醋炙法對商陸毒性和藥效影響的實驗研究

欽建偉 陳 琳

（蘇州大學附屬第一醫(yī)院，江蘇蘇州215006）

醋炙法對商陸毒性和藥效影響的實驗研究

欽建偉 陳 琳

（蘇州大學附屬第一醫(yī)院，江蘇蘇州215006）

目的：研究商陸醋炙前后毒性和藥效的變化情況。方法：按照2010版《中國藥典》商陸項下炮制方法——醋炙法對商陸進行炮制，得炮制品醋商陸。給予小鼠單次不同劑量生、醋商陸煎液灌胃，3h后檢測小鼠消化系統(tǒng)臟器改變情況。給予家兔不同濃度生商陸混懸液和15.0%醋商陸混懸液滴眼，檢測藥物對家兔眼結(jié)膜的刺激性強度。大鼠制作鹽水負荷模型，分別給予同體積生理鹽水、氫氯噻嗪和生商陸、醋商陸煎液灌胃后，比較各組5h總尿量。小鼠隨機分組后分別灌胃同體積加入墨汁的生理鹽水、10%芒硝溶液和生商陸、醋商陸煎液，15min后檢測墨汁推進率。結(jié)果：單次30倍日用量（35.1g/kg）灌胃生商陸后，小鼠消化系統(tǒng)臟器病變率為66.7%，而醋商陸各劑量組未見明顯病變。各劑量生商陸混懸液滴眼后，家兔均表現(xiàn)出充血、水腫、分泌物等眼結(jié)膜刺激性，有確切量效關系；等劑量生、醋商陸混懸液滴眼后，生商陸組眼結(jié)膜刺激性強于醋商陸組。大鼠灌胃生、醋商陸后，尿量均增加，高劑量醋商陸組尿量顯著高于高劑量生商陸組。小鼠灌胃生、醋商陸后小腸墨汁推進率均明顯高于生理鹽水組，生商陸組明顯高于醋商陸組。結(jié)論：醋炙法能夠降低商陸對黏膜的刺激性，增強利尿功效，緩和瀉下作用。

商陸 醋炙 藥理學 毒性

商陸系商陸科植物商陸 Phytolacca acinosa Roxb.或垂序商陸Phytolacca americana L.的干燥根，為歷版《中國藥典》收載品種，具有逐水消腫、通利二便的功效。但由于其藥性峻猛、毒副作用較大，故須經(jīng)嚴格炮制后方可入藥。商陸的炮制工藝以醋炙為主[1]，本研究對商陸醋炙前后的黏膜刺激性以及利尿、瀉下作用的變化情況進行了對比研究，以期驗證該炮制方法的科學性。

1 實驗材料

1.1 藥材 生商陸購自安徽省亳州市永剛飲片有限公司（山西產(chǎn)，批號20100122），經(jīng)南京中醫(yī)藥大學王春根教授鑒定為商陸科植物商陸Phytolacca acinosa Roxb.的干燥塊根。取生商陸飲片適量，按2010年版《中國藥典》“醋炙法”項下炮制：加入30%醋拌勻，悶潤至醋被吸盡，置炒制容器內(nèi)，120℃炒制30min，取出放涼，得醋商陸[2]。

分別取生商陸、醋商陸飲片100g，加水800mL煎煮30min，過濾。濾渣再加水600mL煎煮30min，過濾。合并濾液，濃縮至100mL，得1g/mL水煎液，作為原液。家兔眼刺激性試驗中將生商陸、醋商陸飲片真空干燥并粉碎過200目篩，備用。

1.2 動物 ICR雄性小鼠，體重（20±2）g，SPF級；SD雄性大鼠，體重（200±20）g，SPF級。大鼠小鼠均由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，許可證號SCXK（滬）2007-0005。大耳白種家兔，雌雄不限，體重（1.5±0.2）kg，健康，雙眼清亮無紅腫，由南京市青龍山動物繁殖場提供，許可證號SCXK（蘇）2007-0008。

1.3 試劑 生理鹽水 （南京小營藥業(yè)集團有限公司，批號2010031702）；甲醛（分析純，上海久億化學試劑有限公司，批號20100301）。

1.4 儀器 BP211D電子天平 （德國Sartorius公司），注射器，兔籠，大鼠代謝籠。

2 實驗方法

2.1 生商陸和醋商陸單次不同劑量給藥后對小鼠消化道黏膜的刺激作用 ICR小鼠實驗前禁食（不禁水）12h，按體重隨機分為9組，每組6只，分別為生理鹽水組、生商陸水煎液（1.17、11.7、23.4、35.1g/kg，分別相當于臨床日用劑量的1、10、20、30倍）組和醋商陸水煎液（1.17、11.7、23.4、35.1g/kg，分別相當于臨床日用劑量的1、10、20、30倍）組。各組小鼠灌胃給藥1次，生理鹽水組灌胃等容量生理鹽水，3h后采集各組小鼠食管、胃、十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸等消化系統(tǒng)臟器，生理鹽水沖洗，并立即浸泡在4%甲醛溶液中，固定3d。常規(guī)取材，脫水，石蠟包埋，制片，HE染色，光學顯微鏡下閱片，檢查有無毒性作用引起上述臟器病變。

2.2 生商陸和醋商陸對家兔眼結(jié)膜刺激作用 取生商陸飲片適量，粉碎后過200目篩，用生理鹽水分別配成7.5%、10%、12.5%和15%濃度的混懸液，調(diào)節(jié)pH值至中性，備用。取醋商陸飲片適量，粉碎后過200目篩，用生理鹽水配成15%濃度的混懸液，調(diào)節(jié)pH值至中性，備用。

家兔隨機分為生理鹽水組、各濃度生品組、15%醋商陸組，每組6只。將兔固定于兔籠內(nèi)，試驗時撩起上下眼瞼，使成杯狀，將藥液分別滴加到兔眼中，每只眼給藥50μL，生理鹽水組予生理鹽水滴眼。給藥后，輕輕使上下眼瞼被動閉合10s，使藥液和眼充分接觸，10min后用20mL左右生理鹽水沖洗眼睛至眼中無任何異物，隨后觀察3h內(nèi)兔眼情況，拍照記錄家兔眼的刺激反應情況并打分評定眼刺激性強度，家兔眼結(jié)膜刺激性試驗評分標準見表1。

2.3 生商陸和醋商陸的利尿作用 將雄性SD大鼠稱重后，隨即放入已標號的代謝籠中（1只/籠），喂養(yǎng)1～2d，自由飲水，觀察大鼠尿量是否穩(wěn)定。實驗前18h禁食，自由飲水。用藥前以2.5mL/100g蒸餾水灌胃，收集2h尿量，尿量超過蒸餾水灌胃量40%者為合格動物。

表1 家兔眼結(jié)膜刺激試驗評分標準

合格的SD大鼠按體重隨機分為6組，每組8只，分別為生理鹽水組、陽性藥組（0.009g/kg氫氯噻嗪）、生商陸和醋商陸低劑量組（相當于臨床日用劑量，即0.8g/kg）、生商陸和醋商陸高劑量組（相當于臨床日用劑量的2倍，即1.6g/kg）。實驗前將各組動物禁食不禁水24h，每組按2.5mL/100g生理鹽水灌胃，形成鹽水負荷模型。30min后，各給藥組均按1mL/100g體重給藥，生理鹽水組給予同等體積的生理鹽水。給藥后，立即將大鼠放入代謝籠中，每隔1h計1次尿量，共計5h，收集5h總尿量。[3]335

2.4 生商陸和醋商陸的瀉下作用 ICR小鼠按體重隨機分為4組，每組10只，分別為生理鹽水組、陽性藥組（10%芒硝）、生商陸和醋商陸組（相當于臨床日用劑量，即0.8g/kg）。實驗前將各組藥液中均滴入數(shù)滴墨汁起指示作用，實驗小鼠禁食不禁水24h，每組按0.2mL/10g體重灌胃給藥，生理鹽水組給予同等體積的生理鹽水。15min后脫頸處死，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端至幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上輕輕擺成直線，測量所取腸管首尾長度為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿的距離作為“墨汁在腸內(nèi)推進距離”。用公式計算墨汁推進百分率，并注意觀察各組小鼠小腸容積膨脹程度差異。[3]326

3 實驗結(jié)果

3.1 生商陸和醋商陸單次不同劑量給藥后對小鼠消化道黏膜的刺激性比較 病理切片結(jié)果顯示，單次大劑量給藥后商陸會造成的病變主要位于胃。生商陸35.1g/kg組 （相當于臨床日用劑量的 30倍）有4只小鼠出現(xiàn)局部胃黏膜上皮細胞壞死、脫落，可見小灶狀出血，病變率為66.7%；生商陸23.4g/kg組（相當于臨床日用劑量的 20倍）有 2只小鼠出現(xiàn)局部胃黏膜上皮細胞壞死、脫落，病變率為33.3%；生商陸11.7、1.17g/kg組（分別相當于臨床日用劑量的10倍、1倍）未見明顯病變。而醋商陸各劑量組均未見明顯病變，表明商陸經(jīng)醋炙后對小鼠胃黏膜的刺激性顯著減弱。見圖1。

圖1 各組大鼠胃組織改變情況（HE染色，×200倍）

3.2 生商陸和醋商陸對家兔眼結(jié)膜的刺激性比較 見表2。結(jié)果顯示，在一定濃度范圍內(nèi)，生商陸混懸液的濃度和對家兔的眼刺激性強度呈現(xiàn)確切的量-效關系，即濃度越高，對兔眼的刺激性越強。濃度達到15%時，對兔眼結(jié)膜具有重度刺激性；與15%濃度生商陸混懸液比較，15%濃度醋商陸混懸液對兔眼的刺激性強度顯著減弱（P＜0.01）。

3.3 生商陸和醋商陸的利尿作用比較 見表3。結(jié)果顯示，生商陸和醋商陸低劑量組排尿量未見顯著差異，生商陸和醋商陸高劑量組在給藥3h后排尿量差異顯著（P＜0.05），醋商陸組排尿量顯著高于生商陸組，表明商陸經(jīng)醋炙后其利尿功效增強。

3.4 生商陸和醋商陸瀉下作用比較 見表4。結(jié)果顯示，與生商陸比較，醋商陸對小鼠小腸的推動作用減弱（P＜0.01），即商陸經(jīng)醋炙后瀉下作用緩和。

4 討論

商陸臨床中毒癥狀主要表現(xiàn)為胃腸道反應，如惡心嘔吐、腹痛腹瀉，嚴重者可出現(xiàn)胃腸道糜爛、潰瘍及出血等[4]。本研究通過小鼠單次大劑量給藥后消化系統(tǒng)臟器病理切片檢查可知，這種急性刺激性作用主要作用于胃。本研究結(jié)果亦表明，商陸經(jīng)醋炙后，對動物胃黏膜的刺激性顯著減弱。

除了傳統(tǒng)的口服中毒外，商陸粉末與眼、鼻和口腔黏膜接觸會出現(xiàn)紅腫疼痛等局部刺激性反應。本研究亦通過家兔眼結(jié)膜刺激性試驗考察了商陸醋炙前后的刺激性作用變化，結(jié)果表明，商陸經(jīng)醋炙后，對家兔眼結(jié)膜的刺激性顯著減弱。

商陸為一味峻下逐水藥，功能逐水消腫、通利二便。本研究用大鼠代謝籠試驗對同一品種商陸高低劑量組、同一劑量生品商陸和醋炙商陸的利尿作用進行了對比研究，采用小鼠小腸墨汁推進試驗對商陸醋炙前后的瀉下作用進行了對比研究。結(jié)果顯示，商陸在一定范圍內(nèi)劑量越高，利尿作用越強，表明商陸的功效之一是利尿。商陸經(jīng)醋炙后瀉下作用有所緩和，利尿作用有所增強。

表2 各組家兔眼結(jié)膜刺激性評分比較（±s）

表2 各組家兔眼結(jié)膜刺激性評分比較（±s）

注：與生理鹽水組比較，**P＜0.01；與7.5%生商陸組比較，▲▲P＜0.01；與15.0%生商陸組比較，##P＜0.01。

得分 平均得分（x ± s）組別 動物數(shù)（只）生理鹽水組 6 7 . 5 %生商陸組 6 1 0 . 0 %生商陸組 6充血 水腫 分泌物0 0 0 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 3 3 4 1 . 6 7 ± 0 . 4 9**8 1 0 6 4 . 0 0 ± 0 . 1 6**▲▲1 2 . 5 %生商陸組 6 1 5 . 0 %生商陸組 6 1 0 2 0 1 2 7 . 0 0 ± 0 . 0 9**▲▲1 3 3 0 1 2 9 . 1 7 ± 0 . 0 8**▲▲1 5 . 0 %醋商陸組 6 1 0 1 5 7 5 . 3 3 ± 0 . 1 0**##

表3 各組大鼠給藥后不同時段尿量比較（±s）

表3 各組大鼠給藥后不同時段尿量比較（±s）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與等劑量生商陸組比較，▲P＜0.05；與同一品種低劑量組比較，●P＜0.05，●●P＜0.01。

0～5 h劑量（g / k g）組別 動物數(shù)（只）生理鹽水組 8氫氯噻嗪組 8給藥后尿量（m L）0～2 h 0～3 h 0～4 h 0 . 0 0 9 3 . 8 5 ± 0 . 9 7**0～1 h - 1 . 7 8 ± 0 . 3 7 2 . 8 3 ± 0 . 5 0 3 . 1 0 ± 0 . 3 4 3 . 2 0 ± 0 . 4 0 3 . 2 3 ± 0 . 3 9 5 . 0 8 ± 0 . 8 6**6 . 0 3 ± 0 . 7 8**6 . 9 0 ± 1 . 3 4**7 . 0 5 ± 1 . 3 4**生商陸低劑量組 8生商陸高劑量組 8 0 . 8 2 . 3 2 ± 0 . 4 3*3 . 4 8 ± 0 . 4 1*4 . 0 8 ± 0 . 3 4**4 . 2 7 ± 0 . 3 0**4 . 2 7 ± 0 . 3 0**1 . 6 2 . 7 5 ± 0 . 4 8**4 . 2 2 ± 0 . 4 4**●4 . 7 0 ± 0 . 2 8**●4 . 9 5 ± 0 . 3 0**●5 . 0 3 ± 0 . 2 4**●醋商陸低劑量組 8醋商陸高劑量組 8 0 . 8 2 . 2 3 ± 0 . 4 0 3 . 5 2 ± 0 . 4 0*4 . 0 7 ± 0 . 3 2**4 . 1 5 ± 0 . 2 7**4 . 1 8 ± 0 . 2 8**1 . 6 2 . 9 7 ± 0 . 3 7**●4 . 3 8 ± 0 . 3 7**●5 . 0 3 ± 0 . 1 9**▲●●5 . 3 3 ± 0 . 2 4**▲●●5 . 3 5 ± 0 . 2 2**▲●●

表4 各組小鼠小腸墨汁推進運動情況與腸容積變化情況比較（±s）

表4 各組小鼠小腸墨汁推進運動情況與腸容積變化情況比較（±s）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與生商陸組比較，▲▲P＜0.01。

組別 動物數(shù)（只）生理鹽水組 1 0 1 0 %芒硝組 1 0生商陸組 1 0醋商陸組 1 0小腸總長度（c m）4 4 . 0 8 ± 1 . 9 8墨汁推進距離（c m） 墨汁推進率（%）腸容積變化2 5 . 7 9 ± 1 . 1 1 5 8 . 6 2 ± 3 . 6 6無變化4 3 . 8 6 ± 2 . 4 7 4 4 . 7 0 ± 2 . 3 0 3 2 . 4 6 ± 2 . 0 3 7 2 . 6 1 ± 2 . 6 9**稍膨脹4 3 . 6 9 ± 2 . 8 8 2 7 . 7 0 ± 2 . 7 1 6 3 . 3 6 ± 3 . 9 5*▲▲稍膨脹3 1 . 8 9 ± 2 . 1 7 7 2 . 7 2 ± 3 . 0 8**膨脹

綜上，醋炙法是商陸的傳統(tǒng)炮制方法，本研究結(jié)果表明，商陸經(jīng)醋炙后刺激性降低，瀉下作用緩和，逐水作用增強，即達到了減毒增效的目的，此結(jié)論驗證了商陸傳統(tǒng)炮制法的科學性。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典（一部）.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：304

[2] 陳琳，吳皓，王媚，等.醋商陸飲片的炮制工藝研究.中草藥，2011，42（6）：1101

[3] 陳奇.中藥藥理研究方法學.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006

[4] 李一飛，姚廣濤.商陸藥理作用及毒性研究進展.中國實驗方劑學雜志，2011，17（13）：248

編輯：吳 寧

R282.71

A

1672-397X（2015）01-0077-03

欽建偉（1975-），男，本科學歷，主管中藥師，主要從事中藥藥理研究。qinjianwei8@126.com

2014-09-15