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    地稔醇提物抗氧化活性的譜效關(guān)系研究

    2021-09-06 06:20:23錢松劉琴麻秀萍楊菁陳滕劉靜劉林莉
    中國藥房 2021年16期
    關(guān)鍵詞:提物指紋圖譜

    錢松 劉琴 麻秀萍 楊菁 陳滕 劉靜 劉林莉

    中圖分類號(hào) R284.1;R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408(2021)16-1969-06

    DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.16.09

    摘 要 目的:建立地稔醇提物的指紋圖譜,研究其抗氧化活性的譜效關(guān)系。方法:采用高效液相色譜法(HPLC)和《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012版)》建立15批地稔醇提物的指紋圖譜并進(jìn)行相似度評(píng)價(jià);與對(duì)照品比對(duì),指認(rèn)共有峰。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)自由基清除法和總抗氧化能力測定法(FRAP)評(píng)價(jià)15批地稔醇提物的體外抗氧化活性。采用主成分分析、雙變量相關(guān)性分析和偏最小二乘回歸分析研究地稔醇提物抗氧化活性的譜效關(guān)系。結(jié)果:從15批地稔醇提物HPLC指紋圖譜中確定共有峰20個(gè),與對(duì)照指紋圖譜的相似度均不低于0.831;指認(rèn)出峰3為沒食子酸、峰13為牡荊素、峰17為蘆丁、峰19為鞣花酸。15批地稔醇提物的DPPH自由基清除法的半數(shù)抑制濃度(IC50)為21.98~57.87 μg/mL,ABTS自由基清除法的IC50值為40.94~101.88 μg/mL,F(xiàn)RAP法所得結(jié)果為0.19~0.48 mg/mL。主成分分析顯示,DPPH法的IC50值的方差貢獻(xiàn)率達(dá)80.77%;雙變量相關(guān)性分析顯示,峰2(呈正相關(guān))和峰11(呈負(fù)相關(guān))的峰面積與抗氧化活性均有顯著的相關(guān)性(P<0.05);偏最小二乘回歸法分析顯示,變量重要性投影(VIP)值排序?yàn)榉?1>峰2>峰16>峰15>峰12>峰13>峰18,均大于1;且峰2、13、15、16、18與抗氧化活性呈正相關(guān),峰11、12與抗氧化活性呈負(fù)相關(guān),其標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)的絕對(duì)值均大于0.1。結(jié)論:15批地稔醇提物均有體外抗氧化活性,其共有峰2、11、12、13、15、16、18對(duì)應(yīng)的化合物可能是地稔醇提物抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞 地稔;醇提物;指紋圖譜;抗氧化活性;譜效關(guān)系

    Study on the Spectrum-effect Relationship of Antioxidant Activity of Ethanol Extract from Melastoma dodecandrum

    QIAN Song,LIU Qin,MA Xiuping,YANG Jing,CHEN Teng,LIU Jing,LIU Linli(School of Pharmacy, Guizhou University of TCM, Guiyang 550025, China)

    ABSTRACT OBJECTIVE: To establish the fingerprint of the ethanol extract from Melastoma dodecandrum, to study spectrum-effect relationship of its antioxidant activity. METHODS: HPLC method and Similarity Evaluation System of TCM Chromatographic Fingerprint (2012 edition) were used to establish the fingerprints of 15 batches of ethanol extracts from M. dodecandrum,and heir similarity was evaluated. The common peaks were identified by comparing with substance control. DPPH free radical scavenging method,ABTS free radical scavenging method and total antioxidant capacity determination method(FRAP) were used to determine antioxidant activity in vitro of 15 batches of ethanol extracts from M. dodecandrum. Principal component analysis,bivariate correlation analysis and partial least squares regression analysis were used to study the spectrum-effect relationship of the antioxidant activity of the ethanol extracts from M. dodecandrum. RESULTS: Totally 20 common peaks were identified in HPLC fingerprints of 15 batches of ethanol extracts from M. dodecandrum; its similarity with the control fingerprint was not less than 0.831; it was identified that peak 3 was gallic acid, peak 13 was vitexin, peak 17 was rutin and peak 19 was ellagic acid. The IC50 values of DPPH radical scavenging method of 15 batches of ethanol extracts from M. dodecandrum were 21.98-57.87 μg/mL, that of ABTS radical scavenging method were 40.94-101.88 μg/mL, the results of FRAP method were 0.19-0.48 mg/mL. Principal component analysis showed that the contribution rate of IC50 variance of DPPH was 80.77%. Bivariate correlation analysis showed that the peak areas of peak 2 (positive correlation) and peak 11 (negative correlation) were significantly correlated with antioxidant activity (P<0.05); partial least squares regression analysis showed that,the variable projection importance (VIP) in descending order was peak 11>peak 2>peak 16>peak 15>peak 12>peak 13>peak 18, and their VIP values were greater than 1. Peaks 2, 13, 15, 16 and 18 were positively correlated with antioxidant activity, and peaks 11 and 12 were negatively correlated with antioxidant activity, and the absolute value of standardized regression coefficient were greater than 0.1. CONCLUSIONS: Fifteen batches of ethanol extracts of M. dodecandrum have antioxidant activity in vitro. The compounds corresponding to common peaks 2, 11, 12, 13, 15, 16 and 18 may be the material basis of antioxidant activity of M. dodecandrum.

    KEYWORDS Melastoma dodecandrum;Ethanol extract;Fingerprint; Antioxidant activity;? Spectrum-effect relationship

    地稔為野牡丹科植物地稔Melastoma dodecandrum Lour.的新鮮或干燥全草,又名地菍、鋪地錦、嘎狗嚕、地枇杷等。該藥主要分布在我國廣東、貴州、浙江、福建等地區(qū)[1-2],具有活血止血、清熱解毒等功效,民間常用于治療痛經(jīng)、產(chǎn)后腹痛、子宮出血、崩漏、癰腫、痔瘡、盆腔炎、肝炎等病癥[3]?,F(xiàn)代藥理研究表明,地稔止血與抗炎作用顯著,并具有抗衰老、降血糖、降血脂、抗腫瘤等活性[4-6]。地稔含有多種化學(xué)成分,以黃酮類、多糖類、三萜類、有機(jī)酸類等成分為主[7-10]。有研究報(bào)道,適當(dāng)服用抗氧化劑可以清除體內(nèi)過多的自由基,有利于人類的身體健康和疾病的預(yù)防與控制,而植物中含有大量的天然抗氧化活性成分,具有抗氧化活性強(qiáng)、副作用小等特點(diǎn),已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一[11-12]。因此,對(duì)地稔藥材中的抗氧化活性成分進(jìn)行研究具有一定的意義。

    中藥譜效關(guān)系研究是將中藥指紋圖譜信息與藥效學(xué)指標(biāo)相結(jié)合,采用相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析技術(shù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)、分析,從而揭示化學(xué)成分與生物活性之間的相關(guān)性,闡明活性物質(zhì)基礎(chǔ),建立符合中醫(yī)學(xué)理論和中醫(yī)藥實(shí)踐基礎(chǔ)的質(zhì)量評(píng)價(jià)模式。該研究手段能快速反映植物提取物的主要化學(xué)特征,已被世界衛(wèi)生組織認(rèn)可為藥用植物質(zhì)量評(píng)價(jià)的一種策略[13-15]。為此,本研究在前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,采用高效液相色譜法(HPLC)建立15批不同產(chǎn)地地稔醇提物(預(yù)實(shí)驗(yàn)示抗氧化活性較強(qiáng))的指紋圖譜,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、2,2′-聯(lián)氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)自由基清除法和總抗氧化能力測定法(FRAP)評(píng)價(jià)其抗氧化活性,采用主成分分析、雙變量相關(guān)性分析、偏最小二乘回歸分析研究地稔醇提物指紋圖譜共有峰與抗氧化活性的譜效關(guān)系,以期為進(jìn)一步闡明該藥抗氧化活性的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

    1 材料

    1.1 主要儀器

    本研究所用主要儀器有LC-2030C 3D型HPLC儀(包括二極管陣列檢測器,日本Shimadu公司)、KQ-3OODB型數(shù)控超聲清洗波(昆山市超聲儀器有限公司)、UV-5900型紫外-可見分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司)、FA2204N型萬分之一電子天平(上海菁海儀器有限公司)、1530型酶標(biāo)儀(美國Thermo Fisher Scientific公司)等。

    1.2 主要藥品與試劑

    牡荊素對(duì)照品(批號(hào)111687-201704,純度≥94.9%)、沒食子酸對(duì)照品(批號(hào)110831-201605,純度≥91.5%)、鞣花酸對(duì)照品(批號(hào)111959-201903,純度88.8%)均購自中國食品藥品檢定研究院;蘆丁對(duì)照品(批號(hào)153- 18-4,純度≥98.0%)購自成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司;DPPH(批號(hào)C11386826)、ABTS(批號(hào)C11838739)均購自上海麥克林生化科技有限公司;2,4,6-三(2-吡啶)-1,3,5-三嗪(TPTZ,批號(hào)BCCD2024)購自西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司;甲醇(色譜純)購自美國TEDIA公司;福林酚試劑購自上海藍(lán)季生物有限公司;其余試劑均為分析純,水為純凈水。

    15批地稔藥材采收自貴州不同自然生長區(qū),由貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生藥實(shí)驗(yàn)室孫慶文教授鑒定,均為野牡丹科植物地稔M. dodecandrum Lour.的全草,其憑證標(biāo)本存放于貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。15批地稔藥材的來源信息見表1。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 溶液的制備

    2.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取沒食子酸、牡荊素、蘆丁對(duì)照品各適量,分別溶解于甲醇中,再精密量取1 mL,置于同一10 mL量瓶中,用甲醇稀釋并定容,搖勻,制成上述成分質(zhì)量濃度分別為10.17、8.73、14.00 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。另精密稱取鞣花酸對(duì)照品適量,加甲醇溶解、稀釋并定容,搖勻,制成質(zhì)量濃度為8.00 μg/mL的單一對(duì)照品溶液。

    2.1.2 供試品溶液 分別稱取15批地稔藥材粉末(過二號(hào)篩)各15 g,分別加入12、10倍量(mL/g,下同)的50%乙醇回流提取2次,每次1.5 h,合并濾液,濃縮,得浸膏(得率為16.56%~28.21%)。精密稱取上述浸膏0.05 g,置于10 mL量瓶中,加入50%甲醇溶解、稀釋并定容,搖勻,過0.22 μm微孔濾膜,即得指紋圖譜用供試品溶液。另精密稱取上述浸膏0.05 g,置于25 mL量瓶中,加入50%乙醇溶解、稀釋并定容,搖勻,即得抗氧化活性用供試品溶液。

    2.2 色譜條件

    以ChromCoreTM AQ C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)為色譜柱,以甲醇為流動(dòng)相A、0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫(0~10 min,98%A;10~15 min,98%A→95%A;15~55 min,95%A→75%A;55~60 min,75%A;60~75 min,75%A→65%A;75~90 min,65%A→55%A;90~95 min,55%A→50%A;95~100 min,50%A→98%A;100~105 min,98%A);流速為1.0 mL/min,檢測波長為260 nm;柱溫為30 ℃;進(jìn)樣量為10 μL。

    2.3 方法學(xué)考察

    2.3.1 精密度試驗(yàn) 取地稔藥材(編號(hào)S6)適量,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備指紋圖譜用供試品溶液,再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。以沒食子酸峰(峰3,該峰分離度良好、峰面積相對(duì)較大且穩(wěn)定)為參照,計(jì)算各共有峰的相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果,20個(gè)共有峰相對(duì)峰面積的RSD均不高于1.69%(n=6),相對(duì)保留時(shí)間的RSD均不高于0.71%(n=6),表明方法精密度良好。

    2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取地稔藥材(編號(hào)S6)適量,共6份,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備指紋圖譜用供試品溶液,再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。以沒食子酸峰為參照,計(jì)算各共有峰的相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果,20個(gè)共有峰相對(duì)峰面積的RSD均不高于2.16%(n=6),相對(duì)保留時(shí)間的RSD均不高于0.63%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。

    2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取地稔藥材(編號(hào)S6)適量,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備指紋圖譜用供試品溶液,分別于室溫下放置0、2、4、8、10、24 h時(shí)按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。以沒食子酸峰為參照,計(jì)算各共有峰的相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果,20個(gè)共有峰相對(duì)峰面積的RSD均不高于2.49%(n=6),相對(duì)保留時(shí)間的RSD均不高于1.48%(n=6),表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.4 地稔醇提物HPLC指紋圖譜的建立、相似度評(píng)價(jià)和共有峰指認(rèn)

    2.4.1 HPLC指紋圖譜的建立 按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備15批地稔藥材的指紋圖譜用供試品溶液,再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析,記錄色譜圖。將色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012版)》,以S1樣品圖譜為參照?qǐng)D譜,將時(shí)間窗寬度設(shè)為0.3 min,采用多點(diǎn)校正法進(jìn)行峰匹配生成疊加指紋圖譜,采用中位數(shù)法生成對(duì)照指紋圖譜(R),詳見圖1。

    2.4.2 相似度評(píng)價(jià) 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)(2012版)》對(duì)15批地稔醇提物樣品的指紋圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。結(jié)果,15批地稔醇提物樣品圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度均不低于0.831,詳見表2。

    2.4.3 共有峰指認(rèn) 從15批地稔醇提物樣品的指紋圖譜中確定共有峰20個(gè),通過與對(duì)照品色譜圖(“2.1.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液同法進(jìn)樣測定所得,見圖2)進(jìn)行比對(duì),指認(rèn)出峰3為沒食子酸、峰13為牡荊素、峰17為蘆丁、峰19為鞣花酸。

    2.5 抗氧化活性的評(píng)價(jià)

    2.5.1 DPPH自由基清除法 參考文獻(xiàn)[16]方法,精密稱取DPPH 16.51 mg,置于10 mL棕色量瓶中,加無水乙醇,超聲(功率420 W,頻率40 kHz)使其溶解,冷卻至室溫后以無水乙醇定容,即得DPPH工作液。分別取50%乙醇 100 μL+DPPH工作液100 μL(空白組)、不同質(zhì)量濃度的抗氧化活性用供試品溶液(分別取“2.1.2”項(xiàng)下抗氧化活性用供試品溶液1、2、3、4、5、6、7、8 mL,用50%乙醇定容至25 mL量瓶中,下同)各100 μL+DPPH工作液100 μL(樣品組)以及上述質(zhì)量濃度的抗氧化活性用供試品溶液各100 μL+無水乙醇100 μL(對(duì)照組),置于96孔板中,于室溫下靜置15 min,置于酶標(biāo)儀中振蕩10 min,于517 nm波長處分別測定其吸光度,依次記為A0(空白組)、A1(樣品組)和A2(對(duì)照組)。按下式計(jì)算自由基清除率:自由基清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100%,采用SPSS 25.0軟件計(jì)算15批地稔醇提物對(duì)DPPH自由基的半數(shù)抑制濃度(IC50)。每組設(shè)3個(gè)平行樣,結(jié)果見表3。

    2.5.2 ABTS自由基清除法 參考文獻(xiàn)[17]方法,精密稱取ABTS 38.41 mg,置于10 mL棕色量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度;另精密稱取過硫酸鉀66.10 mg,置于100 mL量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度。將上述ABTS溶液與過硫酸鉀溶液等體積混合,避光儲(chǔ)存12~16 h后,用水稀釋,使其在734 nm波長處的吸光度為0.70±0.02,即得ABTS工作液。分別取50%乙醇20 μL+ABTS工作液180 μL(空白組)、“2.5.1”項(xiàng)下不同質(zhì)量濃度的抗氧化活性用供試品溶液各20 μL+ABTS工作液180 μL(樣品組)、“2.5.1”項(xiàng)下不同質(zhì)量濃度的抗氧化活性用供試品溶液各20 μL+水180 μL(對(duì)照組),置于96孔板中,于室溫下靜置30 min,置于酶標(biāo)儀中振蕩6 min,于734 nm波長處分別測定其吸光度,依次記為A0(空白組)、A1(樣品組)和A2(對(duì)照組)。按“2.5.1”項(xiàng)下方法計(jì)算15批地稔醇提物對(duì)ABTS自由基的IC50。每組設(shè)3個(gè)平行樣,結(jié)果見表3。

    2.5.3 FRAP法 參考文獻(xiàn)[18]方法,取FRAP工作液[精密吸取300 mmol/L 醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH 3.6)2.5 mL、10 mmol/L TPTZ溶液(以40 mmol/L的鹽酸為溶劑)250 μL、20 mmol/L 氯化鐵溶液250 μL,混勻]180 μL,置于96孔板中,加入0.2 mg/mL(用50%乙醇稀釋)的抗氧化活性用供試品溶液20 μL,置于酶標(biāo)儀中,在37 ℃下靜置10 min后,于593 nm波長處測定其吸光度,記為A。另分別配制質(zhì)量濃度為0.019 3、0.038 6、0.058 0、0.077 3、0.096 6、0.159 2 mg/mL的硫酸亞鐵溶液,按上述方法測定吸光度后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將供試品溶液的A值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算總抗氧化能力(以硫酸亞鐵質(zhì)量濃度計(jì),后簡稱為“FRAP值”)。每組設(shè)3個(gè)平行樣,結(jié)果見表3。

    2.6 譜效關(guān)系分析

    2.6.1 主成分分析 采用SPSS 25.0軟件,對(duì)共有峰峰面積與DPPH法的IC50值(Y1)、ABTS法的IC50值(Y2)、FRAP值(Y3)進(jìn)行Z標(biāo)準(zhǔn)化處理,計(jì)算主成分特征值、方差貢獻(xiàn)率等參數(shù)。結(jié)果,主成分Y1的方差貢獻(xiàn)率達(dá)80.77%,提示其能較大程度地反映地稔醇提物的抗氧化活性,詳見表4。因此,本研究選用DPPH法的IC50值作為抗氧化活性的變量進(jìn)行后續(xù)分析。

    2.6.2 雙變量相關(guān)性分析 采用SPSS 25.0軟件,以DPPH法的IC50值為變量(Y)、各共有峰峰面積為變量(X)進(jìn)行雙變量相關(guān)性分析,計(jì)算共有峰峰面積與抗氧化活性的Pearson相關(guān)系數(shù)。結(jié)果,峰2和峰11的峰面積與抗氧化活性均顯著相關(guān)(P<0.05),其中峰2呈正相關(guān)、峰11呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),詳見表5。

    2.6.3 偏最小二乘回歸分析 利用SIMCA 14.1軟件,以DPPH法的IC50值為因變量(Y)、各共有峰峰面積(X)為自變量進(jìn)行偏最小二乘回歸分析,并計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)和變量重要性投影(VIP)值。標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)越大表明該自變量對(duì)藥效影響越大,并且系數(shù)為正值說明其與藥效呈正相關(guān),為負(fù)值則表示與藥效呈負(fù)相關(guān)[19]。VIP值是反映自變量對(duì)因變量解釋能力的重要指標(biāo),其值越大說明該自變量對(duì)因變量的解釋能力越強(qiáng),一般認(rèn)為當(dāng)VIP值>1時(shí),自變量在解釋因變量時(shí)具有顯著重要性[20]。結(jié)果,得回歸方程為Y=0.064 0X1+0.147 6X2+0.035 3X3-0.074 7X4+0.008 6X5-0.080 3X6-0.067 0X7-0.079 0X8-0.047 8X9-0.061 6X10-0.161 0X11-0.108 5X12+0.106 0X13+0.033 8X14+0.112 1X15+0.126 9X16-0.056 0X17+0.102 8X18-0.006 1X19+0.037 6X20。VIP值結(jié)果顯示,峰2、11、12、13、15、16、18的VIP值均大于1,排序?yàn)榉?1>峰2>峰16>峰15>峰12>峰13>峰18,詳見圖3。其中,峰2、13、15、16、18與抗氧化活性呈正相關(guān),其標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)亦均大于0.1,提示當(dāng)其對(duì)應(yīng)成分的含量增加時(shí),地稔醇提物的抗氧化活性會(huì)顯著增強(qiáng);峰11、12與抗氧化活性呈負(fù)相關(guān),其標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)的絕對(duì)值亦均大于0.1,提示當(dāng)其對(duì)應(yīng)成分的含量增加時(shí),地稔醇提物的抗氧化活性會(huì)減弱。

    3 討論

    本課題組前期考察了不同提取溶劑(水、50%乙醇、95%乙醇)對(duì)地稔提取物體外抗氧化活性的影響,結(jié)果顯示,50%乙醇提取物對(duì)DPPH、ABTS自由基的清除能力最強(qiáng),因此選用50%乙醇作為提取溶劑。同時(shí),本課題組采用二極管陣列檢測器在190~400 nm波長范圍內(nèi)對(duì)地稔醇提物進(jìn)行全波長掃描,結(jié)果顯示,在260 nm波長處色譜峰數(shù)量較多,整體基線較平穩(wěn),因此選用260 nm作為檢測波長。

    在指紋圖譜分析中,確定了15批地稔醇提物中有20個(gè)共有峰,與對(duì)照指紋圖譜的相似度均不低于0.831,說明共有峰具有代表性。同時(shí),15批地稔醇提物樣品均具有體外抗氧化活性。本文采用主成分分析、雙變量相關(guān)性分析和偏最小二乘回歸分析探討了地稔醇提物HPLC指紋圖譜共有峰峰面積與抗氧化活性之間的關(guān)系。結(jié)果顯示,地稔醇提物中峰2、11、12、13、15、16、18與其抗氧化活性(以DPPH法的IC50值衡量)均有重要相關(guān)性。由此可見,地稔的抗氧化活性并非是某一具體成分的作用,而是多成分協(xié)同起效的結(jié)果。

    目前已有學(xué)者初步確定了地稔的抗氧化活性主要來自其酚類成分中的單寧等化合物[21]。本研究通過與對(duì)照品比對(duì),僅指認(rèn)出4個(gè)色譜峰,且與抗氧化活性顯著相關(guān)的色譜峰指認(rèn)較少。在后續(xù)研究中,本課題組將通過高分辨質(zhì)譜分析等研究手段對(duì)地稔醇提物中與抗氧化活性呈正相關(guān)的色譜峰所對(duì)應(yīng)的成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,以確定地稔抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ),為完善其質(zhì)量評(píng)價(jià)及后續(xù)深入開發(fā)提供參考。

    參考文獻(xiàn)

    [ 1 ] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志:第53卷:第1分冊(cè)[M].北京:科學(xué)出版社,1984:154.

    [ 2 ] 唐新霖,唐建平.地稔栽培技術(shù)及開發(fā)前景[J].特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物,2007,10(6):27.

    [ 3 ] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1999:628.

    [ 4 ] 李麗,羅澤萍,周煥第,等.地菍正丁醇萃取物對(duì)鏈脲佐菌素致糖尿病模型小鼠的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014,33(2):173-176.

    [ 5 ] 李麗,羅澤萍,周煥第,等.地菍乙酸乙酯提取部位對(duì)糖尿病小鼠血糖、血脂及抗氧化作用的影響[J].中國老年學(xué)雜志,2015,35(12):3250-3252.

    [ 6 ] 周芳,張興燊,張旖簫,等.地稔水煎液鎮(zhèn)痛抗炎藥效學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2007,18(10):2370-2371.

    [ 7 ] 張超,方巖雄.中藥地菍黃酮類成分的分離與鑒定[J].中國藥學(xué)雜志,2003,38(4):256-258.

    [ 8 ] 林綏,李援朝,郭玉瑜,等.地稔的化學(xué)成分研究:Ⅱ[J].中草藥,2009,40(8):1192-1195.

    [ 9 ] 唐邁,廖寶珍,林邁,等.地稔的化學(xué)成分研究[J].中草藥,2008,39(8):1149-1151.

    [10] 石冬梅,林友文,李柱來.地菍果實(shí)紅色素的分離及組成初步鑒定[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2003,15(3):235- 238.

    [11] SONG H F,ZHANG Q B,ZHANG Z S,et al. In vitro an-tioxidant activity of polysaccharides extracted from Bryopsisplumose[J]. Carbohydrate Polymers,2010,80(4):1057-1061.

    [12] SCHERER R,GODOY H T. Antioxidant activity index(AAI)by the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl method[J].Food Chemistry,2009,112(3):654-658.

    [13] 鄧書鴻,聶磊.中藥譜效關(guān)系的分析方法及數(shù)據(jù)處理技術(shù)研究進(jìn)展[J].中藥材,2010,33(11):1819-1823.

    [14] WU Q Y,ZHOU Y,JIN X,et al. Chromatographic fingerprint and the simultaneous determination of five bioactive components of Geranium carolinianum L. water extract by high performance liquid chromatography[J]. Int J Mol Sci,2011,12(12):8740-8749.

    [15] ZHANG H,WANG J N,CHEN Y,et al. Establishing the chromatographic fingerprint of traditional Chinese medicine standard decoction based on quality by design approach:a case study of Licorice[J]. J Sep Sci,2019,42(6):1144-1154.

    [16] AIYEGORO O,OKOH A. Phytochemical screening and polyphenolic antioxidant activity of aqueous crude leaf extract of Helichrysum pedunculatum[J]. Int J Mol Sci,2009,10(11):4990-5001.

    [17] ROBERTA R E,PELLEGRINI N,PROTEGGENTE A,et al. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay[J]. Free Radical Bio Med,1999,26(9):1231-1237.

    [18] BENZIE I F F,STRAIN J J. The ferric reducing ability of plasma(FRAP)as a measure of “antioxidant power”:the FRAP assay[J]. Analy Biochem,1996,239(1):70-76.

    [19] 姜紅,史亞軍,趙生玉,等.基于偏最小二乘法對(duì)三果湯抗氧化作用譜-效關(guān)系的分析[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2018,24(3):8-12.

    [20] 劉淼,黃瑩瑩,林夢(mèng)雅,等.黑瑪咖不同提取物的抗疲勞作用與譜效關(guān)系研究[J].中草藥,2018,49(9):2090-2096.

    [21] TONG Y P,JIANG Y,CHEN X B,et al. Extraction,enrichment,and quantification of main antioxidant aglycones of flavonoids and tannins from Melastoma dodecandrum Lour.:guided by UPLC-ESI-MS/MS[J]. J Chem,2019,2019:1-12.

    (收稿日期:2021-04-22 修回日期:2021-07-21)

    (編輯:鄒麗娟)

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