紫草中羥基萘醌總色素含量測定的穩(wěn)定性研究

朱 勇，李懷國

（佛山市中醫(yī)院制劑中心，廣東 佛山 528000）

紫草是2020 版《中國藥典》中收載的中藥品種。紫草為紫草科紫草屬植物，以干燥的根入藥。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，紫草性寒，味甘、咸，歸心經(jīng)、肝經(jīng)，具有涼血活血、解毒透疹之功效[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，紫草具有抗菌、消炎、抗病毒、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、興奮平滑肌等作用，對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌等均有抑制作用，且能加速上皮細(xì)胞的生長，在治療燙傷方面有特效[2]。現(xiàn)階段的研究表明，紫草中的紫草素及乙酰紫草素是其能夠發(fā)揮抗炎作用的主要成分。2020 版《中國藥典》紫草項(xiàng)下羥基萘醌總色素含量的測定方法是：將紫草在50℃下干燥3 h，粉碎（過3 號篩），用95%的乙醇浸泡4 h 后震搖并稀釋，然后按照紫外-可見分光光度法（2020 版《中國藥典》四部通則0401）在516 nm 波長處測定其吸收度，羥基萘醌總色素的含量不得少于0.8%（按左旋紫草素計(jì)）[3]。我院自主研發(fā)的紫草油、傷科黃水、傷科黃油紗等均需要應(yīng)用到紫草，我院對紫草藥材質(zhì)量的要求較高，對紫草中羥基萘醌總色素含量的要求是《中國藥典》中規(guī)定的3 倍。本文主要是對紫草中羥基萘醌總色素含量測定的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

紫草（批號：20200717，購自佛山馮了性藥材有限公司），經(jīng)鑒定為紫草科紫草屬植物新疆紫草；左旋紫草素標(biāo)準(zhǔn)品（批號：110769-200405，購自中國生物制品有限公司）；L5s 紫外可見分光光度計(jì)（由上海分析儀器廠生產(chǎn)）；AE200 型電子天平（由瑞士METTLER 公司生產(chǎn)）；CT-C-I 型熱風(fēng)循環(huán)烘箱（由常州益民干燥設(shè)備有限公司生產(chǎn)）；WIMER 3001 干粉激光粒度儀（由濟(jì)南微納儀器有限公司生產(chǎn)）。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)方法 1）紫草中羥基萘醌總色素含量的測定。取紫草中藥材，按照2020 版《中國藥典》（四部通則0401）中收載的方法，測定其中羥基萘醌總色素的含量，具體的操作方法是：在50℃的環(huán)境下將紫草干燥3 h，粉碎（過3 號篩），用95%的乙醇浸泡4 h 后震搖并稀釋，然后按照紫外-可見分光光度法（2020 版《中國藥典》四部通則0401）在516 nm波長處測定其吸收度，明確其中羥基萘醌總色素的含量。2）精密度試驗(yàn)。配置左旋紫草素（含量為3%）乙醇溶液標(biāo)準(zhǔn)品及空白樣品，按照2020 版《中國藥典》（四部通則0401）中收載的方法及檢測條件重復(fù)檢測6 次，測定其中羥基萘醌總色素的含量。3）穩(wěn)定性考察。將同一批紫草粉碎成不同等級的細(xì)粉，在相同干燥時間、相同含水量下按照2020 版《中國藥典》（四部通則0401）中收載的方法及檢測條件測定羥基萘醌總色素的含量，考察該方法的穩(wěn)定性。4）準(zhǔn)確度試驗(yàn)。取已知左旋紫草素含量為3%的紫草乙醇溶液6 份（每份5 mL），在其中加入左旋紫草素標(biāo)準(zhǔn)品（左旋紫草素的含量為3%）乙醇溶液6 份（每份5 mL）。將上述兩種溶液混合，得到供試品溶液。按照2020 版《中國藥典》（四部通則0401）中收載的方法及檢測條件測定羥基萘醌總色素的含量，計(jì)算加樣回收率。加樣回收率（%）=（測得量-已知量）/加入量×100%。1.2.2 L9（34）正交試驗(yàn) 根據(jù)2020 版《中國藥典》中收載的紫草測定方法中的主要影響因素，以羥基萘醌總色素含量測定為指標(biāo)進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，考察藥材的粉碎細(xì)度、干燥時間及含水量對測定結(jié)果的影響。L9（34）正交試驗(yàn)的影響因素和水平詳見表1。

表1 L9（34）正交試驗(yàn)的影響因素和水平

2 結(jié)果

2.1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

通過進(jìn)行精密度試驗(yàn)可知，左旋紫草素（含量為3%）乙醇溶液標(biāo)準(zhǔn)品及空白樣品的平均加樣回收率為101%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）為1.46。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.2 穩(wěn)定性考察結(jié)果

通過進(jìn)行穩(wěn)定性考察可知，在紫草藥材粉碎成極細(xì)粉的條件下測得羥基萘醌總色素的含量值較為穩(wěn)定。詳見表3。

表3 紫草粉碎的粗細(xì)度對羥基萘醌總色素含量測定值的影響

2.3 L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果

本研究中進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)的結(jié)果詳見表4。

表4 L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果

2.4 羥基萘醌總色素含量測定影響因素的方差分析結(jié)果

對本研究中影響紫草中羥基萘醌總色素含量測定的因素進(jìn)行方差分析的結(jié)果顯示，藥粉細(xì)度是影響紫草中羥基萘醌總色素含量測定的主要因素，其次為藥粉干燥時間和藥粉含水量。詳見表5。

表5 羥基萘醌總色素含量測定影響因素的方差分析結(jié)果

2.5 測定紫草中羥基萘醌總色素含量的最佳條件

本研究中通過進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)可知，將藥材粉碎成極細(xì)粉、在50℃下干燥3 h、將藥粉的水含量控制在9.0%左右是測定紫草中羥基萘醌總色素含量的最佳條件。

3 討論

紫草可涼血活血、解毒透疹，可用于治療血熱毒盛、麻疹、斑疹透發(fā)不暢諸證?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，紫草中的羥基萘醌總色素是其主要藥理成分。通過對紫草中羥基萘醌總色素的含量進(jìn)行測定有利于對其進(jìn)行質(zhì)量控制[4]。我們發(fā)現(xiàn)，按照2020 版《中國藥典》（四部通則0401）中收載的方法測定紫草中羥基萘醌總色素的含量時，對檢測條件的要求過于寬泛，測定條件不夠細(xì)化，因此導(dǎo)致測定結(jié)果存在較大差異。近年來，我們在測定紫草中羥基萘醌總色素的含量時細(xì)化了測定條件，提高了藥材含量測定的穩(wěn)定性，有利于藥材的質(zhì)量控制。

本研究的結(jié)果證實(shí)，藥粉細(xì)度是影響紫草中羥基萘醌總色素含量測定的主要因素，其次為藥粉干燥時間和藥粉含水量。將藥材粉碎成極細(xì)粉、在50℃下干燥3 h、將藥粉的含水量控制在9.0% 左右是測定紫草中羥基萘醌總色素含量的最佳條件。