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    纖維素酶法提取太子參塊根粗多糖工藝的優(yōu)化*

    2021-08-02 09:21:26楊興月王俊麗任建國
    食品工程 2021年2期
    關(guān)鍵詞:工業(yè)化生產(chǎn)太子參葡萄糖

    李 玲 楊興月 王俊麗 董 令 任建國*

    (貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,環(huán)境污染與疾病監(jiān)控教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州省食品營養(yǎng)與健康工程研究中心,貴州貴陽 550025)

    太子參為石竹科異葉假繁縷[Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Pax ex Pax et Hoffm] 的干燥塊根,含有環(huán)肽類、多糖、皂苷、氨基酸等成分,具有心肌保護(hù)、免疫功能、抗化學(xué)降解、抗酶解和改善肺部功能等作用?,F(xiàn)代研究表明,多糖是太子參主要活性成分之一,有增強(qiáng)免疫、抗疲勞、活血抗栓、降血壓、降血脂、降血糖、抗衰老、增強(qiáng)骨髓造血機(jī)能、抗輻射等藥理作用。鑒于太子參多糖在臨床上的廣泛應(yīng)用價(jià)值,目前已有多種關(guān)于其提取的方法,如超聲提取,酶提取,水提醇沉,超高壓技術(shù)提取等。闞永軍等采用熱水提取法、超聲提取法和纖維素酶提取法進(jìn)行太子參粗多糖的提取,發(fā)現(xiàn)纖維素酶提取法粗多糖得率最高為17.81%,其次為熱水提取法和超聲提取法。由于該試驗(yàn)中,未對(duì)纖維素酶提取法的提取條件進(jìn)行優(yōu)化探索,進(jìn)而限制了該方法在太子參多糖工業(yè)化生產(chǎn)中的應(yīng)用,為此本研究擬采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)酶提取粗多糖工藝進(jìn)行優(yōu)化,以期為該方法的高效利用提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    太子參,購于貴州省黃平縣;纖維素酶,食品級(jí)5 萬u/g,最適溫度50 ℃,北京索萊寶科技有限公司。

    無水乙醇,重慶川東化工有限公司;濃硫酸,上海沃凱生物技術(shù)有限公司;葡萄糖,天津市密歐化學(xué)試劑有限公司;苯酚,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;上述試劑均為分析純。

    1.2 儀器及設(shè)備

    TG16.5 臺(tái)式高速離心機(jī),上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司;1510 型酶標(biāo)儀,Thermo Fisher Scientific Oy;HWS-28 型電熱恒溫水浴鍋,上海恒科學(xué)儀器有限公司;WBL2521H 型攪拌機(jī),廣東美的生活電器制造有限公司;FA2004N 型電子分析天平,上海菁海儀器有限公司;萬欣型電熱鼓風(fēng)干燥箱,上海恒科學(xué)儀器有限公司;KQ-800KDV型高功率數(shù)控超聲波清洗機(jī),昆山市超聲儀器有限公司。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 樣品預(yù)處理

    將太子參塊根洗凈、晾干,60 ℃恒溫烘干,粉碎過40 目,常溫保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

    采用苯酚-硫酸法測(cè)定太子參中多糖。將葡萄糖在105 ℃干燥至恒重后,精密稱取葡萄糖100 mg,定容至1 000 mL,搖勻即得0.10 mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05 mL、0.10 mL、0.15 mL、0.20 mL、0.25 mL、0.30 mL 置于6 支具塞試管中,加蒸餾水補(bǔ)至0.5 mL。每只試管再加入5%苯酚溶液0.5 mL,混勻后再加入濃硫酸2.5 mL,迅速振搖混勻,于室溫下放置30 min,490 nm 處測(cè)量吸光度值,以吸光度值(y)為縱坐標(biāo),葡萄糖質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程。

    1.3.3 粗多糖酶提取正交試驗(yàn)

    精密稱取27 份太子參粉末每份10 g。在闞永軍等試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,選取料液比(A)、酶添加量(B)和提取時(shí)間(C)三因素進(jìn)行纖維素酶提取太子參粗多糖的L9(34)正交試驗(yàn),每組試驗(yàn)重復(fù)3 次,因素水平設(shè)計(jì)見表1。具體試驗(yàn)步驟為:先分別按料液比為1∶5、1∶10、1∶15 的量浸泡太子參粉末24 h,然后分別加入0.125 g、0.25 g、0.5 g 纖維素酶,50 ℃浸泡1 h、1.5 h、2 h,煮沸10 min 對(duì)酶進(jìn)行滅活,然后過濾。濾渣如上重復(fù)提取2 次,合并3 次濾液,蒸發(fā)濃縮至約100 mL,加入4 倍量無水乙醇,4 ℃靜置過夜,4 000 r/min 離心10min 收集沉淀,再向沉淀中加入50 mL 蒸餾水充分溶解,重復(fù)醇沉淀1 次。收集沉淀,冷凍干燥后稱重,即為粗多糖質(zhì)量,進(jìn)而計(jì)算得到太子參粗多糖得率。

    表1 L9(34)正交試驗(yàn)因素水平

    1.3.4 太子參總多糖含量及粗多糖純度測(cè)定

    精密稱取上述冷凍干燥的粗多糖10 mg,加蒸餾水定容至100 mL。取1 mL 置于10 mL 容量瓶中,按“標(biāo)準(zhǔn)曲線制備”操作測(cè)得樣品吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出太子參總多糖含量及粗多糖的純度。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

    由不同質(zhì)量濃度葡萄糖與具對(duì)應(yīng)吸光度值制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

    圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

    由圖1 可知,葡萄糖在0.001 43 mg/mL~0.008 57 mg/mL 范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系,y=168.77x-0.0311,R2=0.990 8。

    2.2 粗多糖酶提取工藝優(yōu)化結(jié)果

    纖維素酶法提取太子參粗多糖正交試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果見表2。

    表2 纖維素酶提取法制備太子參粗多糖正交試驗(yàn)結(jié)果

    由表2 中極差R 值大小可看出,影響太子參粗多糖提取的主要因素是C,其次為B,A 因素影響相對(duì)較小,即提取時(shí)間>酶添加量>料液比。纖維素酶提取法制備太子參粗多糖的最佳工藝為A1B2C3,即提取料液比1∶5、酶添加量0.25 g、提取時(shí)間2 h,重復(fù)提取3 次,此條件下所得粗多糖含量最高為28.9%,粗多糖純度為51.8%。該批太子參塊根樣品的總多糖提取率為15.0%。本文纖維素酶法提取粗多糖優(yōu)化工藝試驗(yàn)結(jié)果與闞永軍等的試驗(yàn)結(jié)果相比,明顯提高了太子參粗多糖得率和總糖提取率,進(jìn)而為該方法用于太子參多糖工業(yè)化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

    3 結(jié)論

    目前超聲波、超高壓技術(shù)及水提醇沉等技術(shù)已被應(yīng)用于太子參多糖的提取,提取率分別達(dá)6.17%、37.56%和21.41%,但這些提取方法均需一定的儀器設(shè)備或有機(jī)溶劑,對(duì)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)不利,而纖維素酶提取法所需設(shè)備簡(jiǎn)單,酶試劑來源廣泛,易滅活,且對(duì)環(huán)境無不良影響,對(duì)太子參多糖的提取率達(dá)17.81%。針對(duì)以上研究報(bào)道,太子參多糖酶提取法簡(jiǎn)單易行、工藝安全,得率也相對(duì)較高,更適合于大量太子參多糖的提取。為此本研究用纖維素酶進(jìn)行太子參粗多糖提取優(yōu)化試驗(yàn),采用L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),探討了酶量、料液比和提取時(shí)間對(duì)粗多糖得率的影響,試驗(yàn)結(jié)果表明,在酶最適溫度(50 ℃)條件下,最佳提取工藝為:料液比1∶5,酶添加量0.25 g、提取時(shí)間2 h,提取次數(shù)3 次,此條件下粗多糖得率28.9%,粗多糖純度達(dá)51.8%,這為太子參粗多糖工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

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