羊同期發(fā)情腹腔鏡輸精最佳時間的研究

趙 霞，馬躍軍，李玉榮，劉 斌，吳鐵成，烏蘭其其格，蘇雅拉圖，烏仁圖雅

（1.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特010031；2.錫林郭勒職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000；3.赤峰市巴林左旗烏蘭達(dá)壩蘇木動物防疫站， 內(nèi)蒙古 巴林左旗 025463；4. 赤峰市巴林左旗畜牧工作站， 內(nèi)蒙古 巴林左旗025450）

腹腔鏡是用于腹腔內(nèi)檢查和治療的內(nèi)窺鏡，實質(zhì)上是一種纖維光源內(nèi)窺鏡， 結(jié)構(gòu)包括腹腔鏡鏡頭、 光源系統(tǒng)和光導(dǎo)纖維。 運用腹腔鏡系統(tǒng)技術(shù)，可通過腹腔鏡鏡頭觀察腹腔內(nèi)的情況，便于進(jìn)行精確操作，具有手術(shù)時間短、創(chuàng)口小、并發(fā)癥少、安全性高、創(chuàng)口恢復(fù)快等優(yōu)點。通過腹腔鏡輸精將公羊精液直接注入母羊的子宮角， 與其他人工授精方法相比， 由于精液可以在離受精地點相當(dāng)近的地方沉積， 所以腹腔鏡人工授精技術(shù)在羊繁殖上具有顯著的優(yōu)勢。近幾年來，腹腔鏡技術(shù)發(fā)展迅速，既可用于臨床檢查，也可用于治療，是一種較為先進(jìn)的微創(chuàng)技術(shù)， 在治療外科疾病中發(fā)揮的作用已受到越來越多的關(guān)注。

實際生產(chǎn)中， 在實施腹腔鏡人工輸精前，必須對羊群進(jìn)行同期發(fā)情處理，利用外源激素（孕酮、氯前列烯醇、孕馬血清等）調(diào)節(jié)發(fā)情或排卵時間［1-2］，最大限度地提高妊娠率。 腹腔鏡一次性輸精對于授精時間有嚴(yán)格的要求。 精液進(jìn)入子宮角過早或過晚都會影響受胎率。 國內(nèi)外學(xué)者對腹腔鏡輸精技術(shù)進(jìn)行了一系列研究， 但是由于輸精時間各不相同使受胎率相差較大。為此，該研究對羊同期發(fā)情腹腔鏡輸精的最佳時間進(jìn)行了探索，以期為同期發(fā)情腹腔鏡人工輸精技術(shù)在生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

1.1.1 試驗?zāi)秆?選擇繁殖機能正常、體質(zhì)健壯、營養(yǎng)狀況良好、膘情中等以上的適齡母羊，預(yù)試期內(nèi)完成驅(qū)蟲和常規(guī)疫苗注射。

1.1.2 試驗種公羊 選擇中等以上膘情、 精液品質(zhì)好的2～3 歲種公羊。 在配種前一個月開始按配種期的日糧標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行飼喂，保證飼料中蛋白質(zhì)、維生素及礦物質(zhì)的合理供給， 同時補充干燥青草等粗飼料，并進(jìn)行修蹄；排空公羊睪丸中積存的大量死亡精子， 在初期每5 d 采精1 次，2～3 d 后改為每3 d 采精1 次， 再經(jīng)過2～3 d 改為每天采精1次。 對種公羊的性欲和精液品質(zhì)進(jìn)行檢測。

1.2 藥品

國產(chǎn)孕酮海綿栓； 注射用孕馬血清促性腺激素（PMSG），規(guī)格：1 000 IU/支；青霉素；生理鹽水。

1.3 器材

自制羊用胚胎移植手術(shù)架，子宮角輸精器，腹腔鏡，持針器，手術(shù)刀，手術(shù)用剪刀，縫合針及線，注射器。

1.4 同期發(fā)情處理

試驗?zāi)秆蜿幍纼?nèi)放置孕酮海綿栓10～14 d，撤栓時肌肉注射PMSG 250～330 IU/只。

1.5 試情

撤栓后12～24 h 開始試情，早晚各1 次。 對發(fā)情母羊做標(biāo)記，記錄發(fā)情時間。利用腹腔鏡輸精的母羊輸精前24 h 空腹處理。

1.6 分組

按撤栓后不同時間以及不同發(fā)情時間分4 組進(jìn)行腹腔鏡輸精。 1 組為撤栓后46～50 h 輸精（n=138），2 組為撤栓后50～54 h 輸精（n=156），3 組為撤栓后54～58 h 輸精 （n=275），4 組為羊發(fā)情后30～36 h 輸精（n=226）。

1.7 腹腔鏡輸精

母羊輸精前5～10 min 肌肉注射靜松靈0.2 mL/只，完全麻醉后將羊仰臥，抬高后軀保定在自制的手術(shù)架上使母羊外陰與地面呈80°～90°，借助腹腔內(nèi)窺鏡，采用套管針穿刺方法，用專用的腹腔鏡輸精器將精液直接輸入母羊的2 個子宮角。

1.8 妊娠檢查

輸精后第40～45 天進(jìn)行B 超檢查， 并計算受胎率。

2 結(jié)果與分析

由表1 可知， 發(fā)情后30～36 h 輸精的母羊（4組）受胎率最高，為97.79%，其次為撤栓后50～54 h 輸精的母羊（2 組），受胎率為97.44%，撤栓后46～50 h 輸精的母羊（1 組）受胎率為91.30%；撤栓后54～58 h 輸精的母羊 （3 組） 受胎率最低，為89.82%。 總體來看，在撤栓后46～58 h 采用腹腔鏡輸精技術(shù)對經(jīng)同期發(fā)情處理的母羊進(jìn)行人工授精，受胎率均較高，最佳輸精時間為撤栓后50～54 h 以及母羊發(fā)情后30～36 h。

表1 不同輸精時間輸精后母羊受胎情況

3 討論

目前， 羊的同期發(fā)情人工授精技術(shù)在生產(chǎn)中得到推廣，但因人工輸精工作計劃、操作人員技術(shù)水平差異而導(dǎo)致母羊受胎率大不相同［3-4］。在受體母羊品種相同的基礎(chǔ)上，冷凍精液質(zhì)量、精子數(shù)量、母羊體況和受精部位（精子沉積部位）等因素會影響受胎效果，此外，輸精時間也是影響腹腔鏡輸精后母羊受胎率的重要因素。因此，掌握最佳輸精時間與排卵時間關(guān)系是決定母羊人工授精成功率的關(guān)鍵。

羊的自然交配發(fā)生在母羊發(fā)情初期或前期，而排卵則發(fā)生在發(fā)情期結(jié)束前后， 卵子保持受精能力的時間為5～6 h，而精子在母羊生殖道內(nèi)維持活力的時間較長，一般為1～2 d［5］。 精子進(jìn)入母羊生殖道后快速運行至受精部位， 到達(dá)時間要先于卵子，在此期間精子得以獲能。 因此，人工授精應(yīng)在排卵前進(jìn)行，以便排卵時在受精部位（輸卵管壺腹部）沉積大量精子［4］。 總的原則是輸精應(yīng)在卵子排出以前或排卵過程中進(jìn)行，排卵后輸精，受精的可能性逐漸降低，甚至不能受精；但也不能過早輸精，否則精子衰老，活力降低，也很難使卵子受精［4-5］。 在常規(guī)輸精情況下，每天2 次授精，上午發(fā)情的動物應(yīng)在晚上（發(fā)情10 h 后）進(jìn)行授精，晚上發(fā)情的動物應(yīng)在次日上午（發(fā)情14 h 后）進(jìn)行授精［4-5］。 然而，授精的時間需要根據(jù)使用的是新鮮或冷凍精液來調(diào)整。當(dāng)使用新鮮精液輸精時，精液在生殖道內(nèi)沉積的時間最好不要超過24 h， 而對于冷凍精液輸精而言， 因為冷凍精液的精子壽命短， 所以精液在母畜生殖道內(nèi)沉積時間不得超過12 h。

在實際生產(chǎn)中， 常使用孕酮海綿栓對母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理， 該方法往往導(dǎo)致生殖系統(tǒng)發(fā)生不同程度的炎癥，造成常規(guī)輸精方法受胎率較低。腹腔鏡輸精技術(shù)中， 技術(shù)人員可利用內(nèi)窺鏡直接觀察母羊子宮， 可以客觀評估子宮狀況以及輸精難易程度， 避開生殖道內(nèi)的炎癥部位和宮頸皺褶等屏障，將精液直接注入母羊子宮角，是一種精準(zhǔn)輸精方法。當(dāng)精液注入子宮角時，精液沉積在距受精地點相當(dāng)近的地方， 從而有利于精子和卵子的結(jié)合， 與其他的人工輸精方法相比具有明顯的優(yōu)勢。 腹腔鏡輸精技術(shù)的應(yīng)用使新鮮精液和冷凍精液輸精后的受胎率得到了大幅度的提升， 為在當(dāng)前供種不足的情況下使用新鮮精液、 冷凍精液進(jìn)行輸精提供了有力的技術(shù)保障。

當(dāng)前利用腹腔鏡在固定時間內(nèi)進(jìn)行子宮內(nèi)授精已經(jīng)成為一種較為成熟的輸精技術(shù)， 但因操作者和輸精計劃的不同使受胎率存在較大差異。 該研究結(jié)果表明， 使用國產(chǎn)孕酮海綿栓+肌肉注射PMSG 是一種誘導(dǎo)母羊發(fā)情最經(jīng)濟(jì)、 最有效的方法， 而且撤栓后的46～58 h 內(nèi)進(jìn)行腹腔鏡輸精具有較高的受胎率。此外，在經(jīng)同期發(fā)情處理的母羊撤栓后50～54 h 內(nèi)輸精時受胎率較其他2 個撤栓后輸精時段高，證明腹腔鏡單次輸精可以保證良好的受胎率，降低人工輸精的費用。 因此，技術(shù)人員如果合理安排同期發(fā)情母羊數(shù)量， 根據(jù)其輸精能力分批次進(jìn)行腹腔鏡輸精，可獲得較高的受胎率。

當(dāng)前， 發(fā)達(dá)國家的養(yǎng)羊業(yè)正在從自由放牧向集約化飼養(yǎng)方向發(fā)展，達(dá)到了很高的集約化程度。肉羊高效同期發(fā)情技術(shù)、腹腔鏡輸精技術(shù)，可使母羊定期集中配種、集中產(chǎn)羔、集中管理，實現(xiàn)了母羊二年三產(chǎn)、單產(chǎn)多胎的效果，縮短了母羊的繁殖周期，節(jié)約了公羊的飼養(yǎng)成本。通過調(diào)整配種和產(chǎn)羔時間，提高羔羊成活率，實現(xiàn)訂單生產(chǎn)和錯峰上市，提高了母羊的繁殖力。

4 結(jié)論

采用同期發(fā)情配合腹腔鏡輸精技術(shù)進(jìn)行母羊人工授精， 最佳輸精時間為撤栓后50～54 h 以及母羊發(fā)情后30～36 h。