肛拭子標本實時熒光聚合酶鏈反應法在從業(yè)人員健康體檢腸道沙門氏菌快速檢測中的應用價值

河南省洛陽市疾病預防控制中心（471000）趙衛(wèi) 劉萌萌

沙門氏菌為乙類傳染病，菌型多達2500種，具有易繁殖、易傳播等特點，為相關食物中毒病原菌，患者多出現(xiàn)惡心、頭痛、腹痛、發(fā)熱等綜合癥狀，嚴重者會出現(xiàn)敗血癥，對患者健康及生活質(zhì)量構(gòu)成影響[1]。相關研究指出，及時有效治療及預防病情擴散的關鍵在于早期沙門氏菌檢測[2]。分離培養(yǎng)是既往臨床常用檢測方法，屬于沙門氏菌檢測金標準，但該方法程序復雜、耗時較長。實時熒光聚合酶鏈反應法（Real-time Fluorescence Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）具有快速、簡便等特點，近年來在沙門氏菌臨床檢測中得到極大重視。本研究選取我院從業(yè)人員健康體檢者428例，旨在分析肛拭子標本RT-PCR檢測腸道沙門氏菌的應用價值?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年3月～2018年11月我院從業(yè)人員健康體檢者428例，男235例，女193例，年齡23～41歲，平均年齡（32.57±4.19）歲，體質(zhì)量指數(shù)20～25kg/m2，平均體質(zhì)量指數(shù)（22.36±0.71）kg/m2。

1.2 方法 均采集肛拭子標本，使用一次性棉拭子，插入肛門內(nèi)（約3cm），輕旋3周，取出并放入增菌液內(nèi)，增菌液環(huán)境溫度37℃。

1.2.1 RT-PCR檢測 在增菌液培養(yǎng)3～12h后，混合均勻，使用1.5ml離心管，使用移液器置入50μl增菌液，離心（10000r/min，5min）處理，取出300μl上清液，再次混合均勻，提取核酸。制備擴增模板，加入核酸檢測試劑，置20μl反應液、聚合酶，依據(jù)試劑盒說明書提供反應條件實施擴增，95℃條件下3min預變性，擴增1個循環(huán)；95℃條件下5s、55℃條件下60sPCR，擴增40個循環(huán)；50℃條件下2minUNG處理，擴增1個循環(huán)。擴增結(jié)果顯示陽性標本行2次擴增，擴增過程中采集熒光信號，通過擴增結(jié)果排除陰性標本，可疑陽性標本行生化鑒定，依照鑒定結(jié)果行血清分型。

1.2.2 分離培養(yǎng) 在增菌液培養(yǎng)18～24h后，混合均勻，使用接種環(huán)，選擇可疑菌種TSI平板分離（24h），使用BD Phoenix-100全自動細菌鑒定儀，生化鑒定沙門氏菌，并對相關菌株行血清凝集試驗。

1.3 觀察指標 以分離培養(yǎng)鑒定結(jié)果作為“金標準”，觀察RT-PCR檢測靈敏度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS22.0分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以n（%）表示，χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 診斷結(jié)果 本組428例從業(yè)人員健康體檢者經(jīng)肛拭子標本分離培養(yǎng)結(jié)果證實患有腸道沙門氏菌16例，無腸道沙門氏菌412例，采用RT-PCR檢測出腸道沙門氏菌20例，非腸道沙門氏菌408例。見附表。

附表 診斷四格表（n=428）

2.2 診斷效能 RT-PCR檢測靈敏度93.75%（15/16）、特異度98.79%（407/412）、準確度98.60%（422/428）、誤診率1.21%（5/412）、漏診率6.25%（1/16）、陽性預測值75.00%（15/20）、陰性預測值99.75%（407/408）。

3 討論

沙門氏菌傳染性較高，攜菌從業(yè)人員易對食物或環(huán)境構(gòu)成污染，相關法律對從業(yè)人員沙門氏菌檢測作出明確規(guī)定[3]。分離培養(yǎng)在沙門氏菌檢測中屬于標準方法，在臨床既往檢測中得到廣泛應用，檢測準確度較高，但檢測多需4～6d，檢測周期較長，無法實現(xiàn)早期治療和預防，易導致病情聚集發(fā)展[4]。RT-PCR檢測以便捷、快速等優(yōu)勢在臨床沙門氏菌檢測中引起關注。本研究選取RT-PCR檢測，研究結(jié)果顯示，RT-PCR檢測靈敏度93.75%（15/16）、特異度98.79%（407/412）、準確度98.60%（422/428）、誤診率1.21%（5/412）、漏診率6.25%（1/16）、陽性預測值75.00%（15/20）、陰性預測值99.75%（407/408）。提示PT-PCR檢測靈敏度、特異度、陰性預測值較高，且誤診率、漏診率較低，分析原因在于檢測程序自動化，降低技術(shù)人員技能水平影響，同時避免選擇性增菌遺漏陽性菌落，進而提升檢測準確度、降低漏診率。PT-PCR檢測通過提取核酸實施擴增，可有效排除陰性標本，確定可疑陽性標本，無需長時間分離培養(yǎng)，擴增結(jié)果顯示可疑陽性標本直接送檢，行生化鑒定、血清分型，以確定陽性標本，可縮短前期篩查、生化培養(yǎng)時間，進而縮短檢測周期，對早期治療和預防具有積極意義。

綜上所述，RT-PCR應用于從業(yè)人員健康體檢中，可有效檢測出腸道沙門氏菌，靈敏度、準確度較高，可有效縮短檢測周期，對患者早期治療及預防腸道沙門氏菌聚集性發(fā)展具有積極意義。