食品中霉菌和酵母計(jì)數(shù)能力驗(yàn)證的結(jié)果與分析

◎ 辛雙陽(yáng)，何天文

（西藏自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，西藏 拉薩 850000）

霉菌和酵母菌廣泛分布于自然環(huán)境中，它們?cè)谑称飞峡梢宰鳛檎＞嗟囊徊糠?，或者作為空氣傳播性污染物，在不?guī)范的消毒設(shè)備上也可被發(fā)現(xiàn)。各類(lèi)食物遭受霉菌和酵母菌的侵襲，常常發(fā)生霉壞變質(zhì)，有些霉菌的有毒代謝產(chǎn)物可能引起各種急性和慢性中毒，特別是有些霉菌毒素具有強(qiáng)烈的致癌性。目前，已知的產(chǎn)毒霉菌有青霉、曲霉和鐮刀霉等，它們?cè)谧匀唤绶謩e較廣，對(duì)食品侵襲的機(jī)會(huì)也較多。因此，對(duì)食品加強(qiáng)霉菌的檢驗(yàn)，在食品衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義[1]。

筆者所在實(shí)驗(yàn)室參加了中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心組織的食品中霉菌和酵母計(jì)數(shù)能力驗(yàn)證，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)，來(lái)評(píng)價(jià)參加者的能力，旨在提高微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員的檢測(cè)能力和水平，增強(qiáng)微生物實(shí)驗(yàn)室的競(jìng)爭(zhēng)力[2-3]。

1 材料與方法

1.1 測(cè)試樣品

食品中霉菌和酵母計(jì)數(shù)能力驗(yàn)證樣品數(shù)為2個(gè)，樣品編號(hào)為20-V001和20-W761，由中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心提供。

1.2 試劑與儀器

9 mL 0.85%生理鹽水（批號(hào)200408），孟加拉紅瓊脂（批號(hào)080708）、高壓蒸汽滅菌鍋，生化培養(yǎng)箱，90 mm培養(yǎng)皿，電子天平。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

按照《ACAS-PT900（2020）食品中霉菌和酵母計(jì)數(shù)能力驗(yàn)證》參試指導(dǎo)書(shū)和《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)》（GB 4789.15—2016）[4]的要求進(jìn)行操作、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)。

1.3.1 樣品前處理

樣品需要用60 mL稀釋液再水化：樣品開(kāi)啟后，立即加入5 mL稀釋液進(jìn)行再水化，待充分溶解后，吸出放入無(wú)菌瓶中，再反復(fù)用余下的稀釋液清洗西林瓶?jī)?nèi)壁，回收清洗液放入上述無(wú)菌瓶中，此溶液即是待測(cè)樣品原液（100）。為保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，本次實(shí)驗(yàn)共設(shè)計(jì)了6個(gè)稀釋梯度。

1.3.2 樣品稀釋

待到樣品原液經(jīng)過(guò)一系列處理之后，取出1 mL倒入9 mL生理鹽水試管中，充分混勻，制成10-1的樣品勻液，同法操作制備10倍稀釋樣品勻液，使其達(dá)到10-5。

1.3.3 平板計(jì)數(shù)法

在無(wú)菌條件下，將上述每個(gè)稀釋度的樣品勻液分別吸取1 mL于2個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)，標(biāo)號(hào)為a和b。同時(shí)分別取1 mL無(wú)菌稀釋液加入2個(gè)無(wú)菌平皿作空白對(duì)照。及時(shí)將20～25 mL冷卻至46 ℃的孟加拉紅瓊脂傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。待培養(yǎng)基完全凝固后，置于（28±1）℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并記錄培養(yǎng)至第5 d的結(jié)果。

1.3.4 計(jì)數(shù)與報(bào)告

培養(yǎng)結(jié)束后，按照GB 4789.15—2016標(biāo)準(zhǔn)和能力驗(yàn)證所附的結(jié)果報(bào)告單的要求嚴(yán)格進(jìn)行計(jì)數(shù)和報(bào)告。填好記錄報(bào)告單后，校核人員還要仔細(xì)查看，防止出現(xiàn)錯(cuò)誤[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品檢測(cè)結(jié)果

中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心的2份測(cè)試樣品測(cè)試的具體結(jié)果如表1和表2。

表1 樣品Z-V001測(cè)試結(jié)果表

表2 樣品Z-W761測(cè)試結(jié)果表

2.2 能力驗(yàn)證結(jié)果

此次檢測(cè)結(jié)果樣品20-V001和20-W761霉菌和酵母計(jì)數(shù)分別為250 CFU·mL-1和660 CFU·mL-1，評(píng)價(jià)值Z值分別為0.1和-0.1。通過(guò)權(quán)威的驗(yàn)證組織來(lái)評(píng)價(jià)上述檢測(cè)出的相關(guān)結(jié)果，|Z|＜2為滿(mǎn)意結(jié)果，可見(jiàn)，此次評(píng)價(jià)結(jié)果是滿(mǎn)意的。由此可知，該實(shí)驗(yàn)室具備良好的霉菌和酵母計(jì)數(shù)檢驗(yàn)水平和能力。

2.3 結(jié)果分析

實(shí)驗(yàn)室要做好能力驗(yàn)證，檢測(cè)過(guò)程中必須控制好每一個(gè)步驟，才能保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確有效。在能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)前需要做好前期的準(zhǔn)備工作，包括人員安排、培養(yǎng)基和試劑、相關(guān)實(shí)驗(yàn)儀器、試驗(yàn)方法等。試驗(yàn)用培養(yǎng)基和試劑要進(jìn)行監(jiān)控，確保其在有限期內(nèi)。實(shí)驗(yàn)用器材要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的滅菌，防止這些檢驗(yàn)器材被污染，影響檢驗(yàn)結(jié)果。樣品液在制備和稀釋的過(guò)程中，要確保試液混合均勻，否則影響計(jì)數(shù)結(jié)果。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，為避免環(huán)境因素的影響，實(shí)驗(yàn)要設(shè)置空白對(duì)照組，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性[6]。

3 結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證結(jié)果為滿(mǎn)意，說(shuō)明筆者所在實(shí)驗(yàn)室測(cè)定霉菌和酵母計(jì)數(shù)時(shí)可以取得準(zhǔn)確的結(jié)果，符合相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和要求，也能更好地為地方食品安全事業(yè)的健康發(fā)展貢獻(xiàn)應(yīng)有的力量。實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)能力的一種手段，可以相對(duì)真實(shí)可靠地反映出實(shí)驗(yàn)室所具備的檢測(cè)能力，同時(shí)也有助于提升實(shí)驗(yàn)室的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力[7]。