重組人干擾素聯(lián)合LEEP對(duì)宮頸上皮內(nèi)瘤變患者P16、P63、Ki-67表達(dá)及炎性因子的影響

趙晶蕾，韋廣月，劉艷潔

宮頸上皮內(nèi)瘤變是宮頸癌的癌前病變，若未及時(shí)規(guī)范治療，可進(jìn)展為宮頸癌[1]。隨著臨床研究的深入，發(fā)現(xiàn)宮頸上皮內(nèi)瘤變患者不僅存在炎癥反應(yīng)，而且P16、P63、Ki-67在宮頸病變過(guò)程中可作用于細(xì)胞周期，參與細(xì)胞的增殖、分裂及腫瘤生成過(guò)程[2-3]。有研究表明，P16、P63、Ki-67在反映宮頸上皮內(nèi)瘤變?cè)\斷分級(jí)中具有重要意義[4-5]。宮頸環(huán)形電切術(shù)(LEEP)具有創(chuàng)傷小、切緣清晰、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，在宮頸上皮內(nèi)瘤變的治療中應(yīng)用較廣[6]。干擾素由病毒刺激宿主細(xì)胞分泌產(chǎn)生，具有抑制細(xì)胞增殖、抗病毒譜廣等作用[7]。目前國(guó)內(nèi)學(xué)者已證實(shí)，重組人干擾素聯(lián)合LEEP對(duì)宮頸上皮內(nèi)瘤變患者免疫功能、陰道微生態(tài)、炎癥反應(yīng)等方面具有較好的改善作用[8-10]。但是，聯(lián)合治療對(duì)宮頸上皮內(nèi)瘤變患者P16、P67、Ki-67表達(dá)的影響報(bào)道較少。本研究采用重組人干擾素聯(lián)合LEEP治療宮頸上皮內(nèi)瘤變，并對(duì)治療后P16、P67、Ki-67表達(dá)情況進(jìn)行分析，有關(guān)結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年7月—2020年6月我院收治的宮頸上皮內(nèi)瘤變108例為研究對(duì)象。根據(jù)治療方法不同將患者分為觀察組和對(duì)照組，每組54例。觀察組年齡32～64(42.28±9.51)歲；分級(jí)：Ⅰ級(jí)23例，Ⅱ級(jí)31例；病程3～36(16.70±2.39)個(gè)月。對(duì)照組年齡32～65(41.93±9.26)歲；分級(jí)：Ⅰ級(jí)24例，Ⅱ級(jí)30例；病程3～36(16.57±2.48)個(gè)月。兩組年齡、分級(jí)、病程等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)： ①經(jīng)活組織病理檢查、液基薄層細(xì)胞檢查確診為宮頸上皮內(nèi)瘤變；②分級(jí)為Ⅰ、Ⅱ級(jí)；③具有LEEP的手術(shù)指征；④入組前14 d未使用過(guò)抗生素、糖皮質(zhì)激素等可能影響研究結(jié)果的藥物；⑤患者對(duì)本研究知情，且簽署知情同意書(shū)。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并淋病、滴蟲(chóng)、支原體感染等疾病者；②確診為惡性瘤變或子宮上皮內(nèi)瘤變者；③過(guò)敏體質(zhì)或?qū)Ρ狙芯克幬镞^(guò)敏者；④合并急性生殖道炎癥者；⑤妊娠或哺乳期患者；⑥合并其他重要臟器嚴(yán)重疾病者。

1.3治療方法 兩組均采用美國(guó)Wallach公司生產(chǎn)的QUANTUMA 2000型LEEP刀進(jìn)行治療，功率50 W?；颊呷“螂捉厥?，局部麻醉后標(biāo)記宮頸表面移行區(qū)范圍，暴露病變位置；選擇合適的環(huán)形刀電極型號(hào)，通過(guò)宮頸環(huán)切入電圈，并環(huán)繞1周；根據(jù)電圈和碘示區(qū)范圍，控制切入深度，切除組織送病理檢查。觀察組在LEEP治療基礎(chǔ)上，給予重組人干擾素α-2b凝膠[兆科藥業(yè)(合肥)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20010054]治療，將重組人干擾素α-2b凝膠100萬(wàn)U置于患者陰道后穹隆部，用紗布填塞6 h左右取出紗布。每天1次，連續(xù)10 d。

1.4觀察指標(biāo)

1.4.1P16、P63和Ki-67表達(dá)情況：治療前取手術(shù)切除組織標(biāo)本，治療30 d后在原病灶點(diǎn)取微量組織標(biāo)本。標(biāo)本常規(guī)固定、脫水、包埋。3 μm連續(xù)切片，HE染色。LEICA BOND MAX全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色機(jī)測(cè)定，相關(guān)抗體由福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司提供。陰性對(duì)照染色使用PBS。陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：采用光學(xué)顯微鏡觀察顯色反應(yīng)，細(xì)胞核內(nèi)(P16還需觀察細(xì)胞質(zhì))見(jiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞占比≥10%為陽(yáng)性[11]。

1.4.2炎性因子檢測(cè)：治療前、治療30 d后于清晨空腹?fàn)顟B(tài)抽取患者靜脈血5 ml，離心取血清冷凍待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定白細(xì)胞介素-10(IL-10)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和C反應(yīng)蛋白(CRP)水平，試劑盒由武漢艾迪抗生物科技有限公司提供，操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4.3免疫功能檢測(cè)：治療前、治療30 d后于清晨空腹?fàn)顟B(tài)抽取患者靜脈血5 ml，采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定CD3+、CD4+、CD8+，試劑盒購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4.4療效觀察：治療30 d后，評(píng)定患者療效,①顯效：陰道鏡及宮頸液基薄層細(xì)胞檢查未見(jiàn)宮頸上皮內(nèi)瘤變，宮頸光滑；②有效：陰道鏡及宮頸液基薄層細(xì)胞檢查示病變級(jí)別降低，病變范圍縮小>50%；③無(wú)效：陰道鏡及宮頸液基薄層細(xì)胞檢查示病變級(jí)別未降低，或病變范圍縮小<50%，甚至擴(kuò)大[12]?？傆行?(顯效+有效)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4.5不良反應(yīng)觀察：記錄兩組治療期間感染、出血、宮頸粘連等不良反應(yīng)發(fā)生情況。

2 結(jié)果

2.1治療前后P16、P63、Ki-67陽(yáng)性率比較 治療前，兩組P16、P63和Ki-67陽(yáng)性率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組P16、P63和Ki-67陽(yáng)性率均較治療前降低，且觀察組低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 采用不同方法治療宮頸上皮內(nèi)瘤變兩組P16、P63、Ki-67陽(yáng)性率比較[例(%)]

2.2治療前后炎性因子比較 治療前，兩組IL-10、TNF-α、CRP比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組IL-10高于治療前，TNF-α、CRP均低于治療前，且觀察組IL-10高于對(duì)照組，TNF-α、CRP均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 采用不同方法治療宮頸上皮內(nèi)瘤變兩組治療前后炎性因子比較

2.3治療前后免疫功能比較 治療前，兩組CD3+、CD4+、CD8+比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組CD3+、CD4+高于治療前，CD8+低于治療前，且觀察組CD3+、CD4+高于對(duì)照組，CD8+低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 采用不同方法治療宮頸上皮內(nèi)瘤變兩組治療前后免疫功能比較

2.4治療效果比較 觀察組總有效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 采用不同方法治療宮頸上皮內(nèi)瘤變兩組治療效果比較[例(%)]

2.5不良反應(yīng)發(fā)生情況 治療期間，觀察組出現(xiàn)感染、出血、宮頸粘連各1例，不良反應(yīng)發(fā)生率為5.56%。對(duì)照組出現(xiàn)感染2例、出血1例、宮頸粘連2例，不良反應(yīng)發(fā)生率9.26%。兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

宮頸上皮內(nèi)瘤變對(duì)女性健康和生命安全有極大威脅。相關(guān)臨床研究表明，宮頸上皮內(nèi)瘤變患者多存在免疫功能惡化、陰道微生態(tài)破壞及炎癥反應(yīng)加重等情況[13-15]。在“細(xì)胞學(xué)-陰道鏡-組織病理”三階段篩查推廣下，檢測(cè)P16、P63和Ki-67陽(yáng)性表達(dá)情況有助于提高宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷準(zhǔn)確率[16]。P16是一種抑癌基因，參與細(xì)胞周期調(diào)控，可以抑制細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶4活性，阻止細(xì)胞進(jìn)入S期。P63是P53基因家族成員，參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及細(xì)胞凋亡過(guò)程。Ki-67存在于除G0期以外的細(xì)胞周期所有階段，被認(rèn)為是一種可靠的核增殖標(biāo)志物。目前多項(xiàng)研究表明，宮頸上皮內(nèi)瘤變患者P16、P63和Ki-67均存在較高的陽(yáng)性表達(dá)，且病情越嚴(yán)重，陽(yáng)性表達(dá)率越高[17-19]。因此，P16、P63和Ki-67能作為宮頸上皮內(nèi)瘤變?cè)缙谠\斷的重要參考指標(biāo)。LEEP通過(guò)超高頻低電壓技術(shù)，傳導(dǎo)高頻低電壓電波產(chǎn)生瞬時(shí)高壓，從而達(dá)到切除病變組織的目的,該手術(shù)具有微創(chuàng)、切除范圍大、止血效果好等優(yōu)點(diǎn)，逐步取代電凝、激光、冷凍等治療手段，在宮頸上皮內(nèi)瘤變的治療中得到了廣泛應(yīng)用[20-22]。但是患者術(shù)后切口愈合時(shí)間較長(zhǎng)，而且容易引發(fā)陰道出血、創(chuàng)面感染等風(fēng)險(xiǎn)。重組人干擾素可與干擾素受體特異性結(jié)合，阻止病毒蛋白質(zhì)合成，抑制感染。此外，重組人干擾素還具有免疫功能和性激素分泌調(diào)節(jié)作用，促進(jìn)機(jī)體免疫自穩(wěn)功能恢復(fù)和創(chuàng)面愈合[23]。

從本研究結(jié)果來(lái)看，觀察組總有效率高于對(duì)照組。該結(jié)果驗(yàn)證了重組人干擾素聯(lián)合LEEP治療宮頸上皮內(nèi)瘤變具有更好的臨床效果，結(jié)論與秦燕萍等[8]、馬小磊等[24]學(xué)者的報(bào)道相一致。炎癥反應(yīng)被認(rèn)為是宮頸上皮內(nèi)瘤變的致病機(jī)制之一。本研究發(fā)現(xiàn)，治療后，兩組IL-10高于治療前，TNF-α、CRP均低于治療前，且觀察組IL-10高于對(duì)照組，TNF-α、CRP低于對(duì)照組。該結(jié)果也證實(shí)重組人干擾素聯(lián)合LEEP有助于進(jìn)一步減輕宮頸上皮內(nèi)瘤變患者體內(nèi)的炎癥反應(yīng)。趙秀梅等[10]學(xué)者認(rèn)為，聯(lián)合治療可以更好地誘導(dǎo)細(xì)胞表皮組織相容復(fù)合物抗原表達(dá)，改善機(jī)體免疫功能，并提高患者抗病毒能力，降低病毒感染風(fēng)險(xiǎn)，從而降低了炎癥反應(yīng)。在人體內(nèi)CD8+起抑制作用，CD4+起促進(jìn)作用，通過(guò)CD4+、CD8+的動(dòng)態(tài)變化，從而實(shí)現(xiàn)機(jī)體免疫平衡。本研究還發(fā)現(xiàn)，治療后，兩組CD3+、CD4+高于治療前，CD8+低于治療前，且觀察組CD3+、CD4+高于對(duì)照組，CD8+低于對(duì)照組。該結(jié)果表明重組人干擾素聯(lián)合LEEP治療有助于改善宮頸上皮內(nèi)瘤變患者免疫功能。此外，兩組治療后P16、P63和Ki-67陽(yáng)性率均顯著低于治療前，且觀察組低于對(duì)照組。該結(jié)果提示P16、P63和Ki-67不僅可以作為診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變的參考指標(biāo)，而且可以作為預(yù)后判斷的參考指標(biāo)。另外，上述結(jié)果還表明重組人干擾素聯(lián)合LEEP能夠改善宮頸上皮內(nèi)瘤變患者免疫功能、陰道微生態(tài)，減輕炎癥反應(yīng)，同時(shí)抑制P16、P63和Ki-67陽(yáng)性表達(dá)，在細(xì)胞層面調(diào)控病變進(jìn)程。從不良反應(yīng)來(lái)看，兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，肯定了聯(lián)合治療方案的安全性。

綜上所述，在LEEP基礎(chǔ)上，聯(lián)合重組人干擾素治療宮頸上皮內(nèi)瘤變，能夠更好地抑制P16、P63和Ki-67陽(yáng)性表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，改善免疫功能，提高治療有效率，而且具有較高的安全性。