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    亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性分析

    2021-09-09 00:51:46姜一飛
    關(guān)鍵詞:葉酸復(fù)發(fā)性多態(tài)性

    姜一飛

    (常州市中醫(yī)醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇 常州 213003)

    不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是指在妊娠28周之前連續(xù)發(fā)生3次或3次以上的自然流產(chǎn),在排除母體生殖道解剖異常、母體內(nèi)分泌異常及自身免疫功能紊亂后,仍無法找到明確原因的病癥,發(fā)病率約占妊娠總數(shù)的1%[1]。相關(guān)研究顯示,高同型半胱氨酸(Hcy)血癥對胚胎有影響,是胎盤早剝、先兆子癇等疾病的高危因素,通過多種途徑參與復(fù)發(fā)性流產(chǎn),且妊娠期高 Hcy 可增加母體血栓的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[2]。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是Hcy代謝途徑中的關(guān)鍵酶,相關(guān)報(bào)道顯示,MTHFR基因C677T位點(diǎn)的多態(tài)性可能是導(dǎo)致不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)生的高危因素[3]?;诖?,本研究就葉酸代謝相關(guān)酶MTHFR基因多態(tài)性與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性進(jìn)行分析,現(xiàn)作如下報(bào)道。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 回顧性分析常州市中醫(yī)醫(yī)院2018年1月至2020年6月收治的263例不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的臨床資料,將其作為試驗(yàn)組,年齡23 ~ 38歲,平均(30.51±2.76)歲;流產(chǎn)次數(shù)3 ~ 5次,平均(3.97±0.36)次。診斷標(biāo)準(zhǔn):參照《復(fù)發(fā)性流產(chǎn)免疫學(xué)診斷和治療共識》[4]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者;夫婦雙方不存在染色體異常者;抗核抗體、抗心磷脂抗體檢測結(jié)果呈陰性者;未合并高血壓、糖尿病等疾病者等。排除標(biāo)準(zhǔn):內(nèi)分泌相關(guān)檢測指標(biāo)異常者;合并肝腎等器官性疾病者;近期服用維生素補(bǔ)充治療者等。另回顧性分析同期進(jìn)行體檢的260例健康女性的體檢資料,將其作為對照組,年齡22 ~ 35歲,平均(29.48±2.63)歲,無自然流產(chǎn)史、不良產(chǎn)史及血栓疾病史。將兩組研究對象一般資料對比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05),組間可進(jìn)行對比分析。本研究經(jīng)常州市中醫(yī)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)。

    1.2 方法 采用PCR法檢測葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性:利用無菌棉簽反復(fù)刮取兩組研究對象口腔黏膜的上皮細(xì)胞,提取細(xì)胞DNA,采用SLAN-96熒光定量 PCR儀(深圳泰樂德醫(yī)療有限公司,型號:ABI7500)檢測MTHFR 基因 C677T 位點(diǎn)的多態(tài)性,PCR反應(yīng)條件:89℃預(yù)變性 15 min, 95℃ 變性 10 s, 62℃ 退火延伸 2 min, 21個(gè)循環(huán); 90℃變性12 s,61℃退火延伸92 s,29個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)結(jié)束后,根據(jù)SLAN-96 熒光定量 PCR 儀上讀取的終點(diǎn)熒光,利用分析軟件確定各個(gè)樣本的基因分型結(jié)果。

    1.3 觀察指標(biāo) ①將兩組研究對象血清葉酸水平、紅細(xì)胞葉酸水平及維生素B12水平進(jìn)行對比。分別采集清晨空腹外周靜脈血5 mL,一部分血樣以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min,取血清,采用化學(xué)發(fā)光法測定血清葉酸水平;另一部分血樣用0.5%的抗壞血酸溶血處理,采用時(shí)間分辨熒光法檢測紅細(xì)胞葉酸水平;血清維生素B12水平采用時(shí)間分辨熒光免疫分析法測定。②比較兩組研究對象MTHFR基因C677T位點(diǎn)基因分布頻率。③分析不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與MTHFR基因多態(tài)性及紅細(xì)胞葉酸、血清葉酸、維生素B12水平的相關(guān)性。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理文中數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料與計(jì)量資料分別以[ 例(%)]與(±s?)表示,采用χ2與t檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Pearson軟件進(jìn)行分析。以P < 0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 血清葉酸、紅細(xì)胞葉酸及維生素B12水平 與對照組比,試驗(yàn)組患者血清葉酸水平明顯升高,而血清紅細(xì)胞葉酸、維生素B12水平均明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P < 0.05),見表1。

    表1 兩組研究對象血清葉酸、紅細(xì)胞葉酸及維生素B12水平比較(?±s?)

    組別 例數(shù) 葉酸(nmol/L) 紅細(xì)胞葉酸(nmol/L) 維生素B12(pmol/L)對照組 260 123.44±14.15 184.57±35.72 164.32±26.38試驗(yàn)組 263 130.16±13.28 156.24±31.16 142.45±24.76 t值 5.601 9.668 9.777 P值 < 0.05 < 0.05 < 0.05

    2.2 葉酸代謝相關(guān)酶MTHFR基因多態(tài)性 與對照組比,試驗(yàn)組患者M(jìn)THFR基因C677T位點(diǎn)CC型基因頻率升高,而CT、TT型基因頻率降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P < 0.05),見表2。

    2.3 相關(guān)性分析 不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與血清葉酸水平和MTHFR基因C677T位點(diǎn)CC型基因頻率呈正相關(guān)(r = 0.657、0.670,均P < 0.05),與血清紅細(xì)胞葉酸、維生素B12水平及MTHFR基因C677T位點(diǎn)CT、TT型基因頻率呈負(fù)相關(guān)(r = -0.564、-0.691、-0.642、-0.599,均P < 0.05),見表 3。

    表3 不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與MTHFR基因多態(tài)性及紅細(xì)胞葉酸、血清葉酸、維生素B12的相關(guān)性

    3 討論

    不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)大部分是早期流產(chǎn),少數(shù)部分是晚期流產(chǎn),早期流產(chǎn)原因?yàn)榕咛ト旧w異常、黃體功能不全等;而晚期流產(chǎn)原因?yàn)樽訉m解剖結(jié)構(gòu)異常、自身免疫異常等,但據(jù)統(tǒng)計(jì)可識別其病因的僅占52%,因此明確檢測復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)生的原因?qū)档桶l(fā)病率、改善患者預(yù)后至關(guān)表3 不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與MTHFR基因多態(tài)性及紅細(xì)胞葉酸、血清葉酸、維生素B12的相關(guān)性重要[5]。

    鄭文霞等[6]研究發(fā)現(xiàn),正常妊娠孕婦膳食葉酸攝入量與血漿5- 甲基四氫葉酸水平呈正相關(guān),而不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組患者要達(dá)到指定的血漿5- 甲基四氫葉酸水平,需攝入更多的葉酸。本研究結(jié)果中,與對照組比,試驗(yàn)組患者血清葉酸水平明顯升高,而血清紅細(xì)胞葉酸、維生素B12水平明顯降低,且原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與血清葉酸水平呈正相關(guān),與紅細(xì)胞葉酸水平及血清維生素B12水平呈負(fù)相關(guān),提示葉酸與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)有著密切聯(lián)系,血清中葉酸水平是復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的危險(xiǎn)因素,于圍孕期給予患者補(bǔ)充葉酸,可降低其流產(chǎn)的發(fā)生率。

    人體中MTHFR可參與葉酸的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝過程,在不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中具有多態(tài)性,MTHFR基因C677T位點(diǎn)CC型基因增加可降低其酶活性,因此可導(dǎo)致葉酸代謝異常,從而增加流產(chǎn)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[7]。吳喆[8]研究發(fā)現(xiàn),受檢者妊娠前進(jìn)行MTHFR C677T位點(diǎn)多態(tài)性的檢測,并根據(jù)基因型有針對性地增加葉酸的補(bǔ)充,可有效避免治療的盲目性,對于預(yù)防不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)再次發(fā)生具有重要意義。本研究中,與對照組比,試驗(yàn)組患者M(jìn)THFR基因C677T位點(diǎn)CC型基因頻率升高,而CT、TT型基因頻率降低,且不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與MTHFR基因C677T位點(diǎn)CT、TT型基因頻率呈負(fù)相關(guān),表明MTHFR基因C677T位點(diǎn)基因突變是不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病的危險(xiǎn)因素。

    綜上,血清葉酸水平及MTHFR基因C677T位點(diǎn)基因突變是不明原因的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)病的主要因素,可作為預(yù)測不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的生物學(xué)指標(biāo),為降低復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生率,可指導(dǎo)攜帶相關(guān)基因受檢者補(bǔ)充葉酸等。

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