半夏瀉心湯治療胃黏膜異型增生療效及對患者胃癌相關(guān)基因甲基化的影響

馮 璇，寇 玉，薛 峰，紀(jì)安來，倪 慶1,

(1.揚州大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇 揚州 225009；2.揚州大學(xué)醫(yī)學(xué)院 江蘇省中西醫(yī)結(jié)合老年病防治重點實驗室，江蘇 揚州 225001;3.揚州大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 揚州 225009)

胃黏膜異型增生(Gastric epithelial dysplasia,GED)為病理形態(tài)由單純性增生向腫瘤性增生演進(jìn)的一種胃黏膜上皮、腺體異常分化的增生性疾病，是癌前病變的常見病理類型[1-2]。及時、有效的規(guī)范化治療是預(yù)防GED向癌變進(jìn)展，并改善其預(yù)后的重要措施。該病發(fā)病機制復(fù)雜，幽門螺旋桿菌感染可能為其促發(fā)因素。中醫(yī)認(rèn)為GED的主要病因為氣機升降失常、脾胃陰陽失調(diào)[3-4]。半夏瀉心湯用于治療消化道疾病已歷千年，是調(diào)理脾胃的傳統(tǒng)中藥方劑，主要由半夏、黃芩和干姜等組成，有調(diào)和脾胃、寒熱平調(diào)和消痞散結(jié)等功效[5-6]。我院應(yīng)用半夏瀉心湯治療GED方面具有多年臨床經(jīng)驗，且在實踐過程中經(jīng)半夏瀉心湯化裁了健脾益氣化瘀解毒方應(yīng)用于臨床，對GED具有同樣的療效。多發(fā)性腫瘤抑制因子1(p16)和磷酸酶和張力蛋白同源物基因(PTEN)均屬重要抑癌基因，與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7-8]。本研究探討半夏瀉心湯治療GED的療效，并分析其對抑癌基因p16和PTEN甲基化的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以隨機數(shù)字表法將2019年2月至2020年7月于揚州大學(xué)附屬醫(yī)院診治的92例GED患者均分為對照組和觀察組，各46例。對照組男24例，女22例；年齡37～50歲，平均(43.26±3.67)歲；病程0.15～9年，平均(4.75±2.31)年。觀察組男25例，女21例；年齡37～50歲，平均(42.89±3.75)歲；病程0.28～8年，平均(4.68±2.28)年。兩組上述基線資料對比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。診斷標(biāo)準(zhǔn)：以《中國慢性胃炎共識意見》[9]及《慢性胃炎中醫(yī)診療專家共識意見》[10]為準(zhǔn)。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：滿足西、中醫(yī)GED診斷標(biāo)準(zhǔn)；經(jīng)病理組織學(xué)檢查、胃鏡證實為GED；知情理解，簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴腎肝功能不全者；伴有消化性潰瘍者；伴神志疾患者。

1.2 治療方法

1.2.1 對照組：給予奧美拉唑腸溶膠囊(國藥準(zhǔn)字H20059140)口服，20 mg/次，3次/d。予以葉酸片(國藥準(zhǔn)字H35020215)口服，10 mg/次，3次/d。對合并HP感染者，加以PPI、鉍劑、抗生素組成三聯(lián)或四聯(lián)方案。

1.2.2 觀察組：于上述基礎(chǔ)上，加服半夏瀉心湯，組方：半夏12 g，干姜、大棗、人參、黃芩、炙甘草各9 g，黃連3 g。由我院煎藥室統(tǒng)一煎制，每日1劑，早晚分服。兩組均給予飲食指導(dǎo)。1個月為1個療程，連續(xù)治療3個療程。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 甲基化特異性PCR：①DNA提取步驟為，分別抽取觀察組治療前后外周靜脈血各5 ml，DNA提取嚴(yán)格按說明書操作。DNA亞硫酸氫鹽修飾：取100 ng～1 μg DNA用NaOH和ddH2O調(diào)整至終體積20 μl，NaOH終濃度0.3 mol/L，經(jīng)孵育后得到修飾后的DNA。②甲基化特應(yīng)性PCR(MSP)：p16、PTEN基因甲基化(M)、非甲基化(U)上下游引物的設(shè)計應(yīng)用Primer 5.0軟件處理，引物合成由上海捷瑞生物工程有限公司完成，引物序列見表1。③PCR反應(yīng)條件：先以95 ℃熱啟動5 min；再95 ℃ 45 s，60 ℃ 45 s，72 ℃ 40 s，重復(fù)40次后以72 ℃延伸10 min。將PCR產(chǎn)物用2%凝脂糖瓊膠電泳后觀測結(jié)果。

表1 抑癌基因p16、PTEN擴增引物序列

1.3.2 中醫(yī)癥候評分：治療前后，觀察的主要癥狀的中醫(yī)癥候評分，包括胃脘痛、胃脘脹滿、舌象、食少、乏力和便溏，分為無、輕、中、重4級，分別記為0、2、4、6分。

1.4 療效標(biāo)準(zhǔn) 治愈：中醫(yī)癥候評分降低≥95%，主要癥狀消失且各項生化指標(biāo)基本正常。顯效：中醫(yī)癥候評分減少70%～94%，主要癥狀及各項生化指標(biāo)顯著改善。有效：中醫(yī)癥候評分降低30%～69%，主要癥狀及各項生化指標(biāo)略有改善。無效：未及有效標(biāo)準(zhǔn)?？傆行?(治愈+顯效+有效)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1 兩組治療前后中醫(yī)癥候評分比較 見表2。治療后，兩組胃脘痛、胃脘脹滿、舌象、食少、乏力、便溏評分較治療前均顯著降低，且觀察組均低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 兩組治療前后中醫(yī)癥候評分比較(分)

2.2 兩組臨床療效比較 見表3。觀察組臨床有效率82.61%高于對照組54.35%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表3 兩組臨床療效比較[例(%)]

2.3 觀察組治療前后血清p16、PTEN擴增產(chǎn)物變化 見表4(圖1、2)。治療后，觀察組p16、PTEN基因甲基化均受到抑制。血清p16基因甲基化率15.22%低于治療前甲基化率41.30%，血清PTEN基因甲基化率21.74%低于治療前甲基化率45.65%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表4 觀察組治療前后p16、PTEN基因甲基化比較[例(%)]

圖1 觀察組治療前后血清p16擴增產(chǎn)物電泳圖

圖2 觀察組治療前后血清PTEN擴增產(chǎn)物電泳圖

3 討 論

GED是一種胃黏膜上皮細(xì)胞及腺體發(fā)生異常分化，并在結(jié)構(gòu)及功能上出現(xiàn)異型性改變的增生性病變，屬于胃癌前期病變，是胃癌級聯(lián)演變過程的必經(jīng)階段和接近胃癌的臨界階段。幽門螺旋桿菌感染、飲食、環(huán)境等為其常見病因[11-12]。GED的臨床癥狀以胃脘痛和胃脘脹滿為主，屬于中醫(yī)“胃痞”和“痞滿”等范疇[13]。GED病灶主要在胃體和胃竇，其病情進(jìn)展與脾、肝功能有關(guān)[14]?！八染佑谖钢校闫啥阆麓竽c”，脾胃為中焦之臟而屬土，脾主升清，以升為健，胃主降濁，以降為順。肝屬木臟，主疏泄，條暢氣機。肝氣疏泄不及，脾氣難升，胃氣難降，造成脾胃升清降濁的功能失調(diào)。經(jīng)曰：“濁氣在上，則生脹；清氣在下，則生飧泄”，由此可見，氣機的升降失常是引發(fā)胃痞、胃滿的重要病機?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》中，陰受之以入五臟，入五臟而滿閉塞。巢元方認(rèn)為，臟腑痞塞而不宣乃營衛(wèi)不和，陰陽隔絕之所致。李用粹認(rèn)為，過食寒藥，常可致脾胃虧虛，胃脘作痛等。據(jù)此，胃脘痛、胃痞和胃滿等癥狀與陰陽失調(diào)亦關(guān)系密切[15]。

半夏瀉心湯乃仲景調(diào)理脾胃之經(jīng)典用方。許愛麗等[16]、王艷威等[17]研究顯示，半夏瀉心湯可顯著提高慢性萎縮性胃炎患者機體免疫力、改善胃黏膜炎癥及臨床癥狀。本研究顯示，兩組治療后中醫(yī)證候各條目評分均顯著降低，且觀察組變化更明顯。在有效率上，觀察組優(yōu)于對照組。這說明西醫(yī)常規(guī)與半夏瀉心湯聯(lián)用療效確切，可顯著改善GED患者臨床癥狀。分析其原因在于，方中半夏可消痞散結(jié)；黃芩、黃連清熱燥濕，可降上逆的濁氣；干姜可降凝滯寒邪；人參、炙甘草和大棗甘溫補中，可扶正驅(qū)邪，利于脾胃恢復(fù)氣機升降的功能。諸藥寒熱并用，扶正祛邪，起到調(diào)節(jié)脾胃陰陽平衡和氣機升降的功效[18-19]。因此，GED患者胃脘痛、胃滿等癥狀得到顯著改善。

p16、PTEN均屬抑癌基因。其中，p16所編碼的蛋白可與細(xì)胞周期蛋白D競爭結(jié)合周期蛋白依賴性激酶，對細(xì)胞周期相關(guān)的磷酸化過程起抑制作用，使細(xì)胞周期無法從G1期進(jìn)入S期，進(jìn)而起到抑制細(xì)胞增殖的作用[20]。PTEN可通過抑制絲裂原蛋白活化激酶阻滯細(xì)胞周期于G1期，抑制細(xì)胞的增殖[21]?；蚣谆歉淖冞z傳表現(xiàn)而不改變DNA序列的一種DNA化學(xué)修飾形式，其甲基基團的合成需要相關(guān)轉(zhuǎn)移酶的參與，甲基基團形成后，干擾RNA聚合酶基因識別，故而引發(fā)基因的正常轉(zhuǎn)錄及表達(dá)異常[22]。本研究治療后，兩組p16、PTEN甲基化率均有所降低，表明GED患者經(jīng)半夏瀉心湯治療后，抑癌基因p16、PTEN的甲基化受抑制，利于抑癌基因p16、PTEN正常轉(zhuǎn)錄、編碼蛋白，進(jìn)而有效避免了GED患者的病情向癌變進(jìn)展。這可能是由于半夏瀉心湯處方中半夏、黃連等藥物含有復(fù)雜的化學(xué)組分，諸如半夏生物堿、谷甾醇等，可參與基因的甲基化和去甲基化過程[23-24]。因此，治療后觀察組p16、PTEN基因的甲基化率顯著降低。

綜上，半夏瀉心湯治療GED患者可明顯減輕臨床癥狀，提高其療效，且可抑制p16、PTEN基因的甲基化，從而延緩了GED患者病情向癌變進(jìn)展。