貓須草的組織培養(yǎng)及扦插繁殖試驗初報

李 綱 張振乾

（湖南農(nóng)業(yè)大學 湖南長沙 410125）

通過采用扦插繁殖和組織培養(yǎng)兩種技術在永州市對貓須草進行繁殖試驗，對貓須草的無性扦插繁殖和組培快繁技術進行初步研究，能為以后貓須草在永州市的大批量栽培種植和迅速推廣打好技術基礎。湖南有著廣泛的“藥食兩用”市場需要，對貓須草的開發(fā)研究不僅可以豐富永州中藥材種植品種，大面積推廣和生產(chǎn)藥食兩用作物，同時還為天然植物基因資源庫的開發(fā)利用找到一條新的途徑[1-2]。貓須草的種子繁殖技術問題解決后，又可促進農(nóng)民致富，助推農(nóng)村勞動力就業(yè)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料和儀器

萘乙酸（國藥集團化學試劑有限公司）、吲哚丁酸（木木生物技術有限公司）均為分析純，此外還有酒精（75%）（廣州市化學試劑廠）、氯化汞（河南焦作市中站區(qū)橡膠助劑廠）、新潔爾滅、枝剪、黃砂壤、活性炭、香蕉、MS 培養(yǎng)基、N6 培養(yǎng)基。

1.2 實驗方法

1.2.1 組織培養(yǎng)

（1）外植體的選取及清洗。取貓須草莖尖5 cm 左右，放置于玻璃瓶中用清水沖洗10 min，然后用新潔爾滅洗滌，再用清水沖洗20 min。洗凈后迅速放入接種室，用75%酒精或者0.1%氯化汞清洗10 s，即可進行接種[3]。

（2）接種。在超凈工作臺接種時，切除滅菌后氧化的黑色部位，留下莖尖和較嫩的腋芽約1 cm，按照表1所設置的4 種培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，每種接20 瓶，每瓶放置4 個～6 個芽點。接種后放入培養(yǎng)室，溫度控制在 21.0 ℃～23.5 ℃，光照度為2 000 lx，光照時間為12 h，進行分化處理，并進行觀察。

表1 四種培養(yǎng)基處理方式

1.2.2 扦插繁育

1.2.2.1 貓須草的春季扦插試驗

（1）配制生根水。分別稱取萘乙酸、吲哚丁酸各1 g，用0.1%NaOH 溶液溶解，定容至100 mL 容量瓶中配制成母液。使用時按照表2用蒸餾水稀釋，配制所需濃度即可。

表2 春季四種生根水處理方式

（2）剪穗和扦插。取5月的貓須草新發(fā)嫩芽中莖稈較為粗壯、無病害的嫩枝條進行扦插實驗。修剪枝條以3 節(jié)為宜，取長度5 cm～7 cm。下部1 節(jié)～2 節(jié)的葉片從葉柄基部傾斜向上剪去，將頂部的葉片剪去一半，以減少水分蒸騰蒸發(fā)。按50 根一捆將下部對齊，分別豎直放入生根水中浸泡，以浸漬下部2 cm 為宜，處理120 min 左右。扦插時，要注意不能倒插，扦插苗入土要插入1/3 左右，傾斜70°～75°[4]。扦插密度要求扦插苗剩余葉片不相互覆蓋，并根據(jù)扦插苗的粗細不同進行分級管理。

（3）管理方法。扦插前用800 倍～1 000 倍多菌靈或高錳酸鉀對土壤進行消毒。扦插后澆一次定根水，一定要澆透，使扦插苗可以與土壤充分接觸，并保持苗床的濕度和溫度。由于是在溫室大棚內(nèi)進行大棚地膜覆蓋和大棚裸露的扦插對比實驗，因此要求對裸露插床進行保濕管理，如果裸露插床比較干燥，就要及時進行補水。生根后，澆水次數(shù)要減少，以防止潮濕爛根。微量噴施葉面肥，以促進扦插苗生長健壯，出芽飽滿。

1.2.2.2 貓須草的冬季扦插試驗

（1）配制生根水。分別稱取萘乙酸、吲哚丁酸各1 g，用0.1 %NaOH 溶液溶解，定容至100 mL 容量瓶中配制成母液。使用時按照表3用蒸餾水稀釋，配制所需濃度即可。

表3 冬季四種生根水處理方式

（2）剪穗和扦插。取11月的貓須草新發(fā)嫩芽中莖稈較為粗壯、無病害的嫩枝條進行扦插實驗。修剪枝條以3 節(jié)為宜，取長度5 cm～7 cm。下部1 節(jié)～2 節(jié)的葉片從葉柄基部傾斜向上剪去，葉片留2 片～3 片，按50 根～80 根一捆將下部對齊，分別豎直放入生根水中浸泡，處理240 min 左右。冬季扦插時，溫度較低，浸泡時間需要增長，要注意不能倒插，扦插苗入土要插入1/3 左右，傾斜70°～75°。扦插密度要求扦插苗剩余葉片不相互覆蓋，并根據(jù)扦插苗的粗細不同進行分級管理。

（3）管理方法。扦插前用800 倍～1 000 倍多菌靈或高錳酸鉀對土壤進行消毒。扦插后澆一次定根水，一定要澆透，使扦插苗可以與土壤充分接觸，并保持苗床的濕度和溫度。由于是在永州市溫室大棚內(nèi)進行大棚地膜覆蓋和大棚裸露的扦插對比實驗，冬季大棚內(nèi)溫度較低而濕度較高，管理時視大棚內(nèi)溫度和濕度情況，可進行增溫和排濕管理。生根后，澆水次數(shù)要減少，以防止潮濕爛根。由于冬季扦插試驗大棚溫度較低，生根時間較長，因此不用噴施任何肥料。

2 結果與分析

2.1 組織培養(yǎng)結果

如表4所示，從分化到生根期，表現(xiàn)最好的是MS 培養(yǎng)基+6-BA 1.0 mg/L+活性炭培養(yǎng)基。由于后期需要，將MS培養(yǎng)基+6-BA 1.0 mg/L+活性炭培養(yǎng)基培養(yǎng)的組培苗轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)，10 d～12 d 就能進行一次擴繁，46 d 左右能夠培育出一批組培苗。在以后的組培苗繁育中，可以根據(jù)該培養(yǎng)基進行激素方面的細微調(diào)節(jié)來達到最優(yōu)目的。后期在繼代培養(yǎng)中，MS 培養(yǎng)基+6-BA 1.0 mg/L+活性炭培養(yǎng)基所培養(yǎng)的貓須草組培苗比較強壯，感染、褐化、白化率都較低，因此該培養(yǎng)基非常適合做貓須草的培養(yǎng)基質(zhì)。此外，在培養(yǎng)基中分別加入香蕉和活性炭成分，對比貓須草在加入這兩種物質(zhì)的培養(yǎng)基中的各個時期的表現(xiàn)。結果表明，加入活性炭的培養(yǎng)基要優(yōu)于加入香蕉的培養(yǎng)基。

表4 貓須草組織培養(yǎng)結果

2.2 扦插繁育結果

如表5所示，0.01%萘乙酸和0.01%吲哚丁酸混合浸泡2 h 和大棚覆膜處理的扦插苗生根時間短、生根數(shù)量多、出苗時間短、成活率最高，最適合應用于貓須草扦插繁育。大棚覆膜和大棚裸露相比，成活率相差較大，因此，保持土壤和空氣的濕潤也是貓須草春季扦插的一個重要指標[5]。實驗中發(fā)現(xiàn)，若大棚覆膜掀膜不及時，會出現(xiàn)爛根等現(xiàn)象，因此，在扦插苗生根后要及時掀膜。扦插繁育能夠在12 d內(nèi)培育出一批高質(zhì)量的貓須草扦插苗，非常適合短期苗木的快速繁殖[6]。

表5 貓須草春季5月份扦插實驗

由表6可知，冬季扦插貓須草，使用0.01%萘乙酸和0.01%吲哚丁酸混合浸泡2 h 和大棚覆膜處理的扦插苗生根時間短、生根數(shù)量多、出苗時間短、成活率最高，最適合應用于貓須草扦插繁育。大棚覆蓋和大棚裸露相對比，大棚覆蓋的成活率高很多，因此貓須草適合在濕度較高的環(huán)境下進行扦插繁殖。另外，在冬季進行貓須草扦插繁殖時一定要注意覆膜內(nèi)的濕度，若濕度過高，覆膜內(nèi)的扦插枝條容易腐爛、發(fā)霉，易出現(xiàn)爛根現(xiàn)象。注意要在適宜的條件下掀開覆膜透氣。

表6 貓須草冬季11月份扦插試驗

3 結論

使用MS 培養(yǎng)基+6-BA 1.0 mg/L+活性炭培養(yǎng)基，10 d～12 d 就能進行一次擴繁，46 d 左右能夠培育出一批組培苗或者脫毒苗；對比貓須草在春季和冬季的扦插繁育，使用0.01%萘乙酸和0.01%吲哚丁酸混合浸泡2 h 和大棚覆膜處理的扦插苗，不管是在春季或者是冬季，都最適合進行貓須草扦插繁殖。貓須草適合在溫度和濕度較高的環(huán)境下扦插繁殖。試驗中，在春季用扦插方法進行貓須草繁殖，最快速且經(jīng)濟實用。但是由于在永州栽培時，貓須草春季萌芽的時間較晚，不利于貓須草的栽培技術推廣。在冬季用扦插方法進行貓須草繁殖，時間較長，成活率較低，大棚覆膜和大棚裸露相比，成活率相差很大。扦插繁育能夠在12 d內(nèi)培育出一批高質(zhì)量的貓須草扦插苗，非常適合用于短期苗木的快速繁殖[7-8]。

4 討論

進行貓須草栽培試驗，不僅可以豐富永州中藥材種植品種，同時還為天然植物基因資源庫的開發(fā)利用找到一條新的途徑。貓須草的繁殖技術問題解決后，可促進農(nóng)民致富，助推農(nóng)村勞動力就業(yè)。雖然春季比較適合貓須草的扦插繁殖，但是因為春插時間較晚，不利于貓須草種苗的栽培與推廣，而冬插正好彌補了春插時間較晚這個問題。后期通過試驗，要做好貓須草的冬季扦插技術的改進，進一步完善貓須草的栽培管理技術，詳細完整的栽培管理技術能夠大幅提高貓須草的產(chǎn)量。