甲狀腺功能減退癥患者外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平與心血管病變的關(guān)系

劉平賢，張浩，李偉漢，陸佳團(tuán)

（南陽市中心醫(yī)院乳腺甲狀腺外科，河南 南陽 473009）

甲狀腺功能減退是指因甲狀腺激素合成、分泌減少以及生理效應(yīng)不足致使機(jī)體代謝降低的疾病[1,2]，臨床根據(jù)促甲狀激素（TSH）將其分為臨床甲減和亞臨床甲減。相關(guān)報(bào)道顯示女性發(fā)病率高于男性，且年齡越大發(fā)病率越高[3]。鋅指蛋白A20也稱腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3，是指具有特征性鋅指結(jié)構(gòu)的一類蛋白，有關(guān)研究顯示鋅指蛋白A20可參與炎癥反應(yīng)并對細(xì)胞凋亡具有抑制作用，在免疫調(diào)節(jié)中具有重要作用[4,5,6]。甲狀腺激素對心血管功能具有調(diào)節(jié)作用，可影響心肌細(xì)胞、傳導(dǎo)系統(tǒng)以及周圍血管疾病發(fā)展，隨著心血管疾病發(fā)病率不斷上升，探究心血管疾病與甲狀腺功能之間相關(guān)性成為臨床研究熱點(diǎn)。本研究旨在探討甲狀腺功能減退癥患者外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平與心血管病變的關(guān)系，以期為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月-2020年1月本院收治的35例甲狀腺功能減退患者為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn):⑴符合甲狀腺功能減退診斷標(biāo)準(zhǔn)[7,8];⑵TSH＞5.4mIU/L，F(xiàn)T3、FT4均有不同程度降低表現(xiàn)；⑶臨床資料完整；⑷依從性較高者；⑸自愿參與并簽署研究知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并精神系統(tǒng)疾病者；⑵合并原發(fā)性高血壓、糖尿病、高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化者；⑶心、肝、腎等重要器官功能代謝障礙者；⑷有血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾病者；⑸合并惡性腫瘤者；⑹妊娠期或哺乳期者；⑺近一個(gè)月內(nèi)服用甲狀腺、糖皮質(zhì)激素類藥物者；⑻拒絕參加此次研究者。研究組男21例，女14例；年齡25～60歲，平均年齡38.18±3.45歲；體重50～70kg，平均體重60.38±4.71kg，體質(zhì)指數(shù)22.54±0.76kg/m2；同期28例健康體檢者為對照組，其中男20例，女8例；年齡26～62歲，平均年齡38.65±3.29歲；體重50～70kg，平均體重61.15±3.94kg，體質(zhì)指數(shù)22.28±0.91kg/m2。兩組一般資料比較無顯著差異（P＞0.05），可比較。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)審核并一致通過。

1.2 方法 抽取晨起空腹患者靜脈血8ml，3ml靜脈血離心后留取血清置于-20℃冰箱待檢，采用電化學(xué)發(fā)光法（選用羅氏Cobas8000c701全自動(dòng)生化儀）對促甲狀腺激素（TSH）、游離三碘甲狀腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）進(jìn)行檢測；剩余5ml肝素抗凝留取血漿采用密度梯度離心法將外周血單個(gè)核細(xì)胞分離出置于37℃二氧化碳溫箱培養(yǎng)4h，然后將上清液去除獲得貼壁單核細(xì)胞加入培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，提取上清液后利用4%多聚甲醛固定30min，采用免疫組織化學(xué)法檢測單核細(xì)胞鋅指A20蛋白水平：⑴0.01MPBS洗滌2次，時(shí)間每次3min，再加入打孔液在室溫下靜置10min；⑵0.01MPBS洗滌2次，時(shí)間每次3min，再加3%過氧化氫于室溫下處理15min；⑶0.01MPBS洗滌2次，時(shí)間每次3min，再加血清封阻于室溫下15min；⑷加1:50兔抗人A20多克隆抗體，以0.01MPBS代替陰性對照，并于4℃下過夜；⑸0.01MPBS洗滌3次，時(shí)間每次3min，加入生物素標(biāo)記山羊抗小鼠IgG，37℃下孵育20min；⑹0.01MPBS洗滌3次，時(shí)間每次3min，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液，室溫孵育15min；⑺0.01MPBS洗滌2次，時(shí)間每次3min；⑻DAB顯色，蘇木素染核，脫水、透明、封固鏡檢。采用酶偶聯(lián)比色法檢測總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。采用酶聯(lián)免疫吸附法（儀器及試劑由北京福瑞生物工程公司提供）檢測高敏-C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）水平。

1.3 觀察指標(biāo) ⑴甲狀腺功能：TSH、FT3、FT4水平；⑵血脂、炎性因子水平：TC、TG、HDL-C、LDLC、hs-CRP、TNF-α、IL-6水平；⑶外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平；⑷心血管病變：冠心病、高血壓、心絞痛、心力衰竭等發(fā)生情況；⑸外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平與心血管病變相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析和處理，計(jì)數(shù)資料采取率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采取()表示,行t檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組甲狀腺功能比較 研究組TSH水平高于對照組（P＜0.05），研究組FT3、FT4水平低于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組甲狀腺功能比較（）

表1 兩組甲狀腺功能比較（）

組別 n研究組對照組35 28 t P TSH（mIU/L）FT3（pmol/L）10.89±3.26 1.73±0.50 28.894 0.000 4.13±1.22 4.54±0.58 3.188 0.002 FT4（pmol/L）13.84±4.10 15.29±3.01 3.024 0.003

2.2 兩組炎性因子水平、外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平比較 研究組TC、TG、HDL-C、LDL-C、hs-CRP、TNF-α、IL-6水平高于對照組（P＜0.05）,研究組外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平低于對照組（P＜0.05），見表2。

表2 兩組血脂水平、炎性因子水平、外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平比較

2.3 兩組心血管病變發(fā)生情況比較 研究組冠心病、高血壓、心絞痛、心力衰竭發(fā)生率均高于對照組（P＜0.05），見表3。

表3 兩組心血管病變發(fā)生情況比較

2.4 甲狀腺功能減退癥患者外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平與心血管病變相關(guān)性 外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平與hs-CRP、TNF-α、IL-6呈正相關(guān)，見表4。

表4 甲狀腺功能減退癥患者外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平與心血管病變相關(guān)性

3 討論

隨著環(huán)境變化、生活節(jié)奏加快，甲狀腺功能減退發(fā)病率逐年上升并有年輕化趨勢[9]。TSH由垂體前葉分泌，主要作用為促進(jìn)甲狀腺激素合成、分泌,甲狀腺激素升高或降低其TSH會(huì)出現(xiàn)相反變化，二者之間形成負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制。FT3、FT4是T3、T4的生理活性形式，與T3、T4比較靈敏度更高，可真實(shí)反饋甲狀腺代謝狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示研究組TSH水平高于對照組，F(xiàn)T3、FT4水平低于對照組，與指南甲狀腺功能減退指標(biāo)變化一致。

本研究中研究組TC、TG、HDL-C、LDL-C水平高于對照組，且研究組心血管病變發(fā)生率高于對照組，提示甲狀腺功能減退患者其心血管病變可能性更高。分析原因可能是甲狀腺功能減退患者其甲狀腺激素合成、分泌減少，同時(shí)脂肪降解也減少，脂肪從膽汁排泄速度下降，從而導(dǎo)致血脂水平異常。另外患者發(fā)生甲狀腺功能減退時(shí)可造成高凝狀態(tài)，對纖維蛋白分解造成損害從而導(dǎo)致血小板、血管內(nèi)皮功能紊亂引發(fā)心血管疾病。甲狀腺激素升高可增加心排出量、心肌耗氧量，引發(fā)心動(dòng)過速，還對LDL-C氧化產(chǎn)生的自由基代謝具有促進(jìn)作用啊，致使內(nèi)皮功能發(fā)生紊亂引發(fā)心絞痛。本研究還顯示甲狀腺功能減退癥患者外周血單核細(xì)胞鋅指蛋白A20水平與hs-CRP、TNF-α、IL-6呈正相關(guān)，提示鋅指蛋白A20與炎性因子水平密切相關(guān)。在hs-CRP、TNF-α、IL-6等炎癥因子刺激下激活NF-κB信號(hào)通路A20水平迅速上升，高水平狀態(tài)下A20對NF-κB信號(hào)通路進(jìn)行負(fù)性調(diào)控從而對依賴NF-κB的炎癥因子進(jìn)行干預(yù)達(dá)到抗炎、抗凋亡雙重保護(hù)作用[10-12]。Longo[13]等、盧珊[14]等的研究中指出鋅指蛋白A20過表達(dá)時(shí)可下調(diào)IκBα從而對CD40配體所誘導(dǎo)的NF-κB激活進(jìn)行阻斷使炎癥因子細(xì)胞間黏附分子-1、血管細(xì)胞黏附分子1、E選擇素的表達(dá)下調(diào)達(dá)到保護(hù)血管內(nèi)膜，降低血管損傷目的；還可對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性、細(xì)胞凋亡進(jìn)行阻斷從而抑制炎癥反應(yīng)改善動(dòng)脈粥樣硬化，綜上原因當(dāng)鋅指蛋白A20水平明顯下降時(shí)可能增加心血管病變發(fā)生率。

綜上所述，甲狀腺功能減退癥患者炎癥反應(yīng)明顯且心血管病變率高，鋅指蛋白A20與hs-CRP、TNF-α、IL-6存在相關(guān)性，提示鋅指蛋白A20可作為心血管事件發(fā)生的預(yù)測指標(biāo)。