基于標準湯劑對化濕止咳湯質量標準的研究

辛加敏 阮婧華 范東生 蘇松柏 萬明香 查鑫 史耀輝 夏青

【摘 要】 目的：基于標準湯劑質量理念，建立化濕止咳湯劑的質量標準，為今后化濕止咳湯煎制提供可靠的科學依據(jù)。方法：制備15批化濕止咳湯，計算出膏率、pH、定性鑒別白術、炙甘草，定量檢測甘草苷含量，采用指紋圖譜分析方法對化濕止咳湯質量進行綜合評價。結果： 三批化濕止咳湯中甘草苷平均含量為0.049 mg/mL，出膏率：15.98%～24.12%;pH為：5.30～5.91，指紋圖譜特征峰相識度大于0.9。結論：該研究對化濕止咳湯多批次藥材進行研究，質量穩(wěn)定，可作為化濕止咳湯劑質量標準，為煎煮提供參考。

【關鍵詞】 質量標準;甘草苷;指紋圖譜

【中圖分類號】R283 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2021）15-0018-05

Abstract：based on the quality concept of standard decoction， to establish the quality standard of chemical huashizhiketang， to provide reliable scientific basis for decoction making in the future. Methods 15 batches of huashizhiketang were prepared， the extraction rate？and pH were calculated， the baizhu and gancao were qualitatively identified， the content of liquiritin was quantitatively detected， and the quality of huashizhiketang was comprehensively evaluated by fingerprint analysis. Results the average content of licorice was 0.049mg/ml. the extraction rate： 15.98%～24.12%;pH：5.30 ～ 5.91， and the characteristic peak acquaintance degree of fingerprint was greater 0.9. Conclusion in this study， several batches of huashizhiketng were studied and the quality was stable， which could be used as the quality standard for the decoction and provide reference for the decoction.

Keywords：Quality Standard; Liquiritin; Fingerprint

隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化的發(fā)展，中藥從原有的湯劑、膏、丹、丸、散等劑型到現(xiàn)有的片劑、膠囊劑、顆粒劑等[1]，湯劑都扮演著重要的角色，在疾病預防、治療、診斷，都有著廣泛的臨床應用，在慢性疾病的治療過程中，有著舉足輕重的地位。此外，湯劑由于廉價、易得、煎煮方便等優(yōu)點，是患者常選的劑型之一。

但是，湯劑在大量使用時，特別是常用處方，缺乏質量控制標準，易造成療效降低等情況[2]。因此，對使用量大的處方設定一定的參數(shù)如出膏率、pH、含量測定等進行評價的研究，對湯劑的發(fā)展有著重要意義?；瘽裰箍葴从谟衿溜L散和藿香正氣散兩個古方加減而成，主要由廣藿香、山藥、白術、法半夏、炙甘草、炒紫蘇子六味中藥組成[3]，該方煎煮后散發(fā)清香之味，治療濕證效果較佳，患者服用順應性好，受廣大患者歡迎。在保證安全性及療效的前提下，將其研究成為醫(yī)療機構制劑，不僅給患者使用帶來方便，還降低患者用藥成本。

目前，醫(yī)療機構制劑質量控制主要采用薄層鑒別、單一指標成分定量等，該類方法缺乏中醫(yī)藥整體性的特點?！皹藴蕼珓笔窃谥嗅t(yī)藥理論指導下，按照臨床湯劑煎煮方法，采用適當方法制得，可作為制劑與臨床湯劑標準參照物[4]。因此，為建立化濕止咳湯的特征性質量標準，本研究遵循原始湯劑特點，參照標準湯劑研究方法，通過對湯劑的pH、出膏率、指標成分定性定量、指紋圖譜研究，為該制劑的質量控制提供可靠方法，保證與傳統(tǒng)湯劑的一致性。使煎煮后的湯劑更加合理、規(guī)范、科學、從而發(fā)揮更好的療效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695型高效液相（美國waters公司）;MS105DU十萬分之一的電子分析天平（美國METTLER TOLEDO）;Milli-Q純水機（法國默克），電熱套（天津泰斯特儀器有限公司）;超聲機（昆山市超聲儀器有限公司）;pH測定儀（上海儀電科學儀器股份有限公司）。

1.2 試藥與材料 甘草苷（批號：111610-201908）購買于中國食品藥品檢定研究院，廣藿香和炒紫蘇子（貴陽同仁堂）;山藥、白術、法半夏（四川千方藥業(yè)）;炙甘草（四川博仁藥業(yè)），經(jīng)我院陳秀敏主任藥師鑒定均為正品，研究樣品山藥為薯蕷科植物薯蕷Dioscorea Opposita Thunb.的干燥根莖山藥;甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza Uralensis Fisch、脹果甘草Glycyrrhiza Inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhizaglabra L.的干燥根炮制品;半夏為天南星科植物半夏Pinellia Ternata（Thunb.）Breit.的干燥塊莖的炮制品;紫蘇子為唇形科植物紫蘇Perlaal Frutescens（L.）Britt.的干燥成熟果實;廣藿香為唇形科植物廣藿香Pogostemon Cablin（Blanco） Benth.的干燥地上部分;白術為菊科植物白術Atractylodes Macrocephala Koidz.的干燥根莖。

1.3 化濕止咳湯劑的制備 根據(jù)國家中醫(yī)藥管理局《醫(yī)療機構中藥煎藥室管理規(guī)范》，按化濕止咳湯處方分別稱取各味藥材共15批，第一次加水180 mL，浸泡30 min，煎煮20 min;第二次加水140 mL，煎煮20 min，合并煎液，即得。

2 方法與結果

2.1 出膏率及pH測定 分別精密吸取15批化濕止咳湯20 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，按照《中國藥典》2015版，置已恒重的蒸發(fā)皿中，于105 ℃干燥3 h，移置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，得出15批化濕止咳湯出膏率在15.98%～24.12%之間;再分別精密吸取混合均勻的湯劑40～50 mL，用pH計測定pH值，15批化濕止咳湯pH值5.30～5.91之間。

2.2 TLC法對白術、甘草的鑒別

2.2.1 白術的鑒別 取本品40 mL，用乙酸乙酯振搖淬取3次，每次25 mL，合并淬取液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取白術對照藥材2 g，加甲醇20 mL，加熱回流1 h，放冷，過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。按照“化濕止咳湯制備工藝”制備缺白術的“陰性對照溶液”，按照“供試品溶液方法”制備，即得。照《中國藥典》2015年版第四部薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取供試品溶液、缺白術陰性溶液各10 μL、對照藥材溶液5 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（2∶1）為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外燈365 nm下檢視。供試品色譜中，在對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點如圖A所示。

2.2.2 炙甘草的鑒別 取炙甘草對照藥材2 g，加甲醇20 mL，加熱回流1 h，過濾，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為對照藥材溶液;按照“化濕止咳湯制備工藝”制備缺炙甘草的“陰性對照溶液”，按照“供試品溶液方法”制備，照《中國藥典》2015年版第四部薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取白術鑒別項下供試品10 μL、對照藥材溶液及缺炙甘草陰性溶液各3 μL，分別點于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸-水（15∶1：1∶2）為展開劑，展開、取出、晾干，置紫外燈下（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。如圖B所示。

2.3 指標成分含量測定及指紋圖譜建立

2.3.1 對照品溶液 精密稱定甘草苷對照品0.0055 g，置5 mL容量瓶中，加70%乙醇溶液制成每1 mL含甘草苷1.1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液制備 精密量取樣品溶液6 mL，蒸干，殘渣置5 mL容量瓶中，加70%乙醇超聲處理10 min，定容至5 mL，作為供試品溶液。

2.3.3 色譜條件 色譜柱：CAPCELL PAK C18 MGⅢ（4.6 mml.D×250 mm，5 μm）流動相：1%甲酸（A）-乙腈（B）;梯度進行洗脫：0～10 min，10%～35%（B）;10～20 min，35%～45%（B）;20～28 min，45%～37%（B）;28～35 min，45%～37%（B）;35～40 min，37%～50%（B）流速：1.0 mL·min-1;檢測波長：269 nm;柱溫：25 ℃;進樣量：1 μL。

2.3.4 線性關系的考察 精密量取“2.3.1”項下甘草苷對照品溶液0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、1 mL分別置于5 mL容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，搖勻，照“2.3.3”項下色譜條件進行，測定甘草苷含量，以甘草苷濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程為：Y=709430X-1986.4，r=0.999，表明化濕止咳湯在0.022～0.132 mg/mL內線性良好。

2.3.5 精密度試驗 取同一批化濕止咳湯供試品溶液（20200401），按“2.3.3”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，測定并計算甘草苷峰面積RSD=1.46%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.6 重復性試驗 取同一批供試品溶液（20200401），按“2.3.3”項下色譜條件連續(xù)試驗6次，甘草苷平均含量：0.053 mg/mL，RSD= 2.03%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗 取同一批供試品溶液（20200401），于制備后的0、4、8、10、12、24 h，按“2.3.3” 項下色譜條件進行試驗，測定甘草苷峰面積，結果色譜峰RSD為1.96%，表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.3.8 加樣回收率試驗 精密量取已知含量化濕止咳湯（0.045 mg/mL）9份（批號： 20200401），分成3組，每組3 mL，以供試品溶液中甘草苷含量的80%、100%、120%為梯度，加入對照品溶液適量，照“2.3.2”項下同法制備，再按“2.3.3”項下依法測定，計算回收率。見表1。

3 化濕止咳湯含量測定

取3批制備樣品（20200401、20200402、20200403），按照“2.3.2”項下同法制備供試品溶液，再按“2.3.3”項下依法測定甘草苷含量，結果見表2，圖譜如圖2a所示。

4 陰性溶液的制備

按照“1.3”項下制備缺甘草化濕止咳湯湯劑，再按照“2.3.2”項下同法制備及“2.3.3”項下依法測定，缺甘草苷如圖2b所示，甘草苷對照品圖譜如圖2c所示。

5 指紋圖譜的建立

按照“2.3.2”項下同法制備供試品，再按“2.3.3”項下色譜條件，依次進樣測定化濕止咳湯劑樣品溶液 （S1～S15）， 記錄色譜圖。采用《中藥色譜指紋圖譜相識度評價系統(tǒng)》（2012.130723版本），對15批次化濕止咳湯劑的實驗結果進行評價。圖3為化濕止咳湯生成的圖譜。根據(jù)軟件匹配確定21個共有峰，15批次化濕止咳湯劑生成的對照指紋圖譜的相識度均大于0.91，以保留時間為指標，與對照品色譜圖相比，可得出9A峰為甘草苷，如圖3所示。

6 討論

中藥湯劑是最古老、最基本的劑型，受廣大患者好評。但是，中藥湯劑受多種因素如藥材基源、產(chǎn)地、煎煮等影響，從而影響治療效果的發(fā)揮[5]。因此，為了保證湯劑有效性、安全性，建立湯劑質量標準，有著重要的意義。在中藥質量研究中，基準物質作為標準參照的研究在中藥中較為成熟。1986年日本厚生對中藥口服制劑提出了基準物質概念，要求制定標準湯劑的化學基準和生物基準，用來與湯劑相比，從而保證質量[6]。2016年8月中國國家藥典委員會在《中藥配方顆粒質量控制與標準制定技術要（征求意見稿）》中提出了標準湯劑的概念，還對標準湯劑進一步說明[7-8]。基于此，本研究對15批中藥制備的化濕止咳湯進行質量研究，以出膏率、pH、含量測定為指標，還采用指紋圖譜進行分析?；瘽裰箍葴饕蓮V藿香、山藥、白術、法半夏、炙甘草、炒紫蘇子組成，本研究利用傳統(tǒng)煎煮法得出15批中藥制備的化濕止咳湯出膏率為：15.98%～24.12%之間，平均出膏率為20.11%，15批化濕止咳湯最低出膏率與最高出膏率之間相差8.14%，對三批化濕止咳湯中甘草苷進行含量測定，結果為0.049、0.051、0.049 mg/mL，這表明出膏率、pH值、含量測定各結果之間相差不大，較為平穩(wěn)，可作為化濕止咳湯的質量控制標準。

此外，還對15批化濕止咳湯進行指紋圖譜分析，從圖譜中可得出，共確定21個共有峰，通過與對照品比對，確定9A峰為甘草苷且重現(xiàn)好。因此，運用標準湯劑理念對復方制劑進行質量控制研究，不僅提高湯劑內在質量，而且對經(jīng)典名方、協(xié)定處方制備提供理論支撐，也突出了中藥多方位、整體控制理念，為該制劑作為醫(yī)療機構制劑的研究提供實驗基礎。

參考文獻

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（收稿日期：2020-12-24 編輯：程鵬飛）