卵丘顆粒細胞質(zhì)量及IL-6、CRP變化對IVF-ET治療子宮內(nèi)膜異位癥不孕臨床結(jié)局的影響

焦 艷 夏紅慧

1.湖北省武漢商職醫(yī)院(430000)；2.湖北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院

子宮內(nèi)膜異位癥(EMS)是導致不孕的主要原因之一[1]。體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療不孕癥療效確切[2]。但研究顯示，相對非EMS因素導致不孕癥而言，EMS患者IVF-ET結(jié)局較差[3]。有研究發(fā)現(xiàn)，卵丘顆粒細胞凋亡可導致多囊卵巢綜合征患者卵母細胞質(zhì)量降低影響IVF-ET結(jié)局[4]。有文獻報道，白細胞介素-6(IL-6)等炎癥因子可增加卵丘顆粒細胞氧化應激水平造成線粒體損失影響IVF-ET結(jié)局[5]。EMS患者存在異常炎癥反應，可表現(xiàn)為血清C反應蛋白(CRP)水平升高[6]。本研究通過檢測EMS患者卵泡液IL-6和CRP水平以及卵丘顆粒細胞凋亡情況，分析對EMS患者IVF-ET結(jié)局影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2018年1月—2020年1月在醫(yī)院生殖中心進行IVF-ET治療患者臨床資料，因EMS行IVF-ET治療為EMS組，因男性因素行IVF-ET治療為對照組。納入標準：①EMS組經(jīng)腹腔鏡證實為卵巢型EMS囊腫合并不孕；②對照組為因男方少弱畸精子癥造成不孕；③輸卵管造影顯示雙側(cè)輸卵管通暢、無梗阻、粘連等炎癥表現(xiàn)；④基礎內(nèi)分泌及月經(jīng)周期正常；⑤男性可正常進行體外受精無治療禁忌征。排除標準：①女方年齡≥40歲，周期數(shù)≥2個；②子宮明顯增大合并腺肌癥或子宮肌瘤；③依從性差。入組對象簽署知情同意書，研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過。

1.2IVF-ET治療

EMS組：患者進入IVF-ET治療周期前B超顯示合并囊腫且≥10mm，先行囊腫穿刺術，明確為囊腫后抽吸以生理鹽水反復沖洗至沖洗物澄清。兩組均采用長方案促進排卵：于月經(jīng)第5天，炔雌醇環(huán)丙孕酮片(德國Bayer Weimar GmbH und Co.KG)口服，1片/d，共21天；服藥后第19天，注射用醋酸曲普瑞林(達菲林)(法國Ipsen Pharma Biotech)皮下注射，0.1mg/次，1次/d；達到降調(diào)標準后，根據(jù)竇卵泡數(shù)加用重組人促卵泡激素注射液(果納芬)(意大利Merck Serono S.p.A)皮下注射，150～300IU/d；卵泡直徑≥18mm或卵泡直徑超過17mm≥3個，注射用絨促性素(麗珠集團麗珠制藥廠)肌內(nèi)注射，5000～10000U/次；36～38h后經(jīng)陰道超聲引導下取卵，檢出卵泡液中卵冠丘復合體，置37℃ 6%CO2培養(yǎng)箱，預培養(yǎng)2～3h后行常規(guī)受精；受精后第2～3天選取優(yōu)質(zhì)胚胎，經(jīng)腹部B超引導下行胚胎移植。移植后14天抽取外周血檢測血清β絨毛膜促性腺激素(β-hCG)水平確定生化妊娠，移植后28天行陰道超聲檢查，宮腔內(nèi)見胚芽和心管搏動確定為臨床妊娠。

1.3 檢測及觀察指標

①基線資料：年齡、不孕年限，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)，竇卵泡數(shù)；取外周靜脈血，酶聯(lián)免疫吸附法測定血清卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)和雌二醇(E2)水平，試劑盒購置于上海康朗生物科技有限公司。②卵泡液炎癥因子水平：穿刺收集卵泡液，分離出不含血液的卵泡液，選取卵泡徑線10mm卵泡離心取上清液，酶聯(lián)免疫吸附法測定卵泡液IL-6和CRP水平，試劑盒購置于上?？道噬锟萍加邢薰尽＂勐亚痤w粒細胞凋亡：卵泡液收集和處理方法同上，收集由卵母細胞上脫落的新鮮卵丘顆粒細胞，4℃離心，加入甲醛溶液重懸細胞，調(diào)整細胞濃度為1×105/ml，室溫孵育10min；加入Buffer溶液500μl懸浮細胞后，依次加入Annexin V-FITC溶液和PI溶液(上海銳賽生物技術有限公司)，室溫避光孵育10min；利用流式細胞儀(美國BD公司，型號Accuri C6)檢測卵丘顆粒細胞凋亡情況。④IVF-ET結(jié)局：受精率(%)=正常受精卵數(shù)/獲卵數(shù)×100%，卵子成熟率(%)=取卵日成熟卵子數(shù)/獲卵數(shù)×100%。⑤妊娠結(jié)局：臨床妊娠率(%)=臨床妊娠例數(shù)/移植周期總數(shù)×100%，多胎率和流產(chǎn)率。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較

EMS組98例，按病變累及部位、數(shù)目、大小、粘連程度分期為Ⅰ期28例，Ⅱ期37例，Ⅲ期26例，Ⅳ期7例。對照組87例。兩組基線資料比較無差異(P>0.05)。見表1。

表1 兩組基線資料比較

2.2 兩組卵泡液炎癥因子水平比較

EMS組卵泡液IL-6(364.23±48.53 ng/L)和CRP(10.73±0.48 ng/ml)水平高于對照組(43.25±38.42 ng/L、3.12±0.52 ng/ml)(t=31.114、64.521，均P<0.05)。

2.3 兩組卵丘顆粒細胞凋亡率比較

EMS組卵丘顆粒細胞凋亡率(25.2±3.4)%高于對照組(19.2±3.5)%(t=7.411，P<0.001)。圖1(855頁)。

2.4 兩組IVF-ET和妊娠結(jié)局比較

EMS組受精率(64.2±5.4)%和卵子成熟率(65.8±5.6)%低于對照組(71.3±4.6、84.7±6.3)%(t= 5.974、13.380，均P<0.001)。多胎率和流產(chǎn)率兩組比較無差異(P>0.05)，臨床妊娠率EMS組低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組妊娠結(jié)局比較[例(%)]

2.5EMS患者卵泡液炎癥因子水平及卵丘顆粒細胞凋亡率與IVF-ET結(jié)局關系

EMS組卵泡液IL-6和CRP水平及卵丘顆粒細胞凋亡率與受精率、卵子成熟率和臨床妊娠率均呈負相關(P<0.05)。見表3。

表3 EMS患者各觀察指標與IVF-ET結(jié)局相關性

3 討論

EMS是由具有活性的內(nèi)膜細胞種植于子宮內(nèi)膜以外位置的婦科疾病。目前EMS致不孕病因尚不明確，多認為由免疫、生殖內(nèi)分泌、子宮內(nèi)膜容受性、盆腔解剖結(jié)構(gòu)和內(nèi)環(huán)境等因素共同作用引起[7]。IVF-ET是目前治療不孕癥較成熟技術，但治療后不孕婦女著床成功率僅有15%，其結(jié)局受多種因素影響[8]。趙菲[9]研究發(fā)現(xiàn)，不孕癥患者HCG日黃體酮水平、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、年齡等可影響IVF-ET結(jié)局；劉海霞[10]等研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)系統(tǒng)、溫度、濕度、pH值等環(huán)境因素也可影響IVF-ET結(jié)局。

李安吉[11]等研究發(fā)現(xiàn)，EMS不孕患者促排卵后受精率較低可能與卵泡液中炎癥因子介導的卵泡微環(huán)境改變導致卵泡發(fā)育障礙、卵母細胞質(zhì)量受損有關。超排過程為炎癥反應過程，CRP可通過參加機體非特異性免疫，激活補體系統(tǒng)和中性粒單核吞噬細胞產(chǎn)生細胞因子引發(fā)炎癥反應。本研究結(jié)果顯示，與男性因素導致的不孕癥患者比較，EMS患者卵泡液IL-6和CRP水平明顯升高，提示EMS患者存在炎癥反應。排卵是卵細胞及其周圍卵丘顆粒細胞被排出的過程，卵丘顆粒細胞主要與卵母細胞相互作用共同調(diào)節(jié)卵泡成熟、排卵和受精過程，常用于研究細胞增殖、分化和細胞相互作用及其信號轉(zhuǎn)導通路和分子機制，尤其是對研究IVF-ET中卵子發(fā)生發(fā)育相關機制有著重要意義。曹文麗等[12]研究發(fā)現(xiàn)，卵丘顆粒細胞端粒長度與卵母細胞成熟度和IVF-ET結(jié)局密切相關；Zhang等[13]研究發(fā)現(xiàn)，晚期EMS患者卵丘顆粒細胞凋亡對IVF-ET治療后妊娠率有一定影響。本研究結(jié)果顯示，EMS患者卵丘顆粒細胞凋亡率高于對照組患者，可能與炎癥因子刺激和卵泡閉鎖有關[14-15]。黃柳靜等[16]研究發(fā)現(xiàn)，合并EMS不孕癥患者人工受精成功率和IVF-ET后臨床妊娠率較低。本研究結(jié)果顯示，EMS患者受精率、卵子成熟率和臨床妊娠率均低于男性因素導致的不孕癥患者。本文經(jīng)Pearson分析得出，EMS患者卵泡液IL-6和CRP水平及卵丘顆粒細胞凋亡率與受精率、卵子成熟率和臨床妊娠率呈負相關，提示卵泡液IL-6和CRP高水平以及高卵丘顆粒細胞凋亡率可降低EMS患者IVF-ET治療的受精率、卵子成熟率和臨床妊娠率。

綜上所述，EMS患者IVF-ET結(jié)局較差，卵泡液IL-6和CRP水平以及卵丘顆粒細胞凋亡率與IVF-ET結(jié)局密切相關，可能成為預測IVF-ET結(jié)局的有效指標。