五節(jié)芒對(duì)阿霉素致小鼠腎損傷的保護(hù)作用

池志珍 黃鎔章 王煒辰 鄭時(shí)楨 郭曉芳 吳學(xué)輝

福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬人民醫(yī)院，福建 福州 350004

急性腎損傷是臨床最常見(jiàn)的急危重癥之一，其發(fā)病率約為30%，并且與患者的預(yù)后不良有關(guān)，全球每年約有400萬(wàn)例死于急性腎損傷，且發(fā)病率和死亡率不斷攀升，造成嚴(yán)重的健康和經(jīng)濟(jì)問(wèn)題[1]。目前，臨床上對(duì)于急性腎損傷提倡早發(fā)現(xiàn)、早治療，國(guó)內(nèi)外對(duì)其干預(yù)研究還處于探索階段，還沒(méi)有治療效果良好的藥物[2]。急性腎損傷所涉及的發(fā)病機(jī)制包括炎癥、氧化應(yīng)激和凋亡等，其中炎癥反應(yīng)被認(rèn)為是細(xì)胞病理?yè)p傷的關(guān)鍵致病因素，其導(dǎo)致的病理?yè)p傷貫穿于多種腎臟病發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程中。

五節(jié)芒為禾本科多年生草本植物五節(jié)芒Miscanthusfloridulus(Lab.) Warb. ex Schum. et Laut.的莖，其性平，味甘、淡，具有清熱通淋、祛風(fēng)除濕的功效[3]。臨床上常用于治療熱淋、白濁、白帶、急性腎孟腎炎、泌尿道結(jié)石等[4]。五節(jié)芒主要含有木脂素類(lèi)、甾醇類(lèi)、苷類(lèi)等成分[5]，近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，五節(jié)芒的苷類(lèi)成分可明顯抑制脂多糖LPS引起的NF-κB激活，具有一定的抗炎活性[4]，但目前有關(guān)它的藥理作用研究未見(jiàn)系統(tǒng)的研究和報(bào)導(dǎo)。本研究采用阿霉素致BLAB/C小鼠腎損傷，建立急性腎損傷小鼠模型，研究五節(jié)芒水煎液對(duì)小鼠腎組織的保護(hù)作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 BLAB/C 小鼠，清潔級(jí)，雄性，18～21 g，50只，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，合格證號(hào) SCXK(滬)：2017-0005。

1.2 試驗(yàn)藥品 五節(jié)芒莖，采自閩侯縣鴻尾鄉(xiāng)里頭村，由池志珍等鑒定為禾本科芒屬植物五節(jié)芒Miscanthusfloridulus(Lab.) Warb.ex Schum.et Laut.。鹽酸貝那普利片，北京諾華制藥有限公司，批號(hào)：X2893；阿霉素，瀚暉制藥有限公司，批號(hào)：19019833。

1.3 五節(jié)芒水煎液的制備 取干燥的五節(jié)芒100 g切成小段，置于容器內(nèi)，加12倍量的水浸泡30 min，加熱至沸騰(需時(shí)時(shí)攪拌)后保持60 min，濾出藥液，再加12倍量水加熱至沸騰(需時(shí)時(shí)攪拌)后保持30 min，濾出藥液，合并兩次的藥液，蒸發(fā)濃縮成0.5 g·mL-1生藥量的水煎劑。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 小鼠腎損傷模型的建立、分組與給藥 雄性BLAB/C小鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，即：正常對(duì)照組、模型組、五節(jié)芒低、高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。除正常對(duì)照組外，其它4組小鼠均尾靜脈一次性注射11 mg·kg-1體重的阿霉素溶液[5]。從造模第2天開(kāi)始各組分別按劑量灌胃給藥，五節(jié)芒高劑量組給予10.0 g·kg-1五節(jié)芒水煎劑，五節(jié)芒低劑量組給予5.0 g·kg-1五節(jié)芒水煎劑，陽(yáng)性對(duì)照組給予2 mg·kg-1貝那普利混懸液，給藥體積按20 mL· Kg-1體重灌胃，正常對(duì)照組與模型組給予等體積的蒸餾水，每天1次，連續(xù)灌胃給藥4周。

1.4.2 小鼠血清中尿素氮和肌酐的含量測(cè)定 末次給藥24 h后，摘眼球取血，離心(3000 rpm，10 min)，取血清，采用全自動(dòng)生化分析儀分別檢測(cè)血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的含量。

1.4.3 小鼠腎臟指數(shù) 采血后，處死小鼠，打開(kāi)小鼠腹腔，摘取右側(cè)腎臟稱(chēng)量，并計(jì)算腎臟指數(shù)。計(jì)算公式如下：小鼠腎臟指數(shù)=小鼠腎臟的質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量× 100% 。

1.4.4 小鼠腎組織中炎癥因子IL-8的含量測(cè)定 取右側(cè)腎臟，稱(chēng)重，加PBS液，用電動(dòng)勻漿器勻漿，離心取上清液，按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，用酶標(biāo)儀在450 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算腎組織勻漿上清液中小鼠IL-8含量。

1.4.5 腎組織病理學(xué)觀(guān)察 采血后，處死小鼠，打開(kāi)小鼠腹腔，摘取左腎，福爾馬林固定左腎組織，經(jīng)石蠟包埋、切片、HE染色后，光鏡下觀(guān)察腎組織病理變化。

2 結(jié)果

2.1 五節(jié)芒水煎液對(duì)腎損傷小鼠體重的影響 用阿霉素造模后，模型組小鼠體重與正常對(duì)照組比較，明顯減輕(P<0.05)，給藥組在給藥1周后，給藥組體重較模型組明顯增加(P<0.05)，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，給藥組與模型組的體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 對(duì)阿霉素致腎炎小鼠實(shí)驗(yàn)前后體重表

2.2 五節(jié)芒水煎液對(duì)腎損傷小鼠血清中BUN和Cr含量的檢測(cè) 與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠血清中BUN和Cr的含量明顯升高(P<0.01)；與模型組相比，五節(jié)芒低、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠血清中的 BUN和 Cr的含量均明顯降低(P<0.05或0.01)。見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠血清中BUN、Cr的比較

2.3 五節(jié)芒水煎液對(duì)小鼠腎臟指數(shù)的影響 與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠腎臟指數(shù)明顯增大(P<0.01)；與模型組相比，五節(jié)芒低、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腎臟指數(shù)均明顯降低(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠腎臟指數(shù)的比較

2.4 五節(jié)芒水煎液對(duì)腎組織中炎癥因子IL-8含量的影響 與正常對(duì)照組比，模型組腎組織中 IL-8的含量明顯增加(P<0.01)；與模型組相比，五節(jié)芒低、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腎組織中的炎癥因子IL-8含量均明顯減少(P<0.05或0.01)。見(jiàn)表4。

表4 各組對(duì)小鼠腎組織中炎癥因子IL-8含量的影響

2.5 腎組織病理學(xué)觀(guān)察 高倍鏡下觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，正常對(duì)照組小鼠腎組織形態(tài)學(xué)正常，造模組小鼠腎小體毛細(xì)血管球體積增大，腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)量上升，包含大量紅細(xì)胞，腎小囊層結(jié)構(gòu)被破壞，毛細(xì)血管球被擠壓并伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管管腔可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸(如圖紅色箭頭)潤(rùn)。五節(jié)芒低、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腎組織上述損傷程度均較模型組小。如圖1所示。

圖1 各組小鼠腎臟病理鏡檢圖 (HE×400)

3 討論

阿霉素是一種抗腫瘤的抗生素，它對(duì)RNA和DNA的合成具有抑制作用，其誘導(dǎo)的急性腎損傷是一個(gè)成熟的和高重復(fù)性的腎病模型[6-7]。本實(shí)驗(yàn)采用一次性尾靜脈注射阿霉素11 mg·kg-1致BLAB/C小鼠腎損傷模型，腎組織病理學(xué)觀(guān)察結(jié)果顯示造模組小鼠腎小體毛細(xì)血管球體積增大，腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)量上升，包含大量紅細(xì)胞，腎小囊層結(jié)構(gòu)被破壞，毛細(xì)血管球被擠壓并伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管管腔可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，符合急性腎損傷表現(xiàn)，與文獻(xiàn)[6]研究相一致。

本研究利用阿霉素誘導(dǎo)小鼠腎損傷模型探討五節(jié)芒水煎液對(duì)小鼠腎損傷的保護(hù)作用，研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠腎臟指數(shù)及血清BUN、Cr 水平升高，同時(shí)模型組腎病粒結(jié)構(gòu)嚴(yán)重?fù)p傷，腎小管上皮細(xì)胞空泡及顆粒變性，腎小囊層結(jié)構(gòu)被破壞，毛細(xì)血管球被擠壓并伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管管腔可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸，符合急性腎損傷炎癥反應(yīng)等表現(xiàn)[6]。與模型組相比，五節(jié)芒水煎液低、高劑量組血清中BUN、Cr水平明顯下降，腎組織病理?yè)p傷變化部分得到恢復(fù)，這些結(jié)果提示五節(jié)芒水煎液能夠改善腎功能和腎組織的損傷。同時(shí)結(jié)果發(fā)現(xiàn)與模型組相比，五節(jié)芒水煎液低、高劑量組腎組織中的炎癥因子IL-8含量明顯減少，提示五節(jié)芒水煎液可改善炎癥反應(yīng)，這與文獻(xiàn)[5]中報(bào)道的一致。綜上所述，五節(jié)芒水煎液對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的小鼠腎損傷具有保護(hù)作用，為其在治療急性腎損傷方面提供了理論依據(jù)，但其作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。