孕激素受體膜成分2在卵巢漿液性腫瘤中的表達及意義

李 然，鄭 洪，2

(1.遵義醫(yī)科大學(xué) 病理學(xué)教研室，貴州 遵義 563099；2.遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 病理科，貴州 遵義 563099)

在我國卵巢癌發(fā)病率并不高，但因其死亡率較高，是造成婦科惡性腫瘤死亡最常見的原因，應(yīng)視為婦科重點防治的惡性腫瘤之一[1-2]。孕激素在卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展中起到極為重要作用，有調(diào)查發(fā)現(xiàn)，避孕藥和妊娠可降低卵巢癌發(fā)病率[3]。在體內(nèi)、外孕激素均能抑制順鉑對卵巢癌細(xì)胞的凋亡作用[4],但使孕激素發(fā)揮此作用不是由核受體(PGR)介導(dǎo)，而是其他的介質(zhì)如孕激素膜受體成分(PGRMC)介導(dǎo)[5]。PGRMC為一類小分子蛋白，目前發(fā)現(xiàn)有PGRMC1和PGRMC2兩種。已有研究證實，PGRMC1在乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、宮頸癌和口腔癌表達[6]。在卵巢癌中，PGRMC1能促進腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。沈建江等[7]的研究發(fā)現(xiàn)，Oroxylin A增加了過氧化物酶體增殖物激活受體γ的表達，并改變了卵巢癌細(xì)胞中PGRMC2的表達，對卵巢癌的治療方面起作用。但關(guān)于PGRMC2在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中的作用還鮮有報道，作用機制尚不清楚。因此本文探討PGRMC2在卵巢漿液性癌中的表達水平和臨床病理指標(biāo)及預(yù)后有無關(guān)系，為卵巢漿液性癌探尋新的診斷和治療靶點。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科2012至2019年卵巢漿液性癌石蠟標(biāo)本90例，所有患者術(shù)前均未接受化療。年齡19～84歲，中位年齡53歲，年齡<53歲43例，≥53歲47例；病理分級：根據(jù)2014版WHO女性生殖器官腫瘤分類中漿液性腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，分為高級別69例(高級別組)，低級別21例(低級別組)；臨床分期：按照FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)[9],I+II期19例，III+IV期71例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移75例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例。卵巢漿液性囊腺瘤20例(良性組，年齡28～52歲，中位年齡40歲)，卵巢交界性腫瘤15例(交界性組，年齡32～61歲，中位年齡49歲)，正常輸卵管傘端上皮和正常卵巢15例為對照組(年齡26～58歲，中位年齡50歲)。所有組織經(jīng)過中性福爾馬林固定，石蠟包埋。

1.2 試劑 兔抗人PGRMC2一抗購買于Abcam公司；抗體工作濃度1∶250，Envision試劑盒購于福州邁新公司。

1.3 方法及陽性結(jié)果的判斷 采用Envision法檢測各組中PGRMC2蛋白的表達情況，以PBS緩沖液代替一抗作為空白對照，以人的正常肝組織為陽性對照。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)被染色為棕黃色為陽性。

1.4 圖像分析 每張切片用美國MediaCybemetics公司開發(fā)的Image-Pro Plus圖像分析軟件測量平均光密度值(MOD)，隨機選取各組每張切片5個高倍鏡視野(×400)，測量每個高倍鏡視野陽性反應(yīng)的平均光密度值，以每例5個高倍視野的平均光密度的平均值作為該例的平均光密度測量值。

1.5 隨訪 所有病例均采用電話隨訪方式，隨訪截止時間為2020年9月16日。在高級別組中，有40例死于隨訪期限內(nèi)，截尾數(shù)據(jù)29例(均存活)，隨訪率為100%(69/69)；在低級別組中，有2例死于隨訪期限內(nèi)，截尾數(shù)據(jù)19例(其中1例失訪，其余均存活)，隨訪率為95.2%(20/21)。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析 通過SPSS17.0軟件，χ2檢驗分析所有計數(shù)資料，t檢驗分析計量資料，Kaplan-Meier法進行單因素生存分析。結(jié)果為P<0.05時，表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PGRMC2在各組中的陽性表達率 陽性定位主要在腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒狀染色(見圖1)。PGRMC2在各組中的陽性表達率分別為對照組13.3%(2/15)、良性組25.0%(5/20)、交界性組60.0%(6/15)、低級別組76.2%(16/21)、高級別組82.6%(57/69)。高級別組分別與對照組、良性組、交界性組比較，低級別組分別與對照組、良性組、交界性組比較，交界性組與對照組、良性組比較，差異均存在統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；高級別組與低級別組比較，對照組與良性組比較，均不存在統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，見表1)。

A:PGRMC2在對照組中的輸卵管上皮呈陽性表達(IHC,×200)；B:PGRMC2在良性組中的表面上皮呈陽性表達(IHC,×200)；C:PGRMC2在交界性組中的表面上皮呈陽性表達(IHC,×200)；D:PGRMC2在低級別組中的腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)中陽性表達(IHC,×200)；E:PGRMC2在高級別組中的腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)中陽性表達(IHC,×200)。圖1 PGRMC2在各組中的陽性表達情況

2.2 PGRMC2在各組中的陽性表達量 對照組15例，MOD(0.005±0.003)；良性組20例，MOD(0.066±0.020)；交界性組15例，MOD(0.084±0.026)；低級別組21例，MOD(0.124±0.018)；高級別組69例，MOD(0.152±0.028)。高級別組分別與對照組、良性組、交界性組比較，低級別組分別與對照組、良性組、交界性組比較，交界性組與對照組比較，良性組與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；高級別組與低級別組比較，交界性組與良性組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表2、圖2)。

表2 各組中PGRMC2的平均關(guān)密度值(MOD)

A、B：PGRMC2表達強度測量結(jié)果。圖2 PGRMC2表達強度

2.3 PGRMC2的表達與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 PGRMC2蛋白的表達水平在臨床III+IV期組明顯高于臨床I+II期組，差異有統(tǒng)計學(xué)(P<0.05)，PGRMC2蛋白的表達水平在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)(P<0.05)。PGRMC2蛋白的表達水平與年齡、病理分級無關(guān)，差異沒有統(tǒng)計學(xué)(P>0.05，見表3)。

表3 PGRMC2在卵巢漿液性癌中的表達與患者臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

2.4 PGRMC2的表達與預(yù)后的關(guān)系 在高級別組中，患者總生存時間范圍是1～80.4個月，平均25.29±20.11個月。患者的3年生存率為42.9%(18/42)，5年生存率為28.5%(6/21)(見表4)，其中臨床分期I+II期12例，III+IV期57例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移10例(見表5)。在低級別組中，患者總生存時間范圍是49～79.6個月，平均42.27±21.37個月?；颊叩?年生存率為91.6%(11/12)，5年生存率為71.4%(5/7)(見表4)，其中臨床分期I+II期7例，III+IV期14例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例(見表5)。應(yīng)用Kaplan-Meier 法分析得出：在高級別組中，PGRMC2蛋白陽性表達的總生存時間比PGRMC2蛋白陰性表達的總生存時間短(P<0.05)；在低級別組中，PGRMC2蛋白陽性表達與總生存時間沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，見圖3A、B)。

表4 高級別組與低級別組患者的3年及5年生存率

表5 PGRMC2的表達與預(yù)后的關(guān)系

高級別組中，臨床分期I+II期、III+IV期且PGRMC2蛋白陽性表達的總生存時間均比I+II期、III+IV期且PGRMC2蛋白陰性表達的總生存時間短(P<0.05，見圖3C、D)。有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移且PGRMC2蛋白陽性表達的總生存時間均比有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移且PGRMC2蛋白陰性表達的總生存時間短(P<0.05，見圖3E、F)。低級別組中，臨床分期I+II期、III+IV期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移且PGRMC2蛋白陽性表達與總生存時間沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，見圖3G～J)。

A:高級別組中PGRMC2的生存分析函數(shù)(P<0.05)；B:低級別組中PGRMC2的生存分析函數(shù)(P>0.05)；C:高級別組PGRMC2在I+II期中生存分析函數(shù)(P<0.05)；D:高級別組PGRMC2在III+IV期中生存分析函數(shù)(P<0.05)；E:高級別組PGRMC2在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中生存分析函數(shù)(P<0.05)；F:高級別組PGRMC2在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中生存分析函數(shù)(P<0.05)；G:低級別組PGRMC2在I+II期中生存分析函數(shù)(P>0.05)；H:低級別組PGRMC2在III+IV期中生存分析函數(shù)(P>0.05)；I:低級別組PGRMC2在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中生存分析函數(shù)(P>0.05)；J:低級別組PGRMC2在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中生存分析函數(shù)(P>0.05)。圖3 各級別組PGRMC2在不同臨床分期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的生存分析函數(shù)

3 討論

PGRMC2是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種小分子蛋白，在多種細(xì)胞和組織中表達，如新生大鼠的正常卵巢、卵巢癌細(xì)胞中、正常肝組織以及肝癌細(xì)胞中[10-12]。在正常卵巢組織中PGRMC2能調(diào)節(jié)卵泡的發(fā)育和成熟[13]。在卵巢癌細(xì)胞中，PGRMC2和PGRMC1都能與細(xì)胞色素P450(CYP)結(jié)合，在腫瘤的進展中起重要作用，揭示了PGRMC2的作用與PGRMC1相似[14]。在卵巢癌中PGRMC1能促進卵巢癌細(xì)胞增殖[15]。Albrecht等[12]研究還表明PGRMC2與PGRMC1的作用有差別之處，降低PGRMC2水平導(dǎo)致較高的遷移率。在一項子宮頸腺癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中研究發(fā)現(xiàn)大量PGRMC2丟失，提示PGRMC2可能在子宮頸腺癌轉(zhuǎn)移中起抑制因子的作用[16]。有研究推測PGRMC2對卵巢癌遷移的影響可能是通過激活或抑制特定的CYP來介導(dǎo)的。因此兩者具有相似的功能，但在某些功能上，兩者又有差異，尤其是在腫瘤轉(zhuǎn)移方面的差異。

本研究結(jié)果顯示，在高級別組和低級別組當(dāng)中，PGRMC2的陽性表達率分別為82.6%、76.2%，陽性強度分別為0.152、0.124，與其他3組比較顯著增高，并且差異有顯著性，但在高級別組與低級別組之間無明顯差異，這表明PGRMC2在卵巢漿液性癌和卵巢良性腫瘤中表達是不一樣的，卵巢漿液性癌中表達高，而卵巢良性腫瘤中表達低。可以推測PGRMC2可促進卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展，同時PGRMC2可能有助于輔助卵巢漿液性癌的診斷及鑒別診斷。

同時，我們在對PGRMC2蛋白與卵巢漿液性癌的臨床病理特征比較時發(fā)現(xiàn)，患者臨床分期越晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例數(shù)越多，PGRMC2表達率越高。提示PGRMC2不僅與卵巢漿液性癌的進展密不可分，而且還與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在一項乳腺癌的研究中，II期乳腺癌PGRMC2的mRNA轉(zhuǎn)錄水平明顯低于III期乳腺癌[17]。因此，PGRMC2的表達程度與病期進展相一致。而在轉(zhuǎn)移方面，最近在體外研究發(fā)現(xiàn)，HO-8910細(xì)胞PGRMC2蛋白表達明顯高于SKOV3細(xì)胞，在孕激素相同濃度及時間作用下，SKOV3細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力較HO-8910細(xì)胞強，認(rèn)為PGRMC2的高表達可能抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移，可能是通過調(diào)節(jié)Wnt通路引起相關(guān)蛋白的改變從而影響卵巢癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[18]。本研究與上述研究結(jié)果存在差異，可能因為體外與體內(nèi)環(huán)境以及檢測手段不一樣等客觀因素造成的，同時PGRMC2對卵巢癌細(xì)胞的遷移影響可能是多條通路共同作用的結(jié)果，而且本研究中PGRMC2的功能可能受到某些因素抑制?？偟膩碚fPGRMC2影響卵巢癌細(xì)胞遷移的機制尚未完全清晰，有待進一步深入研究。

此外本研究顯示，在高級別組中PGRMC2蛋白為陰性的患者總生存時間要長于PGRMC2蛋白為陽性的患者，但低級別組中PGRMC2與患者的總生存時間沒有關(guān)系。同時有研究表明，PGRMC2的表達不僅與食管基底樣鱗癌的增殖與進展有關(guān)，而且其高表達還與食管基底樣鱗癌的預(yù)后相關(guān)[19]。因此，我們推測在卵巢高級別漿液性癌中，PGRMC2還可作為預(yù)后不良的指標(biāo)之一。

綜上所述，本研究表明PGRMC2可作為卵巢漿液性癌診斷、鑒別診斷以及判斷臨床分期及預(yù)后的潛在靶標(biāo)，具有一定的臨床指導(dǎo)意義與價值。