亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性對(duì)妊娠結(jié)局的影響

林金友，王純?nèi)~

（惠州市第二婦幼保健院江北分院 婦產(chǎn)科，廣東 惠州 516000）

新生兒出生缺陷一直是世界性的醫(yī)學(xué)難題。根據(jù)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心的數(shù)據(jù)資料統(tǒng)計(jì)顯示，我國(guó)新生兒出生缺陷率較高，每年有80 萬(wàn)～120 萬(wàn)名出生缺陷兒［1］。從出生缺陷的類(lèi)型來(lái)看，主要包括神經(jīng)管畸形、先天性心臟病、唇腭裂、尿道下裂等，嚴(yán)重威脅新生兒的健康乃至生命安全［2］。至今，新生兒出生缺陷的發(fā)病機(jī)制并不明確，病因十分復(fù)雜，其中遺傳、環(huán)境是兩個(gè)被公認(rèn)的因素，而遺傳因素中又以母體葉酸缺乏最為常見(jiàn)［3］。對(duì)于絕大部分孕婦而言，葉酸的需求量比較大，服用葉酸后能夠在很大程度上預(yù)防流產(chǎn)、孕期或產(chǎn)后抑郁［4］。我國(guó)自全面二胎政策實(shí)施以來(lái)，欲生二胎的高齡婦女人數(shù)增加，該人群妊高征、唐氏綜合征發(fā)病率較高，針對(duì)這部分人群開(kāi)展葉酸基因檢測(cè)有重要意義。本研究基于惠州地區(qū)MTHFR 基因突變的高風(fēng)險(xiǎn)人群小樣本給藥，探討高風(fēng)險(xiǎn)人群活性葉酸的個(gè)體化給藥，以實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育的目標(biāo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料從2020 年1 月至10 月期間我院收治的有流產(chǎn)史或畸形胎兒史婦女中，篩選出MTHFR 6771298 基因突變的高風(fēng)險(xiǎn)人群70 名作為研究對(duì)象，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。經(jīng)隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組各35 例。對(duì)照組：年齡35～40 歲，平均年齡（37.41±1.25）歲；生育情況，二胎28 例，三胎5 例，四胎及以上2 例。實(shí)驗(yàn)組：年齡35～40歲，平均年齡（37.03±1.20）歲；生育情況，二胎25 例，三胎7 例，四胎及以上3 例。兩組的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡35～40 歲之間；②有流產(chǎn)史或有畸形胎兒史；③精神和認(rèn)知正常，可配合完成基本調(diào)查研究；④自愿參與，簽訂基因檢測(cè)知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①內(nèi)分泌功能異常；②合并嚴(yán)重心肝腎等器質(zhì)性病變；③伴有嚴(yán)重妊娠期并發(fā)癥（如高血糖、高血壓等）；④臨床資料不完整。

1.3 方法①個(gè)體化給藥：對(duì)照組給予葉酸（揚(yáng)州制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20065658）800 μg／日，實(shí)驗(yàn)組給予活性三代葉酸（西安浩天生物工程有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20127156）800 μg／日。②檢測(cè)方法：標(biāo)本采集：于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，采集孕婦靜脈血5 mL，經(jīng)柱式抽提試劑盒（德國(guó)羅氏公司，批號(hào)23655500）進(jìn)行DNA 樣本提取。檢測(cè)操作：經(jīng)紫外光分光儀對(duì)樣本DNA 的純度（A260／A280≥1.7）進(jìn)行檢測(cè)，隨后采用熒光定量PCR 對(duì)MTHFR 基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，再進(jìn)行稀釋處理，使稀釋之后的濃度在5～10 ng／μL 范圍內(nèi)。檢測(cè)室：于每個(gè)反應(yīng)中設(shè)置6 種陽(yáng)性樣本，同時(shí)設(shè)置1 種陰性標(biāo)準(zhǔn)品，控制反應(yīng)體系總體積，使其為6 μL。反應(yīng)條件：溫度為95 ℃，時(shí)間為10 min。激活熒光基團(tuán)，95 ℃15 s、60 ℃40 s 為一個(gè)循環(huán)，擴(kuò)增40 個(gè)循環(huán)，然后冷卻處理，時(shí)間為1 min。反應(yīng)結(jié)束后，采用ABI 公司生產(chǎn)的熒光定量PCR 儀讀取樣品孔內(nèi)終點(diǎn)熒光，并應(yīng)用專(zhuān)業(yè)分析軟件對(duì)樣本基因分型進(jìn)行分析。

1.4 觀察指標(biāo)比較兩組C677T 位點(diǎn)的基因分布情況和妊娠結(jié)局。①C677T 位點(diǎn)的基因分布包括CC、CT、TT 等位點(diǎn)。②妊娠結(jié)局主要為不良妊娠結(jié)局，如流產(chǎn)、孕婦妊高征、抑郁以及胎兒畸形。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組C677T 位點(diǎn)的基因分布比較C677T 位點(diǎn)的基因分布中，實(shí)驗(yàn)組的CC 占比高于對(duì)照組，CT 占比低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；兩組的TT 占比比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組C677T 位點(diǎn)的基因分布比較 ［n（%）］

2.2 兩組的不良妊娠結(jié)局比較實(shí)驗(yàn)組的流產(chǎn)、妊高征、抑郁、胎兒畸形發(fā)生率均顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組的不良妊娠結(jié)局發(fā)生率比較 ［n（%）］

3 討論

我國(guó)是一個(gè)出生缺陷頻發(fā)的國(guó)家，高出生缺陷率嚴(yán)重影響了人口質(zhì)量，與優(yōu)生優(yōu)育的目標(biāo)不相符。出生缺陷的發(fā)生原因十分復(fù)雜，母體葉酸缺乏是其中重要原因之一［5］。食物中的葉酸易被紫外線(xiàn)破壞，另外食物在烹飪時(shí)葉酸損失50%～95%。葉酸缺乏癥在全世界被公認(rèn)為是一個(gè)保健問(wèn)題。孕婦處于特殊生理時(shí)期，葉酸需求量高于正常人。據(jù)相關(guān)研究［6］，葉酸本身無(wú)治療作用，孕婦服用后，在MTHFR 的作用下，可還原成5－甲基四氫葉酸，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)同型半胱氨酸（HCY）的調(diào)節(jié)，最終發(fā)揮保護(hù)胎兒神經(jīng)管發(fā)育以及抑制流產(chǎn)、抑郁的作用。

目前，MTHFR 基因多態(tài)性與妊娠結(jié)局的研究并不少見(jiàn)。孫慶梅等［7］探討MTHFR 基因與不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性，結(jié)果顯示，MTHFR－677 TT 和MTRR－66 AG 是不良妊娠結(jié)局發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。梁玲芝等［8］的研究顯示，育齡婦女?dāng)y帶MTHFR C677T 位點(diǎn)的T 等位基因及CT、TT 和CT ＋TT 基因型可能會(huì)增加不良妊娠結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)。但是相關(guān)報(bào)道多集中在既往存在不良妊娠結(jié)局孕婦和無(wú)不良妊娠結(jié)局孕婦，且年齡并未限定。本研究建立在既往研究的基礎(chǔ)上，選取的孕婦年齡均在35～40 歲之間，這部分孕婦均與二胎政策的開(kāi)放有關(guān)，有生育史，且既往均有不良妊娠結(jié)局，并針對(duì)性地給予葉酸，這就有別于既往相關(guān)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，C677T 位點(diǎn)的基因分布中，實(shí)驗(yàn)組的CC 占比高于對(duì)照組，CT 占比低于對(duì)照組（P ＜0.05），提示MTHFR 基因的多態(tài)性和不良妊娠結(jié)局密切相關(guān)。本研究進(jìn)一步分析兩組的不良妊娠結(jié)局，結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組的流產(chǎn)、妊高征、抑郁、胎兒畸形發(fā)生率均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），表明MTHFR 基因的多態(tài)性的確會(huì)影響妊娠結(jié)局，其突變可能增加不良妊娠結(jié)局。

綜上所述，MTHFR 基因多態(tài)性會(huì)對(duì)妊娠結(jié)局產(chǎn)生影響，必須重視孕期葉酸的補(bǔ)給，盡可能補(bǔ)充三代葉酸，以減少不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，提高出生人口質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育的目標(biāo)。