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    p16/Ki67雙染在宮頸病變患者篩查中的價值

    2021-09-04 02:07:42陳春燕張仁超王少曉
    中國醫(yī)學(xué)工程 2021年8期
    關(guān)鍵詞:檢測

    陳春燕,張仁超,王少曉

    [1.深圳市寶安區(qū)福永人民醫(yī)院 病理科,廣東 深圳 518000;2.中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院(光明)病理科,廣東 深圳518000]

    宮頸癌是的常見婦科腫瘤之一,其發(fā)病與生 物學(xué)因素、行為因素及遺傳因素相關(guān),是多種因素綜合產(chǎn)生的結(jié)果,近年來其發(fā)病率逐漸增加,全世界每年新發(fā)約50 萬例,死亡約20 萬例,給女性生命健康安全造成嚴(yán)重威脅[1]。宮頸薄層細(xì)胞學(xué)(TCT)和人乳頭瘤病毒(HPV)篩查是當(dāng)前宮頸癌篩查的主要手段[2]。而HPV 檢測并不能區(qū)分一過性病毒感染和持續(xù)性病毒感染,細(xì)胞學(xué)檢測則受限于醫(yī)生的操作技術(shù)和本身的靈敏度,使得尋找更為相關(guān)的客觀指標(biāo),及早篩查宮頸病變患者,是當(dāng)前重要的研究問題[3]。本研究中對80例宮頸病變患者的p16/Ki67 進(jìn)行免疫染色檢測,探究p16/Ki67 染色在臨床病變篩查中的應(yīng)用。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    以2017 年1 月至2020 年1 月在深圳市寶安區(qū)福永人民醫(yī)院進(jìn)行篩查的宮頸病變患者80 例為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):①年齡34~62 歲;②經(jīng)子宮頸刮片細(xì)胞學(xué)檢測為意義不明的不典型鱗狀細(xì)胞(ASC-US)及以上;③通過宮頸活體組織檢查確定病變等級;④能夠配合研究且資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①存在盆腔放療史;②存在宮頸病史;③懷孕患者;④應(yīng)用免疫性藥物治療;⑤存在免疫系統(tǒng)疾病。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批。

    1.2 方法

    以取樣刷采集宮頸脫落細(xì)胞,用消化液(清洗液∶冰醋酸為9∶1)處理洗去黏液和血液,4℃環(huán)境下保存。由操作經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師制備細(xì)胞涂片、制片并閱片,參照TBS 標(biāo)準(zhǔn)描述診斷結(jié)果[4]。細(xì)胞學(xué)檢測陽性(ASC-US 及以上)的患者采集子宮頸活體組織進(jìn)行病理檢查,根據(jù)結(jié)果進(jìn)行對癥處理。

    使用APTIMA HPV Assay 試劑盒(美國豪洛捷)和PANTHER System 檢測系統(tǒng)(美國豪洛捷)對樣本中HPV E6 和E7 的表達(dá)進(jìn)行檢測,操作步驟按照說明書進(jìn)行。此方法僅可對定性檢測高危型HPV,不可區(qū)分病毒的確切類型。

    使用p16/Ki67 檢測試劑盒(福州邁新)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,步驟嚴(yán)格按照說明書要求操作,由專業(yè)技術(shù)人員觀察染色結(jié)果并判斷。判斷標(biāo)準(zhǔn)為:同一細(xì)胞細(xì)胞核呈褐色或黃色且細(xì)胞質(zhì)呈紅色為陽性,同一細(xì)胞僅見一種顏色或未見顏色為陰性[5]。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率(%)表示,行χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 宮頸病變檢查結(jié)果

    80 例研究對象中TCT 檢查為ASC-US 59 例,不能排除高度上皮內(nèi)病變的不典型鱗狀上皮(ASC-H)4 例,低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)14例,高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)3 例。p16/Ki67染色陽性共45 例,ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL 分級患者中p16/Ki67 陽性比例分別為45.76%、75.00%、85.71% 和100.00%,隨著TCT分級增加,p16/Ki67 染色的陽性率增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);HPV 陽性共54 例,ASCUS、ASC-H、LSIL 和HSIL 分級患者中HPV 陽性比例分別 為 66.10%、50.00%、71.43% 和100.00%,不同TCT 分級患者的HPV 陽性率間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    表1 p16/Ki67 染色和HPV 檢測在不同宮頸病變患者中的比較(例)

    2.2 p16/Ki67 染色和HPV 檢測的敏感性和特異性

    組織學(xué)檢查為金標(biāo)準(zhǔn),80 例患者中診斷為LSIL 及以上病變者17 例,LSIL 以下病變者63 例。p16/Ki67 雙染診斷LSIL 及以上病變的敏感性為88.24%,特異性為52.38%;HPV 檢測LSIL 以下病變的敏感性為76.47%,特異性為34.92%。p16/Ki67染色和HPV 檢測的敏感性間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.366,P=0.545),特異性間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.904,P=0.048)。見表2。

    表2 p16/Ki67 染色和HPV 檢測的敏感性和特異性(例)

    3 討論

    宮頸癌是威脅女性生命安全的第二大惡性腫瘤,在中低收入國家中其發(fā)病和死亡情況均僅次于乳腺癌,位居第2 位,進(jìn)行有效篩查和預(yù)防是宮頸癌防治的重要措施[6]。進(jìn)行宮頸癌篩查和接種HPV 疫苗是國際上推薦的防控方案,但HPV疫苗接種率仍處于較低水平,有效篩查仍是女性預(yù)防宮頸癌及宮頸病變的重要手段[7]。細(xì)胞學(xué)檢查、陰道鏡檢查和組織學(xué)檢查是宮頸病變診斷的主要步驟,TCT 是宮頸病變檢查的第一步,根據(jù)TBS 分類標(biāo)準(zhǔn)可將患者分為:正常范圍(NILM)、ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL,診斷為ASC-US及以上的患者為陽性,陽性患者進(jìn)行陰道鏡檢查和組織學(xué)檢查,而細(xì)胞學(xué)檢查對技術(shù)人員操作有一定要求,且有漏檢的情況[8]。

    美國陰道鏡和宮頸病例學(xué)會和美國病理醫(yī)師學(xué)會在2012 年發(fā)布的指南中提出,分子生物學(xué)標(biāo)志物Ki67 和p16 可用于宮頸癌前上皮細(xì)胞病變的輔助診斷[9]。p16 能夠通過抑制細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶的活性抑制增殖,HPV 整合感染可導(dǎo)致p16 蛋白表達(dá)上調(diào),Ki67 表達(dá)在細(xì)胞的有絲分裂期,是細(xì)胞增殖的有效標(biāo)記[10-11]。本研究中所有研究對象均為TCT 檢查陽性患者,其中ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL 患者所占比例分別為73.75%、5.00%、17.50%和3.75%,p16/Ki67 染色陽性在不同分級的患者中陽性率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,病變越嚴(yán)重,陽性率越高,與宮頸病變的發(fā)展導(dǎo)致細(xì)胞迅速增殖有關(guān)。

    HPV 感染是宮頸病變的風(fēng)險因素,持續(xù)的病毒感染可能伴隨HPV DNA 整合至宿主細(xì)胞基因組中,導(dǎo)致E6 和E7 蛋白過表達(dá),下調(diào)抑癌基因LRP1B 和FHIT 的表達(dá),上調(diào)癌基因HMGA2 和MYC 的表達(dá),引發(fā)宮頸上皮細(xì)胞癌變[12]。本研究中HPV 檢測陽性在ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL 患者所占比例分別為66.10%、50.00%、71.43% 和100.00%,陽性率有升高的趨勢,朱梅娟[13]對260 例行組織學(xué)檢查的患者分析,結(jié)果顯示患者病變越嚴(yán)重,HPV 檢測陽性率越高,與本研究結(jié)果一致,提示對女性群體進(jìn)行HPV 感染的檢測能夠輔助診斷宮頸病變,有利于對HPV 陽性患者及早干預(yù)。

    官燕飛等[14]對p16/Ki67 雙染和HPV 檢測對低級別鱗狀上皮內(nèi)病變分流診斷的價值進(jìn)行分析,結(jié)果顯示p16/Ki67 染色、HPV 檢測和聯(lián)合檢測均顯示出良好的診斷效率,在患者分流管理中有積極的臨床意義。有報(bào)道顯示p16/ki67 染色可降低陰道鏡轉(zhuǎn)診率,本研究中p16/Ki67 染色用于診斷的敏感性為88.24%,與HPV 檢測的敏感性無顯著性差異,p16/Ki67 染色用于診斷的特異性為52.38%,顯著高于HPV 檢測的特異性。和細(xì)胞學(xué)檢查及HPV 檢測比較起來,p16/Ki67 染色無創(chuàng)高效,操作簡單,便于掌握,且價格經(jīng)濟(jì),更適合推廣至醫(yī)療設(shè)施和經(jīng)濟(jì)發(fā)展不夠發(fā)達(dá)的農(nóng)村地區(qū),重要的臨床意義。

    綜上所述,p16/Ki67 染色陽性與患者的病變分級相關(guān),在對宮頸癌病變的診斷中顯示出良好的敏感性和特異性,可用于宮頸癌篩查的輔助診斷,有重要的參考價值。

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