HPLC法測定感冒疏風(fēng)片中芍藥苷的含量

康紹建 羅茜

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜法測定感冒疏風(fēng)片中芍藥苷的含測方法。方法：色譜柱為Agilent SB-C18 （4.6 mm×250 mm，5μm）;流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（12∶88），流速為1.0mL·min-1，柱溫為30℃，檢測波長為230 nm。結(jié)果： HPLC法測定芍藥苷在0.19694～3.9388μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為97.64%，RSD為1.26%。結(jié)論：該方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、專屬性及重現(xiàn)性好，可用于有效地控制感冒疏風(fēng)片的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 HPLC;感冒疏風(fēng)片;芍藥苷;含量測定

【中圖分類號】R284.1 【文獻標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2021）13-0067-02

感冒疏風(fēng)片是由麻黃絨、苦杏仁、桂枝、防風(fēng)、白芍、紫蘇葉、甘草、桔梗、獨活、大棗、生姜、炒谷芽等12種中藥組成的復(fù)方制劑，具有辛溫解表、宣肺和中的功效，用于治療風(fēng)寒感冒，發(fā)熱咳嗽，頭痛怕冷，鼻流清涕，骨節(jié)酸痛，四肢疲倦的癥狀?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑，第 11 冊）只有片劑項下的常規(guī)檢查項， 無含量測定項目，不能全面有效控制該藥品的內(nèi)在質(zhì)量和療效[1-2]。白芍為本方中的君藥，白芍的活性成分為白芍總苷，其芍藥苷是白芍總苷的重要有效成分[3]。芍藥苷paeoniflorin是白芍的主要有效成分，屬于一種天然水溶性單萜類糖苷[4]，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抑菌、解熱、抗抑郁、神經(jīng)保護、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、肝保護、心臟保護等藥理作用。通過對感冒疏風(fēng)片中芍藥苷含量測定方法的研究，為全面評價感冒疏風(fēng)片的質(zhì)量提供簡便快速、準(zhǔn)確可靠的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 The Shimadzu LC-20AT高效液相色譜儀;PM4-1300TL超聲儀;UV-2550紫外可見分光光度計;Sartorius CPA225D電子分析天平（十萬分之一）;Sartorius BS224S電子分析天平（萬分之一）。

1.2 試藥 感冒疏風(fēng)片（批號490251、490005、490041、480862）由昆明中藥廠有限公司提供;（批號190116）由云南騰藥制藥有限公司提供;芍藥苷對照品（110736-201842）（含量以97.4%計）由中國藥品生物制品檢定研究院提供。實驗用的乙腈為色譜純、由美國默克公司生產(chǎn);水為娃哈哈純凈水;乙醇，磷酸等其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-0.1%磷酸溶液（12∶88）;流速為1.0mL·min-1，檢測波長為230 nm。理論板數(shù)按芍藥苷峰計應(yīng)不低于2000。

2.2 對照品溶液制備 精密稱取芍藥苷對照品10.11 mg （含量以97.4%計），加入甲醇CH3OH定容至100 mL，制得每1 mL含0.09847mg的芍藥苷對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 取感冒疏風(fēng)片20片，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再次稱定重量，用稀乙醇補足減失的失重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.4 陰性樣品溶液制備 根據(jù)處方制備缺白芍的陰性樣品，按“2.3”項下方法制備陰性樣品溶液，即得。

2.5 專屬性試驗 依據(jù)2.1項下色譜條件，分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，測定。結(jié)果表明，在與對照品溶液色譜圖相應(yīng)保留時間處，供試品溶液有芍藥苷特征吸收峰，而陰性對照液無相應(yīng)吸收峰，表明專屬性良好。如圖 1～3所示。

2.6 線性關(guān)系的考察 精密吸取芍藥苷對照品溶液（0.09847 mg/mL）2 μL、5 μL、10 μL、20 μL、30 μL、40 μL注入液相色譜儀，測定峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），以測得峰面積為縱坐標(biāo)（Y），線性回歸，即得回歸方程為：Y=142786127X-6127091，R2=1.00。線性范圍：0.19694～3.9388μg，結(jié)果表明線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗 精密吸取芍藥苷對照品溶液（0.09847 mg/mL）10 μL，連續(xù)進樣6次，測定芍藥苷峰面積，結(jié)果峰面積RSD為0.3%，說明儀器精密度良好。

2.8 重復(fù)性考察 取同一批號（批號：490251）樣品6份，按上述“2.3”項下供試品溶液制備方法， 平行處理并測定， 結(jié)果6次測得芍藥苷平均含量為6.8336 mg/g，RSD為0.49% ，表明重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性考察 按上述“2.3”項下方法制備供試品溶液，室溫條件下每2 h進樣1次，以峰面積計算， RSD（n=7）為1.40%。結(jié)果表明室溫條件下，供試品溶液中芍藥苷在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.10 準(zhǔn)確度考察 精密稱取6份已知含量（6.8336 mg/g）供試品（批號490251）各約0.5 g，置具塞錐形瓶中，分別精密加入芍藥苷對照品溶液（濃度0.6654 mg/mL）5 mL， 按上述“2.3”項下方法制備所需溶液，照含量測定方法項下操作，測定供試品溶液中芍藥苷的含量，計算芍藥苷的平均回收率（n=6）為97.64%;RSD為0.91%;結(jié)果表明方法準(zhǔn)確度良好。見表1。

2.11 樣品測定 按上述色譜條件，依法測定5批樣品中芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 流動相的選擇 感冒疏風(fēng)片處方中所含成分復(fù)雜，為了將芍藥苷與其他成分較好的分離，參考文獻，采用2種不同流動相：①乙腈-水和②乙腈-0.1%磷酸溶液，試驗結(jié)果表明：流動相①分離效果不好;流動相②樣品能獲得較好的分離，且得到對稱性較好的芍藥苷峰;對流動相②比例進行調(diào)整發(fā)現(xiàn)乙腈：0.1%磷酸溶液（12∶88）條件下，分離效果最佳。

3.2 提取條件的選擇 采用稀乙醇，甲醇，50%甲醇為提取溶劑，試驗結(jié)果表明，當(dāng)提取溶劑為稀乙醇時，提取效果最好，故選用稀乙醇。實驗通過對稀乙醇超聲提取30 min、加熱回流提取30 min、索氏提取2 h及3 h比較，其中索氏提取2h含量最低，索氏提取3 h含量接近超聲提取30 min和加熱回流提取30 min;超聲提取效果較好且簡便快捷，故選用超聲提取30 min。

參考文獻

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第十一冊）[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，1990.

[2]國家藥典委員會.中華人民國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：149-150.

[3]馮偉科，郭平.芍藥苷藥理作用研究進展[J].山東中醫(yī)雜志，2019，38（1）：105-108.

[4]張育貴，張淑娟，邊甜甜，等.芍藥苷藥理作用研究最新進展[J].中草藥，2019，50（15）3735-3740.

（收稿日期：2020-12-08 編輯：陶希睿）