宮頸病變患者外周血免疫球蛋白及陰道灌洗液中免疫細(xì)胞因子水平變化及臨床意義

戎鳳敏，秦海霞，張景航，張嬌

（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科，河南 新鄉(xiāng) 453100）

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，早期常無癥狀體征，發(fā)展可有陰道流血、排液等癥狀，其發(fā)病率僅僅次于乳腺癌[1]。其在形成之前有很長的宮頸病變階段，即宮頸炎和上皮內(nèi)瘤變。因此，對(duì)疾病進(jìn)展的早期診斷和評(píng)價(jià)是制定宮頸癌防治措施的關(guān)鍵[2]。同時(shí)大多數(shù)宮頸癌患者HPV檢測呈陽性，大多數(shù)HPV感染患者具有足夠的免疫防御機(jī)制對(duì)抗病毒，但部分宮頸癌患者存在免疫逃逸現(xiàn)象[3,4]。腫瘤免疫以細(xì)胞為主，T細(xì)胞在抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和監(jiān)測作用。在抗腫瘤免疫反應(yīng)中，腫瘤患者常出現(xiàn)體液免疫抑制[5]。鑒于其在臨床報(bào)道較少，因此本研究分析宮頸病變患者外周血IgM、IgG、IgA水平和陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平變化，以期了解其余宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017年03月-2019年03月本院收治的210例宮頸病變患者的臨床資料，納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴均經(jīng)病理學(xué)檢查確診；⑵年齡：28～65歲；⑶臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴嚴(yán)重肝腎功能不全及凝血功能異常者;⑵合并自身免疫系統(tǒng)疾病及其他惡性腫瘤者;⑶合并急慢性炎性反應(yīng)疾病者；⑷合并精神障礙者。同時(shí)選取同期于本院進(jìn)行體檢的60例女性作為對(duì)照組。觀察組：年齡29～65（45.26±7.03）歲。對(duì)照組：年齡28～68（46.73±7.11）歲，兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 外周血免疫球蛋白水平 采集外周靜脈血3ml，在室溫下靜置30～60min，存于EDTA抗凝管中,在1200r/min下離心10min,進(jìn)行離心沉淀細(xì)胞，分離上清液后采用免疫擴(kuò)散法（儀器及試劑均由上海信然生物技術(shù)有限公司提供）測定外周血中IgM、IgG、IgA表達(dá)水平。

1.2.2 洗液中免疫細(xì)胞因子水平 采用酶聯(lián)免疫吸附法（奧地利公司提供的型號(hào)為Bioelisa ELX-800的酶標(biāo)儀）檢測IL-2、IL-4、IFN-γ水平，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（）表示，行單因素方差分析及LSD-t檢驗(yàn)，各變量間相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析、以相關(guān)系數(shù)r表示兩資料間的相關(guān)性，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組外周血IgM、IgG、IgA水平和IL-2、IL-4、IFN-γ水平比較 宮頸癌組外周血IgM、IgG、IgA水平低于對(duì)照組，慢性宮頸炎組和宮頸上皮內(nèi)瘤變組外周血IgM、IgG、IgA水平高于對(duì)照組，慢性宮頸炎組、宮頸上皮內(nèi)瘤變組和宮頸癌組陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平低于對(duì)照組，IL-4高于對(duì)照組（P＜0.05）；宮頸癌組外周血IgM、IgG、IgA水平和陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平低于慢性宮頸炎組和宮頸上皮內(nèi)瘤變組，IL-4高于慢性宮頸炎組和宮頸上皮內(nèi)瘤變組（P＜0.05），宮頸上皮內(nèi)瘤變組外周血IgM、IgG、IgA水平和陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平低于慢性宮頸炎組，IL-4高于慢性宮頸炎組（P＜0.05）。見表1。

表1 四組外周血IgM、IgG、IgA水平和IL-2、IL-4、IFN-γ水平比較（）

表1 四組外周血IgM、IgG、IgA水平和IL-2、IL-4、IFN-γ水平比較（）

組別 IgM（g/L） IgG（g/L） IgA（g/L） IL-2（pg/ml） IL-4（pg/ml） IFN-γ（pg/ml）慢性宮頸炎組（n=60）宮頸上皮內(nèi)瘤變組（n=72）宮頸癌組（n=78）對(duì)照組（n=60）F值P值5.28±2.65 3.05±1.47 0.82±0.33 1.37±0.52 15.248 0.000 20.22±8.35 17.11±6.02 6.81±2.05 12.31±4.18 19.630 0.000 5.95±2.73 3.65±1.51 1.45±0.23 2.39±1.10 146.547 0.000 27.31±8.65 23.65±6.14 12.16±3.08 35.69±7.42 118.050 0.000 2.88±0.30 5.27±1.64 13.15±4.26 1.32±0.20 268.137 0.000 26.41±8.20 20.16±6.13 14.77±2.95 34.62±7.48 65.173 0.000

2.2 HPV高危組和低危組外周血IgM、IgG、IgA水平和IL-2、IL-4、IFN-γ水平比較HPV高危組外周血IgM、IgG、IgA水平和陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平低于HPV低危組，IL-4高于HPV低危組（P＜0.05）。見表2。

表2 HPV高危組和低危組外周血IgM、IgG、IgA水平和IL-2、IL-4、IFN-γ水平比較（）

表2 HPV高危組和低危組外周血IgM、IgG、IgA水平和IL-2、IL-4、IFN-γ水平比較（）

組別 IgM（g/L） IgG（g/L） IgA（g/L） IL-2（pg/ml） IL-4（pg/ml） IFN-γ（pg/ml）HPV高危組（n=120）HPV低危組（n=90）t值P值0.80±0.35 0.96±0.48 2.794 0.006 7.02±2.14 9.65±3.34 6.936 0.000 1.56±0.30 1.98±0.44 8.218 0.000 13.18±3.22 16.95±5.12 6.529 0.000 12.84±3.60 9.46±2.77 7.411 0.000 15.23±3.40 18.41±5.28 5.296 0.000

2.3 IgM、IgG、IgA水平與IL-2、IL-4、IFN-γ水平的相關(guān)性Spearman相關(guān)分析顯示，外周血IgM、IgG、IgA水平與陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平呈正相關(guān)性，與IL-4呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），見表3和圖1～9。

圖1 -9為IgM、IgG、IgA水平與IL-2、IL-4、IFN-γ水平的相關(guān)性

表3 IgM、IgG、IgA水平與IL-2、IL-4、IFN-γ水平的相關(guān)性

3 討論

近年來，宮頸癌發(fā)病率呈上升趨勢，且逐漸趨向年輕化，據(jù)相關(guān)報(bào)道顯示，我國宮頸癌發(fā)病率為99/10萬，死亡率為30.5/10萬[6]。嚴(yán)重危及人們生命安全。在正常情況下，人體的免疫功能可防止病原微生物的入侵和感染，消除受損細(xì)胞。當(dāng)機(jī)體的免疫監(jiān)測功能失能時(shí)，異常轉(zhuǎn)化細(xì)胞的處理能力降低，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7]。

免疫球蛋白是B淋巴細(xì)胞在抗原刺激下增殖分化成漿細(xì)胞后合成的與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的抗體，主要分布在體內(nèi)血清或分泌物中，在體液免疫中發(fā)揮重要作用，主要以IgA、IgG、IgM為主[8,9]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌外周血IgM、IgG、IgA水平低于對(duì)照組，慢性宮頸炎組和宮頸上皮內(nèi)瘤變組外周血IgM、IgG、IgA水平高于對(duì)照組，提示宮頸病變患者外周血免疫球蛋白水平異常,分析其原因可能為HPV感染基底細(xì)胞導(dǎo)致機(jī)體免疫防御屏障的激活，引起炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致IgM、IgG、IgA升高。并且隨著HPV的持續(xù)感染，HPV基因整合到宮頸細(xì)胞的染色體中，影響正常細(xì)胞，破壞免疫功能，宮頸癌患者的IgM、IgG、IgA降低[10]。腫瘤免疫在抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要的免疫調(diào)節(jié)和監(jiān)測作用。特別是T細(xì)胞在人體免疫中發(fā)揮重要作用，分泌不同的細(xì)胞因子，發(fā)揮不同的免疫作用。Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、IL-12、TNF-α及IFN-γ，增強(qiáng)細(xì)胞殺傷細(xì)胞毒性，刺激遲發(fā)性超敏反應(yīng)，參與細(xì)胞免疫和移植排斥反應(yīng)。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-6和IL-10，參與體液免疫[11,12]。IL-2是免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)的核心因素，可抑制腫瘤細(xì)胞增殖，提高細(xì)胞殺死抗原并誘導(dǎo)免疫細(xì)胞激活I(lǐng)FN-γ，IFNγ是入侵病原體細(xì)胞生產(chǎn)糖蛋白,可以誘發(fā)宮頸腫瘤細(xì)胞凋亡,增強(qiáng)特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞和識(shí)別和開裂。IL-4抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答，促進(jìn)Th2細(xì)胞分化和抗體產(chǎn)生,抑制Th1細(xì)胞功能[13]。本研究結(jié)果顯示，慢性宮頸炎組、宮頸上皮內(nèi)瘤變組和宮頸癌組陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平低于對(duì)照組，與譚超月等[14]報(bào)道一致，說明高表達(dá)IL-4和低表達(dá)IL-2、IFN-γ參與宮頸病變發(fā)生發(fā)展，IL-4的高表達(dá)可導(dǎo)致腫瘤逃避免疫監(jiān)視，降低抗腫瘤免疫反應(yīng)，促進(jìn)宮頸惡性腫瘤的發(fā)生。IL-2和IFN-γ低表達(dá)可降低T淋巴細(xì)胞增殖和分化的調(diào)控，導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞抗腫瘤作用減弱，細(xì)胞免疫功能紊亂，從而促進(jìn)宮頸癌的發(fā)展[15]。

本研究進(jìn)一步分析外周血免疫球蛋白及陰道灌洗液中免疫細(xì)胞因子水平在不同病變中的水平，結(jié)果顯示，宮頸癌組外周血IgM、IgG、IgA水平和陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平低于慢性宮頸炎組和宮頸上皮內(nèi)瘤變組，IL-4高于慢性宮頸炎組和宮頸上皮內(nèi)瘤變組，宮頸上皮內(nèi)瘤變組外周血IgM、IgG、IgA水平和陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平低于慢性宮頸炎組，IL-4高于慢性宮頸炎組，提示在宮頸病變過程中機(jī)體免疫受損，抗腫瘤能力降低，且隨著病變程度的加重，外周血IgM、IgG、IgA水平和陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平呈低表達(dá)，IL-4呈高表達(dá)，與曾月等[16]報(bào)道一致，提示宮頸局部免疫功能不平衡。由于機(jī)體無法有效響應(yīng)細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，HPV繼續(xù)被感染，從而促進(jìn)子宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，HPV高危組外周血IgM、IgG、IgA水平和陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平低于HPV低危組，IL-4高于HPV低危組，進(jìn)一步證實(shí)了IgM、IgG、IgA、IL-2、IFN-γ、IL-4水平在HPV局部感染中具有重要作用，由于高危HPV的持續(xù)感染,細(xì)胞因子介導(dǎo)的抗腫瘤免疫抑制和陰道微環(huán)境紊亂促進(jìn)了宮頸病變的發(fā)生，并由宮頸癌前病變發(fā)展為宮頸癌[16-18]。本研究創(chuàng)新之處在于：進(jìn)一步分析外周血IgM、IgG、IgA水平與陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平的相關(guān)性，Spearman相關(guān)分析顯示,外周血IgM、IgG、IgA水平與陰道灌洗液中IL-2、IFN-γ水平呈正相關(guān)性，與IL-4呈負(fù)相關(guān)，說明外周血IgM、IgG、IgA水平和陰道灌洗液中IL-2、IL-4、IFN-γ水平與病情程度密切相關(guān),有待于擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步分析其機(jī)制。

綜上所述，宮頸病變患者外周血免疫球蛋白及陰道灌洗液中免疫細(xì)胞因子水平表達(dá)異常，并與宮頸病變和HPV感染程度程度密切相關(guān)，可輔助評(píng)估宮頸病變情況。