按該比例配制的痔瘡軟膏使肛周潰瘍第Ⅲ等級(jí)的小鼠痔瘡模型均愈合至Ⅱ等級(jí)，Ⅱ等級(jí)和Ⅰ等級(jí)的小鼠痔瘡模型基本治愈。

3結(jié)論

高濃度冰醋酸和巴豆油建模效果區(qū)別不大，可以根據(jù)實(shí)際情況采用不同建模方法。

商陸與地龍合用，當(dāng)商陸的使用質(zhì)量大于地龍時(shí)，能有效消除痔瘡模型小鼠的潰瘍和紅腫，具有良好的應(yīng)用開發(fā)價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1]馬宗國，江南，余夢(mèng)瑤，等. 痔瘡動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J]. 中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2010，18（5）：446-450.

[2]梁韶明，周春艷. 蛐蟮治療痔瘡72例[J]. 中國民間療法，2006，14（12）：63.

[3]國家藥典委員會(huì) . 中國藥典 [M]. 一部 .2015.

[4]韓向暉，陸金根，曹永清，等.復(fù)黃片防治痔瘡的藥效學(xué)研究[J]. 上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，22（5）：59-62.

基金項(xiàng)目：武漢東湖學(xué)院2019年度“東湖未來之星”大學(xué)生科研基金項(xiàng)目;武漢東湖學(xué)院2019年校級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（xc2019079）.

作者簡介：金衛(wèi)華（1976-），男，講師，碩士，研究方向：生物制藥。

武漢東湖學(xué)院 湖北 武漢 430212