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    朧月黃酮類化合物的提取條件研究

    2021-08-27 16:13:43常江駱愛蘭
    現(xiàn)代鹽化工 2021年3期
    關(guān)鍵詞:提取

    常江 駱愛蘭

    摘 要:通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn),對朧月黃酮類化合物的最佳提取工藝進(jìn)行了設(shè)計(jì)優(yōu)化。在料液比為1∶25、乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%、超聲波功率為70 W、超聲時(shí)間為40 min、超聲溫度為40 ℃的提取工藝條件下,黃酮類化合物的得率為1.851%。

    關(guān)鍵詞:朧月;黃酮類化合物;提取

    朧月為景天科風(fēng)車草,屬多肉植物,原產(chǎn)于墨西哥,有耐寒、抗旱、對高低溫及溫差適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn),一般應(yīng)用于特殊生態(tài)環(huán)境的立體綠化[1]。朧月中富含各種黃酮類化合物,具有非常重要的抗氧化和殺菌效果,但目前關(guān)于朧月開發(fā)應(yīng)用的研究較少。

    黃酮類化合物泛指由中央三碳連接兩個(gè)具有酚羥基苯環(huán)的一系列化合物[2],有抗菌消炎、抗氧化、抗衰老等藥理活性[3]。黃酮類化合物廣泛存在于自然界中,是通過植物的光合作用生成的常見的天然有機(jī)化合物,景天三七、紅景天等藥材提取物中都有黃酮類化合物[4-5]。

    近年來,超聲波提取黃酮類化合物的工藝應(yīng)用越來越廣泛。實(shí)踐證明,超聲波提取工藝能有效提高細(xì)胞破碎率,有利于析出有效成分,且操作簡單,物料損失小,提取率相對較高[6]。本實(shí)驗(yàn)利用超聲波提取工藝,通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn),對朧月黃酮類化合物的最佳提取工藝進(jìn)行了設(shè)計(jì)優(yōu)化,為朧月的后續(xù)開發(fā)應(yīng)用提供借鑒。

    1?材料與方法

    1.1? 實(shí)驗(yàn)儀器

    RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠),T6新世紀(jì)紫外-可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司),高功率數(shù)控超聲波清洗器(KQ-100KDE型,昆山市超聲儀器有限公司)。

    1.2? 實(shí)驗(yàn)試劑

    朧月樣品:取新鮮的朧月葉瓣,60 ℃恒溫干燥36 h,研磨成細(xì)粉,置于干燥箱中繼續(xù)烘干至恒重,放于干燥皿中備用。

    蘆丁:規(guī)格98%,分子式C27H30O16,北京百靈威科技有限公司生產(chǎn)。

    1.3? 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1? 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    準(zhǔn)確制備1 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別移取0、2、4、6、8、10 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液置于容量瓶中,分次加入5%亞硝酸鈉溶液1.4 mL、10%硝酸鋁溶液1.4 mL,混勻放置6 min,最后加入4%氫氧化鈉溶液10 mL,搖勻后用體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇定容至50 mL,混勻放置15 min。在510 nm波長處測定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光值。

    設(shè)蘆丁的質(zhì)量濃度為x,測得的紫外吸收值為y,建立線性回歸方程。結(jié)果表明,在0~0.2 mg/mL,線性回歸方程為:

    y=11.024 x+0.003 2(R2=0.999 8)(1)

    1.3.2? 朧月總黃酮的提取測定

    準(zhǔn)確稱取0.500 0 g朧月樣品干粉于50 mL燒杯中,按照一定料液比加入特定體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液,用保鮮膜封口,放在數(shù)控超聲儀中,設(shè)置超聲溫度、超聲時(shí)間、超聲功率等參數(shù),進(jìn)行超聲。超聲結(jié)束后,真空抽濾兩次,即得朧月總黃酮提取液。

    將朧月總黃酮提取液移至50 mL容量瓶中,在510 nm處用紫外-可見分光光度計(jì)測量吸光值。

    用線性回歸方程計(jì)算朧月提取液中的黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù),從而計(jì)算出朧月干粉中黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù),計(jì)算公式為:

    式中,T為朧月樣品干粉的黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù),mg/g;Q為朧月提取液的黃酮質(zhì)量濃度,mg/mL;V為容量瓶體積,mL;m為朧月樣品的干粉質(zhì)量,g。

    平行實(shí)驗(yàn)3次,取平均值。

    1.3.3? 單因素實(shí)驗(yàn)

    準(zhǔn)確稱取0.500 0 g朧月樣品干粉,以朧月黃酮得率為衡量標(biāo)準(zhǔn),分別探討料液比(1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30)、乙醇體積分?jǐn)?shù)(40%、50%、60%、70%、80%)、超聲時(shí)間(10、20、30、40、50 min)、超聲溫度(30、40、50、60、? ? ? ? 70 ℃)、超聲功率(40、50、60、70、80 W)等因素對朧月黃酮得率的影響,每種因素做3次平行實(shí)驗(yàn),從而確定各因素的最佳水平區(qū)間。

    1.3.4? 正交實(shí)驗(yàn)

    根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果,以朧月黃酮得率為標(biāo)準(zhǔn),設(shè)計(jì)3因素3水平的正交實(shí)驗(yàn),確定最佳提取條件。正交實(shí)驗(yàn)因素水平如表1所示。

    2 結(jié)果與討論

    2.1? 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

    2.1.1? 料液比對黃酮得率的影響

    不同的料液比對朧月中黃酮得率的影響如圖1所示。從圖1中可以看出,當(dāng)提取劑乙醇的體積增加時(shí),朧月樣品中的黃酮得率逐步升高;當(dāng)料液比為1∶10~1∶20時(shí),黃酮得率的增幅較大;料液比為1∶25時(shí),朧月黃酮得率最高,為1.36%,之后開始略微下降。結(jié)果表明,在一定范圍內(nèi),料液比越大,朧月樣品中黃酮類化合物的溶出越徹底。但是過高的料液比也會(huì)促進(jìn)樣品中非黃酮類雜質(zhì)的溶出,影響黃酮的得率。因此,料液比最好為1∶25。

    2.1.2? 乙醇體積分?jǐn)?shù)對黃酮得率的影響

    乙醇體積分?jǐn)?shù)對黃酮得率的影響如圖2所示。從圖2中可以看出,隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的提高,朧月中的黃酮得率先提高后降低,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到60%時(shí),朧月中的黃酮得率達(dá)到最大值,為1.20%。隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的持續(xù)提升,朧月中黃酮的得率逐漸下降。有可能是因?yàn)橐掖俭w積分?jǐn)?shù)的提升,促進(jìn)了非黃酮類雜質(zhì)化合物的溶出,影響了黃酮的得率。因此,乙醇的體積分?jǐn)?shù)應(yīng)該控制在60%左右。

    2.1.3? 超聲提取時(shí)間對黃酮得率的影響

    超聲提取時(shí)間對黃酮得率的影響如圖3所示。從圖3中可以看出,隨著超聲提取時(shí)間的延長,朧月中黃酮的得率略有增加,但是增幅不大,在超聲時(shí)間為40 min時(shí),達(dá)到最大值,為0.67%。在長時(shí)間的超聲波提取過程中,溶液中的局部溫度會(huì)異常升高,影響朧月中黃酮的得率,因此將朧月中黃酮的提取時(shí)間確定為40 min。

    2.1.4? 超聲提取溫度對黃酮得率的影響

    超聲提取溫度對黃酮得率的影響如圖4所示。由圖4可知,朧月中黃酮的得率隨溫度變化而變化,在40 ℃時(shí)達(dá)到最高值,為1.48%,但在溫度超過40 ℃后,黃酮得率反而下降,因此選擇超聲溫度為40 ℃左右比較合適。當(dāng)溫度升高時(shí),細(xì)胞中的大分子擴(kuò)散速度加快,溶質(zhì)擴(kuò)散速度加快。朧月中的醇溶性雜質(zhì)隨著溫度的升高,溶出速度也加快了,并不利于朧月中黃酮的溶出提取。此外,溫度升高也會(huì)對朧月中的黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)造成破壞,降低提取質(zhì)量和提取效率。因此,提取溫度定為40 ℃。

    2.1.5? 超聲提取功率對黃酮得率的影響

    超聲提取功率對黃酮得率的影響如圖5所示。由圖5可知,隨著超聲功率的提高,朧月中黃酮的得率呈上升趨勢。當(dāng)超聲功率為70 W時(shí),朧月中黃酮的得率達(dá)到最高值,為0.67%。過高的超聲功率也會(huì)破壞朧月的細(xì)胞壁,導(dǎo)致更多的非黃酮類雜質(zhì)溶出,不利于朧月中黃酮的提取。所以,超聲功率定為70 W。

    2.2? 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

    正交實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果如表2所示。由表2可知,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%、超聲溫度為40 ℃、料液比為1∶25時(shí),朧月樣品中黃酮的得率達(dá)到最高值,在該最優(yōu)組合條件下對樣品進(jìn)行多次平行提取,朧月黃酮得率最高為1.851%。極差大小比較顯示,影響因素由強(qiáng)到弱依次為乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、超聲提取溫度。

    3 ? 結(jié)語

    以景天科朧月多肉植物為原料,利用超聲波輔助提取法提取朧月中的黃酮。通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)得到最佳提取工藝條件。結(jié)果表明,當(dāng)提取工藝條件為:料液比為1∶25、乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%、超聲時(shí)間為40 min、超聲溫度為40 ℃、超聲功率為70 W時(shí),總黃酮最高得率為1.851%。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1]宋正達(dá),朱洪武,陳梅香.景天科多肉朧月在立體綠化中的應(yīng)用研究[J].綠色科技,2015(3):90-91.

    [2]劉一杰,薛永常.植物黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J].中國生物工程雜志,2016,36(9):81-86.

    [3]李萌茹,周玉枝,杜冠華,等.中藥黃酮類化合物抗衰老作用及其機(jī)制研究進(jìn)展[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2019,54(8):1382-1391.

    [4]付煜榮,姚榮章.景天三七中總黃酮提取條件和含量分析[J].河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2010,27(1):13-15.

    [5]李珊,雷富平.紅景天黃酮類化合物提取及藥理活性研究進(jìn)展[J].飲料工業(yè),2016,19(6):57-59.

    [6]田淑雨,鹿士峰,吳楊洋,等.超聲破碎輔助提取靈芝多糖工藝優(yōu)化及抗氧化活性研究[J].食品研究與開發(fā),2019,40(8):101-107.

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