梅毒血清固定患者淋巴細(xì)胞亞群的表達及臨床意義

龔愛紅，王繪翔，李彩虹，張振國（大連市皮膚病醫(yī)院檢驗科，遼寧大連 116021）

梅毒血清固定的定義目前國際上仍無統(tǒng)一認(rèn)識。一般認(rèn)為，梅毒患者經(jīng)正規(guī)治療后，臨床癥狀消失，且無新發(fā)感染，亦無神經(jīng)梅毒發(fā)生，但梅毒螺旋體非特異性抗體滴度下降至一定程度后即不再下降，而長期維持在低滴度水平，此現(xiàn)象稱為梅毒血清固定［1］。淋巴細(xì)胞是機體細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分。機體正常情況下，各種淋巴細(xì)胞亞群（T 淋巴細(xì)胞、B 淋巴細(xì)胞、NK 細(xì)胞）保持一定的數(shù)量和比例，相互作用，穩(wěn)定調(diào)節(jié)，維持著機體正常的免疫功能；當(dāng)不同的淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量及功能發(fā)生異常改變時，機體免疫平衡遭到破壞，甚至導(dǎo)致疾病的發(fā)生。本研究主要觀察梅毒血清固定型的發(fā)生與機體免疫狀態(tài)的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2019年5月至2020年11月在大連市皮膚病醫(yī)院接受治療的梅毒血清固定患者48例，其中男性29例、女性19例，平均年齡55.0歲；快速血漿反應(yīng)素試驗（RPR）滴度轉(zhuǎn)為陰性的治療有效的梅毒患者29 例，其中男性18 例、女性11例，平均年齡51.3歲；體檢健康者30 例，其中男性13例、女性17例，平均年齡51.7歲；梅毒血清固定患者和治療有效的梅毒患者腦脊液性病研究實驗室試驗（VDRL）、梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）均呈陰性，血清人免疫缺陷病毒抗體（HIV-Ab）檢測均呈陰性。體檢健康者外周血VDRL、TPPA和HIV-Ab均呈陰性。各組年齡和性別差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。

1.2 主要試劑及儀器 BriCyte E6 流式細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞公司），旋渦震蕩混勻器（江蘇天翎儀器公司），流式管（浙江拱東醫(yī)療器械公司）。CD3／CD4／CD8／CD45 四色抗體、CD3／CD19／CD16＋56／CD45四色抗體、溶血素（深圳邁瑞公司）等。

1.3 實驗方法

1.3.1 標(biāo)本采集 通過靜脈穿刺采集外周血液，EDTA-K2抗凝，室溫（20～25 ℃）保存，4 h 內(nèi)完成淋巴細(xì)胞亞群檢測。

1.3.2 標(biāo)本處理與檢測 吸取20 μL 四色試劑加入試管底部；吸取50 μL EDTA-K2抗凝靜脈血加入試管底部（避免將血樣沾到試管壁上）；試管在旋渦混勻器上輕旋混勻，室溫（20～25 ℃）避光溫育15 min；向試管中加入450 μL 稀釋后的溶血劑，在旋渦混勻器上輕旋混勻，室溫（20～25 ℃）避光溫育15 min。觀察CD45／SSC 散點圖、CD3／CD19 散點圖、CD3／CD16＋56 散點圖及CD45／SSC 散點圖、CD3／CD4散點圖、CD3／CD8散點圖并設(shè)門，混合標(biāo)本并用流式細(xì)胞儀檢測外周血各群淋巴細(xì)胞的表達情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行。正態(tài)分布的計量資料用表示，3 組間比較用方差分析，組間兩兩比較用LSD-t檢驗；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

通過對梅毒血清固定型患者、梅毒治療有效患者和體檢健康者外周血淋巴細(xì)胞相對計數(shù)和絕對計數(shù)比較（表1、表2）發(fā)現(xiàn)，血清固定組、梅毒治療有效組外周血中的B 淋巴細(xì)胞相對計數(shù)和絕對計數(shù)較健康對照組少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與健康對照組比較，梅毒血清固定患者淋巴細(xì)胞計數(shù)、CD4＋T 淋巴細(xì)胞計數(shù)及B 細(xì)胞計數(shù)均較少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）；而血清固定組與梅毒治療有效組各細(xì)胞相對計數(shù)及絕對計數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。

表1 梅毒血清固定患者與健康人對照組外周血淋巴細(xì)胞相對計數(shù)比較（）

表1 梅毒血清固定患者與健康人對照組外周血淋巴細(xì)胞相對計數(shù)比較（）

注：*，與健康對照組比，P＜0.05。

表2 梅毒血清固定患者與健康人對照組外周血淋巴細(xì)胞絕對計數(shù)比較（／μL，）

表2 梅毒血清固定患者與健康人對照組外周血淋巴細(xì)胞絕對計數(shù)比較（／μL，）

注：*，與健康對照組比較，P＜0.05。

3 討論

目前血清固定發(fā)生的原因尚不明確，其機制研究主要集中于3個方面：一是血清固定患者的細(xì)胞免疫異常，出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫失衡及細(xì)胞免疫抑制導(dǎo)致清除梅毒螺旋體的能力減弱；二是梅毒螺旋體能夠逃避機體免疫反應(yīng)，造成慢性感染；三是血清固定的判斷依賴于梅毒螺旋體非特異性抗體（即抗心磷脂抗體），該抗體可能是針對受損組織釋放的心磷脂而產(chǎn)生的。有學(xué)者認(rèn)為，梅毒血清固定可能是機體的一種特定免疫狀態(tài)而非梅毒螺旋體的持續(xù)存在［2］。

本研究結(jié)果顯示，與健康人對照組相比，梅毒血清固定患者淋巴細(xì)胞計數(shù)、CD4＋T 細(xì)胞計數(shù)及B細(xì)胞計數(shù)均減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05），表明梅毒血清固定患者存在免疫失衡。CD4＋T淋巴細(xì)胞中TH1 細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)為清除體內(nèi)梅毒的主要機制［3］，隨著病情的發(fā)展，CD4＋T 細(xì)胞減少，使皮損內(nèi)螺旋體不能完全被殺滅，造成梅毒螺旋體在體內(nèi)殘留、擴散，并長期持續(xù)刺激機體發(fā)生變態(tài)反應(yīng)，導(dǎo)致機體對病原體清除困難而造成疾病的持久活動性，進而表現(xiàn)為血清固定現(xiàn)象或進一步發(fā)展成晚期梅毒的組織損害。血清固定組、梅毒治療有效組外周血中的B淋巴細(xì)胞絕對計數(shù)較健康對照組減少（P＜0.05）。B 細(xì)胞是體液免疫的主要成員，在免疫中有雙向調(diào)節(jié)作用，并與T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫密切相關(guān)，但參與免疫失衡及免疫抑制的具體作用機制尚不明確。研究表明CD19＋CD24intCD38int成熟型B 細(xì)胞在治療前的梅毒患者及血清固定者體內(nèi)的比例降低，而在血清轉(zhuǎn)陰者中無明顯變化，且在血清固定組及血清轉(zhuǎn)陰組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）；推測血清固定患者B細(xì)胞分化異常，成熟型B細(xì)胞減少而記憶性B細(xì)胞增多，可能與持續(xù)分泌梅毒螺旋體非特異性抗體有關(guān)［4-5］。