洋金花葉中黃酮類和生物堿類化學成分研究

劉 艷，榮曉惠，譚金燕，潘 娟，管 偉，匡海學，楊炳友*

1.黑龍江中醫(yī)藥大學，教育部北藥基礎與應用研究重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040

2.山西中醫(yī)藥大學，山西 晉中 030619

洋金花Datura metelL.為茄科曼陀羅屬植物，《中國藥典》2020年版記載其入藥部位為花，具有平喘止咳、鎮(zhèn)痛解痙、麻醉的功效[1]。洋金花的主要化學成分為醉茄內酯類、黃酮類和生物堿類，具有抗炎、抗瘙癢和細胞保護等廣泛的生物活性，尤其在臨床上對于治療銀屑病具有顯著的療效[2-3]。然而，近年來，通過對洋金花葉的化學成分研究發(fā)現(xiàn)，洋金花葉中也存在具有抗炎、抗菌、抗氧化、免疫抑制等多種生物活性的醉茄內酯類、黃酮類和生物堿類成分[4-5]。為進一步豐富洋金花葉的化學成分和生物活性，本研究繼續(xù)對洋金花葉的黃酮類和生物堿類成分進行研究，共分離鑒定出39個單體化合物。包括20個黃酮類成分：紫杉葉素（taxifolin，1）、(＋)-兒茶素 [(＋)-catechin，2]、kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranoside（3）、紫云英苷（astragalin，4）、異槲皮苷（isoquercitrin 5）、紫杉葉素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷（taxifolin-3-O-α-L-arabinofurano- side，6）、(2R,3R)-(＋)-glucodistylin（7）、(2S,3S)-(-)-glucodistylin （8）、quercetin-3-O-β-xylopyranosyl-(1→2)-β-glucopyranoside（9）、異鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（isorhamnetin-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside，10）、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside，11）、香葉木素-7-O-β-D-葡萄糖苷（diosmetin-7-O-β-D-glucoside，12）、木犀草素-7-O-β-D-(6′′-乙酰基)-吡喃葡萄糖苷[luteolin-7-O-β-D-(6′′-acetyl)-glucopyranoside，13]、plantaginin（14）、木犀草素-7-O-β-D-龍膽二糖苷（luteolin-7-O-β-D-gentiobioside，15）、7-Oprimverosylformononetin（16）、isoetin-7-O-β-Dglucopyranosyl-2′-O-α-D-glucopyranoside（17）、銀鍛苷（tiliroside，18）、2,3,6,7-tetrahydroxyxanthone（19）、1,2,6,7-tetrahydroxyxanthone（20）；19個生物堿類：N-反式-對-香豆?；野罚∟-trans-pcoumaroyltyramine，21）、N-反式-對-香豆酰基章魚胺（N-trans-p-coumaroyloctopamine，22）、eleutherazine B（23）、1,2,3,4-tetrahydro-1-methylβ-carboline-3-carboxylic acid（24）、naphthisoxazol A（25）、1-甲氧甲酰-β-咔巴啉（1-carbomethoxy-βcarboline，26）、1-benzyl-2,3,4,9-tetrahydro-1H-pyrido[3,4-b]indole-3-carboxylic acid（27）、(±)-1-phenyl-2-imido-1-propanol（28）、(1S,2R)-N-acetylephedrine（29）、(1R,2S)-N-acetylephedrine （30）、(1S,2R)-Nformylephedrine （31）、(1R,2S)-N-formylephedrine（32）、胸腺嘧啶（thymine，33）、脫氧胸腺嘧啶核苷（thymidine，34）、2-氨基腺苷（2-amino adenosine，35）、3-吲哚甲醛（1H-indole-3-carboxaldehyde，36）、L-苯丙氨酸（L-phenylalanine，37）、bacilsubteramide A（38）、金色酰胺醇酯（aurantiamide acetate，39）。其中12個黃酮類化合物（6～10、13～17、19、20）和11個生物堿類化合物（23～24、27～32、35、36、38）為首次從茄科中分離得到，7個黃酮類化合物（1～3、5、11、12、18），3個生物堿類化合物（26、33、37）等首次從曼陀羅屬中分離得到。且化合物3、5、8～11、13～15、17、18、21～27、35、36、39具有一定程度的抗炎活性。本研究充分利用了洋金花葉資源，進一步闡明了洋金花葉的藥效物質基礎，為洋金花葉的深入研究提供了理論依據(jù)。

1 儀器與材料

Bruker-400/600超導核磁共振光譜儀（瑞士Bruker公司）；UHPLC-Orbitrap-MS質譜系統(tǒng)（Thermo Fisher Scientific公司）；SunFire分析型色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）、SunFire半制備型色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm）、2695-2998-2414分析高效液相色譜儀（美國Waters公司）；Shimadzu CBM-20A型半制備HPLC（日本島津公司）；旋轉蒸發(fā)儀（日本東京理化器械株式會社）；Sepacore型中壓液相色譜儀（瑞士Buchi公司）；Epoch 2型酶標儀（美國伯騰儀器公司）；恒溫CO2培養(yǎng)箱（美國Thermo Fisher公司）；高壓蒸汽滅菌鍋（上海博訊實業(yè)有限公司）；倒置相差顯微鏡（日本Olympus公司）。

GF254型薄層硅膠（煙臺江友公司）；柱色譜用硅膠（80～100、200～300目，青島海洋化工廠）；柱色譜用ODS（12 nm，s-50 μm，日本YMC公司）；色譜層析用分析純化學試劑（天津試劑一廠）；色譜用甲醇（德國Merck公司）；RAW264.7細胞系（武漢大學細胞保藏中心）；FBS胎牛血清（以色列BI公司）；DMEM培養(yǎng)基、96孔板（美國Corning公司）；青霉素-鏈霉素（雙抗，上海碧云天公司）；DMSO、LPS、MTT（美國Sigma公司）；無水對氨基苯磺酸（天津市光復精細化工研究所）；N-α-萘乙二胺（天津市傲然精細化工研究所）。

洋金花葉于2017年9月采收于黑龍江省哈爾濱市雙城區(qū)，置于通風處陰干。經黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院藥用植物教研室樊銳鋒教授鑒定為茄科曼陀羅屬植物白花曼陀羅D.metelL.的葉。原植物標本（20170901）保存于黑龍江中醫(yī)藥大學中藥化學教研室。

2 提取與分離

將干燥的洋金花葉20 kg，以8倍量的70% 乙醇回流提取3次，每次2 h，濾過，合并乙醇液，減壓回收，得洋金花葉70%乙醇總提物4.82 kg（出膏率24.1%）。將洋金花葉70%乙醇總提物經HP-20大孔吸附樹脂，分別用水（2 BV）、30%乙醇（2 BV）、95%乙醇（4 BV）以1 BV/h體積流量進行柱色譜洗脫，收集相應的洗脫液并減壓濃縮，得到水洗脫組分930 g（19.3%）、30%乙醇洗脫組分1.195 kg（24.8%）和95%乙醇洗脫組分1.894 kg（39.3%）。

稱取30%乙醇洗脫組分（400 g），經硅膠柱色譜以二氯甲烷-甲醇（1∶0→0∶1）進行梯度洗脫，得到的洗脫液濃縮后經過反復薄層色譜分析鑒別后合并，最終得到Fr.A～I共9個流分。其中Fr.B經正相硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇（1∶0→0∶1）進行梯度洗脫，TLC反復鑒別并合并后，共得到5個流分Fr.B1～B5，F(xiàn)r.B3經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物33（2.4 mg，tR＝5.4 min）、38（0.8 mg，tR＝9.7 min）、37（6.3 mg，tR＝14.5 min）。Fr.C經正相硅膠柱色譜分離，TLC反復鑒別并合并后，得到Fr.C1～C4共4個流分，F(xiàn)r.C2經半制備型HPLC [甲醇-水（60∶40），5 mL/min]分離得到化合物34（1.3 mg，tR＝9.1 min），28（2.3 mg，tR＝18.0 min），F(xiàn)r.C3經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物39（1.4 mg，tR＝10.2 min）。Fr.D經正相硅膠柱色譜分離，TLC反復鑒別并合并后，得到共7個流分Fr.D1～D7，F(xiàn)r.D3經半制備型HPLC[甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物17（4.8 mg，tR＝13.2 min），15（4.9 mg，tR＝15.6 min），18（6.3 mg，tR＝21.2 min），F(xiàn)r.D4經ODS柱色譜分離，以甲醇-水（1∶9→1∶0）進行梯度洗脫，TLC反復鑒別并合并后，得到共5個流分Fr.D4-1～D4-5，其中Fr.D4-2經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物29（15.7 mg，tR＝15.6 min）、30（15.7 mg，tR＝15.6 min）、26（4.7 mg，tR＝25.1 min），F(xiàn)r.D4-3經半制備型HPLC [甲醇-水（60∶40），5 mL/min]分離得到化合物31（3.3 mg，tR＝17.0 min）、32（3.3 mg，tR＝17.0 min）。Fr.E經正相硅膠柱色譜分離，TLC反復鑒別并合并后，共得到5個流分Fr.E1～E5，F(xiàn)r.E3經半制備型HPLC [甲醇-水（50∶50），5 mL/min]分離得到化合物19（1.7 mg，tR＝16.8 min），F(xiàn)r.E4經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物20（1.1 mg，tR＝15.8 min）、14（2.1 mg，tR＝17.6 min）、27（2.4 mg，tR＝20.8 min）。Fr.F經正相硅膠柱色譜分離，TLC反復鑒別并合并后，得到共4個流分Fr.F1～F4，F(xiàn)r.F2經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物12（2.7 mg，tR＝17.4 min）、16（3.5 mg，tR＝18.5 min）。Fr.G經正相硅膠柱色譜分離，TLC反復鑒別并合并后，得到共4個流分Fr.G1～G4，F(xiàn)r.G2經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物5（1.8 mg，tR＝19.9 min），F(xiàn)r.G3經ODS柱色譜分離，以甲醇-水（1∶9→1∶0）進行梯度洗脫，TLC反復鑒別并合并后，共得到4個流分Fr.G3-1～G3-4，其中，F(xiàn)r.G3-3經半制備型HPLC [甲醇-水（58∶42），5 mL/min]分離得到化合物10（1.4 mg，tR＝9.8 min）、4（3.6 mg，tR＝18.9 min）、13（3.3 mg，tR＝21.2 min）。Fr.H經正相硅膠柱色譜分離，TLC反復鑒別并合并后，得到共5個流分Fr.H1～H5，F(xiàn)r.H2經ODS柱色譜分離，以甲醇-水（1∶9→1∶0）進行梯度洗脫，TLC反復鑒別并合并后，共得到6個流分Fr.H2-1～H2-6，其中Fr.H2-3經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物1（3.9 mg，tR＝15.5 min）、2（8.1 mg，tR＝20.4 min）、3（14.4 mg，tR＝22.7 min），F(xiàn)r.H2-4經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物7（4.3 mg，tR＝14.1 min）、6（2.5 mg，tR＝17.2 min）、8（7.2 mg，tR＝20.8 min），F(xiàn)r.H2-5經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物9（3.4 mg，tR＝16.5 min）、11（1.4 mg，tR＝18.4 min）。

稱取95%乙醇洗脫組分（400 g），經硅膠柱色譜、用二氯甲烷-甲醇（100∶1→0∶1）進行梯度洗脫，得到的洗脫液濃縮后經過反復薄層色譜分析鑒別后合并，最終得到6個流分Fr.A～F。Fr.C經正相硅膠柱色譜分離，TLC反復鑒別并合并后，得到4個流分Fr.C1～C4，F(xiàn)r.C3經半制備型HPLC[甲醇-水（60∶40），5 mL/min]分離得到化合物23（1.6 mg，tR＝14.0 min）、22（14.1 mg，tR＝16.0 min），F(xiàn)r.C4經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物35（3.7 mg，tR＝6.4 min）、36（1.4 mg，tR＝17.1 min）。Fr.D經正相硅膠柱色譜分離，TLC反復鑒別并合并后，得到Fr.D1～D3共3個流分，F(xiàn)r.D2經ODS柱色譜分離，以甲醇-水（1∶9→1∶0）進行梯度洗脫，并經TLC反復鑒別并合并后，共得到7個流分Fr.D2-1～D2-7，其中Fr.D2-4經半制備型HPLC [甲醇-水（55∶45），5 mL/min]分離得到化合物25（4.3 mg，tR＝11.0 min）、24（1.0 mg，tR＝13.6 min）、21（8.7 mg，tR＝20.4 min）。

3 結構鑒定

化合物1：黃色無定形粉末（甲醇），分子式C15H12O7；HR-ESI-MSm/z: 327.047 2 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 6.98 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2′), 6.87 (1H, dd,J= 8.1, 2.0 Hz, H-6′), 6.82(1H, d,J= 8.1 Hz, H-5′), 5.94 (1H, d,J= 2.1 Hz,H-8), 5.90 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-6), 4.93 (1H, d,J=11.5 Hz, H-2), 4.52 (1H, d,J= 11.5 Hz, H-3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 198.4 (C-4), 168.7(C-7), 165.3 (C-5), 164.5 (C-9), 147.2 (C-4′), 146.3(C-3′), 129.9 (C-1′), 120.9 (C-6′), 116.1 (C-2′), 115.9(C-5′), 101.8 (C-10), 97.3 (C-6), 96.3 (C-8), 85.1(C-2), 73.7 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[6]，故鑒定化合物1為紫杉葉素。

化合物2：黃色無定形粉末（甲醇），分子式C15H14O6；HR-ESI-MSm/z: 313.068 2 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 6.84 (1H, d,J= 1.9 Hz, H-2′), 6.76 (1H, d,J= 8.1 Hz, H-5′), 6.72 (1H, dd,J= 8.1, 1.9 Hz, H-6′), 5.93 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-8),5.86 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-6), 4.57 (1H, d,J= 7.5 Hz,H-2), 3.98 (1H, m, H-3), 2.85 (1H, dd,J= 16.1, 5.4 Hz, H-4a), 2.51 (1H, dd,J= 16.1, 8.2 Hz, H-4b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 157.8 (C-5), 157.6(C-7), 156.9 (C-9), 146.2 (C-3′, 4′), 132.2 (C-1′),120.0 (C-6′), 116.1 (C-2′), 115.3 (C-5′), 100.8 (C-10),96.3 (C-6), 95.5 (C-8), 82.8 (C-2), 68.8 (C-3), 28.5(C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[7]，故鑒定化合物2為(＋)-兒茶素。

化合物3：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C21H20O10；HR-ESI-MSm/z:455.094 8 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ:7.76 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.93 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.37 (1H, brs, H-8), 6.20 (1H, d,J= 1.6 Hz, H-6), 5.37 (1H, d,J= 1.4 Hz, H-1′′), 4.21 (1H,brs, H-2′′), 3.70 (1H, dd,J= 9.0, 3.4 Hz, H-3′′), 3.32(2H, m, H-4′′, 5′′), 0.91 (3H, d,J= 5.6 Hz, H-6′′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 179.6 (C-4), 166.2(C-7), 163.2 (C-5), 161.6 (C-4′), 159.3 (C-9), 158.6(C-2), 136.2 (C-3), 131.9 (C-2′, 6′), 122.6 (C-1′),116.5 (C-3′, 5′), 105.8 (C-10), 103.5 (C-1′′), 99.9(C-6), 94.8 (C-8), 73.2 (C-4′′), 72.1 (C-3′′), 72.0(C-5′′), 71.9 (C-2′′), 17.6 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[8]，故鑒定化合物3為kaempferol-3-Oα-L-rhamnopyranoside。

化合物4：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C21H20O11；HR-ESI-MSm/z:471.089 6 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ:8.04 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.88 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.39 (1H, brs, H-8), 6.19 (1H, brs, H-6),5.25 (1H, d,J= 7.2 Hz, H-1′′), 3.68 (1H, dd,J= 11.8,2.0 Hz, H-6′′a), 3.52 (1H, dd,J= 11.8, 5.4 Hz, H-6′′b),3.43 (2H, m, H-3′′, 4′′), 3.27 (1H, m, H-2′′), 3.20 (1H,m, H-5′′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 179.5(C-4), 166.0 (C-7), 163.1 (C-5), 161.6 (C-4′), 159.1(C-9), 158.5 (C-2), 135.5 (C-3), 132.3 (C-2′, 6′), 122.8(C-1′), 116.1 (C-3′, 5′), 105.8 (C-10), 104.1 (C-1′′),99.9 (C-6), 94.8 (C-8), 78.4 (C-5′′), 78.1 (C-3′′), 75.8(C-2′′), 71.4 (C-4′′), 62.7 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[9]，故鑒定化合物4為紫云英苷。

化合物5：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C21H20O12；HR-ESI-MSm/z:487.084 7 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ:7.70 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-2′), 7.58 (1H, d,J= 8.6, 2.2 Hz, H-6′), 6.87 (1H, d,J= 8.6 Hz, H-5′), 6.39 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-8), 6.20 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-6), 5.25(1H, d,J= 7.5 Hz, H-1′′), 3.71 (1H, dd,J= 11.9, 2.3 Hz, H-6′′a), 3.57 (1H, dd,J= 11.9, 5.3 Hz, H-6′′b),3.47 (1H, m, H-2′′), 3.42 (1H, m, H-3′′), 3.34 (1H, m,H-4′′), 3.21 (1H, m, H-5′′)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 179.5 (C-4), 166.1 (C-7), 163.1 (C-5),159.0 (C-2), 158.5 (C-9), 149.9 (C-4′), 145.9 (C-3′),135.6 (C-3), 123.2 (C-1′), 123.1 (C-6′), 117.6 (C-5′),116.1 (C-2′), 105.7 (C-10), 104.3 (C-1′′), 99.9 (C-6),94.7 (C-8), 78.4 (C-5′′), 78.1 (C-3′′), 75.7 (C-2′′), 71.2(C-4′′), 62.6 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[9]，故鑒定化合物5為異槲皮苷。

化合物6：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C20H20O11；HR-ESI-MSm/z459.089 5 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ:7.01 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2′), 6.89 (1H, dd,J= 8.1,2.0 Hz, H-6′), 6.83 (1H, d,J= 8.1 Hz, H-5′), 5.93 (1H,d,J= 2.1 Hz, H-6), 5.91 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-8), 5.04(1H, d,J= 11.7 Hz, H-2), 4.89 (1H, d,J= 11.7 Hz,H-3), 4.24 (1H, m, H-4′′), 4.20 (1H, s, H-1′′), 3.88(1H, brs, H-2′′), 3.78 (1H, brs, H-3′′), 3.62 (2H, m,H-5′′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 197.6 (C-4),169.2 (C-7), 165.4 (C-5), 164.6 (C-9), 147.6 (C-4′),146.6 (C-3′), 129.2 (C-1′), 120.8 (C-6′), 116.3 (C-5′),115.7 (C-2′), 107.8 (C-1′′), 102.2 (C-10), 97.4 (C-6),96.5 (C-8), 88.9 (C-4′′), 83.9 (C-2), 81.1 (C-2′′), 79.2(C-3′′), 74.8 (C-3), 63.3 (C-5′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[6]，故鑒定化合物6為紫杉葉素-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷。

化合物7：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C21H22O12；HR-ESI-MSm/z489.100 2 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ:6.97 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2′), 6.84 (1H, dd,J= 8.2,2.0 Hz, H-6′), 6.78 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-5′), 5.92 (1H,d,J= 2.1 Hz, H-6), 5.90 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-8), 5.24(1H, d,J= 9.7 Hz, H-2), 4.94 (1H, d,J= 9.7 Hz, H-3),3.87 (1H, d,J= 7.7 Hz, H-1′′), 3.78 (1H, dd,J= 12.0,2.2 Hz, H-6′′b), 3.61 (1H, dd,J= 12.0, 5.9 Hz, H-6′′a),3.25 (2H, overlapped, H-2′′, 4′′), 3.13 (1H, t,J= 9.1 Hz, H-5′′) 3.00 (1H, m, H-3′′)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 195.9 (C-4), 169.0 (C-7), 165.5 (C-5),164.2 (C-9), 147.3 (C-3′), 146.4 (C-4′), 129.0 (C-1′),121.1 (C-6′), 116.2 (C-5′), 115.9 (C-2′), 102.6 (C-1′′),102.5 (C-10), 97.3 (C-8), 96.3 (C-6), 83.6 (C-2), 78.2(C-3′′), 77.6 (C-5′), 77.2 (C-3), 74.6 (C-2′′), 71.3 (C-4′′),62.6 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[10]，故鑒定化合物7為 (2R,3R)-(＋)-glucodistylin。

化合物8：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C21H22O12；HR-ESI-MSm/z:489.100 5 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ:6.96 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-2′), 6.80 (1H, dd,J= 8.2,1.8 Hz, H-6′), 6.76 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-5′), 5.90 (2H,m, H-6, 8), 5.26 (1H, d,J= 8.8 Hz, H-2), 4.86 (1H,overlapped, H-3), 4.68 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-1′′), 3.81(1H, m, H-6′′a), 3.58 (1H, m, H-6′′b), 3.20 (2H, m,H-4′′, 5′′), 3.14 (1H, t,J= 8.1 Hz, H-3′′) 3.10 (1H , m,H-2′′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 196.1 (C-4),169.1 (C-7), 165.6 (C-5), 164.1 (C-9), 147.0 (C-3′),146.0 (C-4′), 128.9 (C-1′), 121.1 (C-6′), 116.2 (C-5′),116.0 (C-2′), 104.6 (C-1′′), 102.3 (C-10), 97.3 (C-8),96.3 (C-6), 83.4 (C-2), 78.0 (C-3′′), 77.9 (C-5′′), 77.7(C-3), 75.4 (C-2′′), 71.5 (C-4′′), 62.8 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[10]，故鑒定化合物8為(2S,3S)-(-)-glucodistylin。

化合物9：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C26H28O16；HR-ESI-MSm/z:619.127 0 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ:7.63 (1H, d,J= 2.2 Hz, H-2′), 7.10 (1H, m, H-6′),6.87 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-5′), 6.39 (1H, d,J= 2.0 Hz,H-8), 6.20 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 5.51 (1H, d,J=7.5 Hz, H-1′′), 4.76 (1H, d,J= 6.9 Hz, H-1′′′), 3.93(1H, dd,J= 11.6, 5.0 Hz, H-5′′′a), 3.72 (2H, m, H-2′′,6′′a), 3.60 (1H, t,J= 8.9 Hz, H-3′′), 3.56 (1H, dd,J=12.1, 5.4 Hz, H-6′′b), 3.42 (4H, m, H-2′′′, 3′′′, 4′′, 4′′′),3.23 (2H, m, H-5′′, 5′′′b)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 179.6 (C-4), 165.8 (C-7), 163.2 (C-5),158.4 (C-9), 158.3 (C-2), 149.7 (C-4′), 146.0 (C-3′),135.1 (C-3), 123.4 (C-6′), 123.2 (C-1′), 117.3 (C-2′),116.0 (C-5′), 105.8 (C-10), 105.4 (C-1′′′), 100.8(C-1′′), 99.7 (C-6), 94.5 (C-8), 82.3 (C-2′′), 78.4(C-3′′), 78.2 (C-5′′), 77.0 (C-3′′′), 74.9 (C-2′′′), 71.1(C-4′′), 71.0 (C-4′′′), 66.6 (C-5′′′), 62.4 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[11]，故鑒定化合物9為quercetin 3-O-β-D-xylopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside。

化合物10：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C28H32O16；HR-ESI-MSm/z:647.158 1 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 7.96 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-2′), 7.57 (1H, dd,J= 8.3,2.0 Hz, H-6′), 6.95 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-5′), 6.85 (1H,d,J= 2.1 Hz, H-8), 6.46 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-6), 5.58(1H, d,J= 7.5 Hz, H-1′′), 5.57 (1H, s, H-1′′′), 3.85(3H, s, H-3′-OCH3), 3.85 (1H, overlapped, H-2′′′),3.64 (1H, m, H-3′′′), 3.55 (1H, m, H-6′′a), 3.18～3.45(8H, m, H-2′′, 2′′′, 3′′, 4′′, 4′′′, 5′′, 5′′′, 6′′b), 1.12 (3H,d,J= 6.2 Hz, H-6′′′)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 178.1 (C-4), 162.1 (C-7), 161.4 (C-5), 157.3 (C-2),156.4 (C-9), 150.1 (C-3′), 147.4 (C-4′), 133.8 (C-3),122.8 (C-6′), 121.4 (C-1′), 115.7 (C-5′), 113.9 (C-2′),106.1 (C-10), 101.2 (C-1′′), 99.8 (C-6), 98.8 (C-1′′′),95.0 (C-8), 78.0 (C-5′′), 76.9 (C-3′′), 74.8 (C-2′′), 72.1(C-4′′′), 70.7 (C-3′′′), 70.5 (C-2′′′), 70.3 (C-4′′, 5′′′),61.1 (C-6′′), 56.2 (3′-OCH3), 18.4 (C-6′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的基本一致[12]，故鑒定化合物10為異鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷。

化合物11：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C21H20O10；HR-ESI-MSm/z:455.094 3 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ:7.89 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.93 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.82 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-8), 6.66 (1H,s, H-3), 6.50 (1H, d,J= 2.1 Hz, H-6), 5.06 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1′′), 3.93 (1H, dd,J= 12.1, 2.1 Hz, H-6′′a),3.71 (1H, dd,J= 12.1, 5.8 Hz, H-6′′b), 3.54 (1H , m,H-5′′), 3.48 (2H, m, H-2′′, 3′′), 3.40 (1H, m, H-4′′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 184.1 (C-4), 166.8(C-2), 164.8 (C-7), 162.9 (C-4′, 5), 159.0 (C-9), 129.7(C-2′, 6′), 123.0 (C-1′), 117.1 (C-3′, 5′), 107.0 (C-10),104.1 (C-3), 101.6 (C-1′′), 101.2 (C-6), 96.0 (C-8),78.4 (C-5′′), 77.8 (C-3′′), 74.7 (C-2′′), 71.2 (C-4′′),62.4 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[13]，故鑒定化合物11為芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物12：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C22H22O11；HR-ESI-MSm/z:485.105 2 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 7.45 (1H, d,J= 1.7 Hz, H-2′), 7.44 (1H, dd,J= 8.4,1.7 Hz, H-6′), 6.89 (1H, d,J= 8.4 Hz, H-5′), 6.78 (1H,d,J= 1.9 Hz, H-6), 6.74 (1H, s, H-3), 6.43 (1H, d,J=1.9 Hz, H-8), 5.07 (1H, d,J= 7.5 Hz, H-1′′), 3.19～3.71 (6H, m, H-2′′～6′′), 3.38 (3H, overlapped,4′-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 182.4(C-4), 165.0 (C-7), 163.4 (C-5), 161.6 (C-2), 157.4(C-9), 150.5 (C-4′), 146.3 (C-3′), 121.8 (C-1′), 119.6(C-6′), 116.4 (C-5′), 114.0 (C-2′), 105.8 (C-10), 103.6(C-3), 100.3 (C-1′′), 100.0 (C-6), 95.2 (C-8), 77.6(C-5′′), 76.9 (C-3′′), 73.6 (C-2′′), 70.0 (C-4′′), 61.1(C-6′′), 49.1 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[14]，故鑒定化合物12為香葉木素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物13：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C23H22O12；HR-ESI-MSm/z:513.100 2 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 7.45 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-6′), 7.43 (1H, brs, H-2′),6.91 (1H, d,J= 8.3 Hz, H-5′), 6.77 (1H, d,J= 1.9 Hz,H-8), 6.75 (1H, brs, H-3), 6.44 (1H, d,J= 1.9 Hz,H-6), 5.12 (1H, d,J= 7.4 Hz, H-1′′), 4.35 (1H, d,J=11.2 Hz, H-6′′b), 4.05 (1H, dd,J= 11.2, 7.4 Hz,H-6′′a), 3.29～3.76 (4H, m, H-2′′～5′′), 2.01 (3H, s,6′′-COOCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ:182.4 (C-4), 170.7 (6′′-CO), 164.9 (C-7), 163.1 (C-2),161.6 (C-5), 157.4 (C-9), 150.5 (C-4′), 146.3 (C-3′),121.8 (C-1′), 119.6 (C-6′), 116.4 (C-5′), 114.0 (C-2′),105.9 (C-10), 103.6 (C-3), 100.0 (C-1′′, 6), 95.2 (C-8),76.6 (C-3′′), 74.3 (C-2′′), 73.5 (C-5′′), 70.3 (C-4′′),63.8 (C-6′′), 21.1 (6′′-COOCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的基本一致[15]，故鑒定化合物13為木犀草素7-O-β-D-(6′′-乙?；?-吡喃葡萄糖苷。

化合物14：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C21H20O11；HR-ESI-MSm/z:471.089 7 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ:7.88 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-2′, 6′), 7.01 (1H, s, H-8),6.92 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-3′, 5′), 6.63 (1H, s, H-3),5.06 (1H, d,J= 7.4 Hz, H-1′′), 3.98 (1H, overlapped,H-6′′a), 3.71 (1H, dd,J= 12.0, 6.0 Hz, H-6′′b), 3.41～3.60 (4H, m, H-2′′～5′′)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 184.4 (C-4), 166.8 (C-2), 162.8 (C-4′),152.8 (C-7), 151.3 (C-9), 147.9 (C-5), 131.8 (C-6),129.6 (C-2′, 6′), 123.3 (C-1′), 117.0 (C-3′, 5′), 107.4(C-10), 103.5 (C-3), 102.6 (C-1′′), 95.8 (C-8), 78.6(C-5′′), 77.5 (C-3′′), 74.7 (C-2′′), 71.4 (C-4′′), 62.5(C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[16]，故鑒定化合物14為plantaginin。

化合物15：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C27H32O17；HR-ESI-MSm/z:651.153 0 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 7.45 (1H, dd,J=8.4, 1.8 Hz, H-6′), 7.43 (1H, brs,H-2′), 6.91 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-5′), 6.80 (1H, d,J=1.8 Hz, H-8), 6.72 (1H, s, H-3), 6.50 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-6), 5.09 (1H, d,J= 7.3 Hz, H-1′′), 4.18 (1H, d,J= 7.7 Hz, H-1′′′), 3.98 (1H, d,J= 10.6 Hz, H-6′′′a),3.12～3.71 (11H, m, H-2′′, 2′′′, 3′′, 3′′′, 4′′, 4′′′, 5′′, 5′′′,6′′, 6′′′b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 182.4(C-4), 165.0 (C-2), 163.4 (C-7), 161.6 (C-5), 157.4(C-9), 150.5 (C-4′), 146.2 (C-3′), 121.8 (C-1′), 119.7(C-6′), 116.5 (C-5′), 114.1 (C-2′), 105.8 (C-10), 104.0(C-1′′′), 103.6 (C-3), 100.3 (C-1′′), 100.1 (C-6), 95.2(C-8), 77.5 (C-3′′), 77.2 (C-3′′′), 76.7 (C-5′′′), 75.9(C-5′′), 74.0 (C-2′′′), 73.6 (C-2′′), 70.6 (C-4′′′), 69.8(C-4′′), 69.0 (C-6′′), 61.5 (C-6′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[17]，故鑒定化合物15為木犀草素-7-O-β-D-龍膽二糖苷。

化合物16：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C27H30O13；HR-ESI-MSm/z:585.157 7 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ:8.29 (1H, s, H-2), 8.18 (1H, d,J= 8.9 Hz, H-5), 7.52(2H, d,J= 8.7 Hz, H-2′, 6′), 7.39 (1H, d,J= 2.2 Hz,H-8), 7.26 (1H, dd,J= 8.9, 2.2 Hz, H-6), 7.01 (2H, d,J= 8.7 Hz, H-3′, 5′), 5.07 (1H, d,J= 7.3 Hz, H-1′′),4.36 (1H, d,J= 7.3 Hz, H-1′′′), 4.15 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-5′′′a), 3.91 (1H, dd,J= 11.5, 5.3 Hz, H-6′′a),3.84 (3H, s, 4′-OCH3), 3.80 (2H, m, H-5′′, 5′′′b), 3.54(3H, m, H-2′′～4′′), 3.36 (3H, m, H-2′′′～4′′′), 3.15(1H, m, H-6′′b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ:178.0 (C-4), 163.4 (C-7), 161.2 (C-4′), 159.3 (C-9),155.3 (C-2), 131.4 (C-2′, 6′), 128.3 (C-5), 125.9 (C-3),125.4 (C-1′), 120.2 (C-10), 117.2 (C-6), 114.9 (C-3′,5′), 105.8 (C-1′′′), 105.1 (C-8), 101.8 (C-1′′), 77.8(C-3′′′), 77.7 (C-3′′), 77.4 (C-5′′), 75.1 (C-2′′), 74.7(C-2′′′), 71.7 (C-4′′′), 71.1 (C-4′′), 70.6 (C-5′′′), 66.9(C-6′′), 55.7 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的基本一致[18]，故鑒定化合物 16為 7-Oprimverosylformononetin。

化合物17：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C27H30O17；HR-ESI-MSm/z:649.138 8 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 7.29 (1H, s, H-6′), 7.09 (1H, s, H-3), 6.77 (1H, s,H-3′), 6.71 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-8), 6.42 (1H, d,J=1.8 Hz, H-6), 5.08 (1H, d,J= 7.6 Hz, H-1′′), 4.89 (1H,brs, H-1′′′), 3.15～3.70 (12H, m, H-2′′, 2′′′, 3′′, 3′′′, 4′′,4′′′, 5′′, 5′′′, 6′′, 6′′′)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 182.6 (C-4), 163.3 (C-7), 162.1 (C-2), 161.6 (C-5),157.5 (C-9), 150.8 (C-2′, 4′), 140.8 (C-5′), 115.0(C-6′), 110.6 (C-1′), 109.3 (C-3), 105.7 (C-10), 104.4(C-3′), 101.6 (C-1′′′), 100.3 (C-1′′), 99.7 (C-6), 94.9(C-8), 77.6 (C-5′′, 5′′′), 77.2 (C-3′′′), 76.8 (C-3′′), 73.8(C-2′′′), 73.6 (C-2′′), 70.0 (C-4′′), 69.9 (C-4′′′), 61.1(C-6′′′), 61.0 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的基本一致[19]，故鑒定化合物 17 為 isoetin-7-O-β-Dglucopyranosyl-2′-O-α-D-glucopyranoside。

化合物18：黃色無定形粉末（甲醇），Molish反應呈陽性，分子式C30H26O13；HR-ESI-MSm/z:617.126 5 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ:7.98 (2H, d,J= 9.0 Hz, H-2′, 6′), 7.39 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-7′′′), 7.30 (2H, d,J= 8.9 Hz, H-2′′′, 6′′′), 6.81(2H, d,J= 9.0 Hz, H-3′, 5′), 6.79 (2H, d,J= 8.9 Hz,H-3′′′, 5′′′), 6.30 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-8), 6.13 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-6), 6.06 (1H, d,J= 15.9 Hz, H-8′′′),5.23 (1H, d,J= 7.4 Hz, H-1′′), 4.29 (1H, d,J= 11.8,2.1 Hz, H-6′′b), 4.18 (1H, dd,J= 11.8, 6.6 Hz, H-6′′a),3.31～3.50 (4H, m, H-2′′～5′′)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 179.4 (C-4), 168.8 (C-9′′′), 166.0 (C-7),163.0 (C-5), 161.5 (C-4′), 161.2 (C-4′′′), 159.4 (C-2),158.4 (C-9), 146.6 (C-7′′′), 135.2 (C-3), 132.2 (C-2′,6′), 131.2 (C-2′′′, 6′′′), 127.1 (C-1′′′), 122.7 (C-1′),116.8 (C-3′, 5′), 116.0 (C-3′′′, 5′′′), 114.8 (C-8′′′),105.6 (C-10), 104.0 (C-1′′), 100.0 (C-6), 94.8 (C-8),78.0 (C-3′′), 75.8 (C-2′′), 75.7 (C-5′′), 71.7 (C-4′′),64.3 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[9]，故鑒定化合物18為銀鍛苷。

化合物19：黃色無定形粉末（甲醇），分子式C13H8O6；HR-ESI-MSm/z: 283.021 3 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 7.37 (2H, s, H-4,5), 6.80 (2H, s, H-1, 8)；13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)δ: 174.1 (C-9), 153.2 (C-2, 7), 151.2 (C-1a,8a), 143.7 (C-3, 6), 113.6 (C-4a, 5a), 109.1 (C-4, 5),103.0 (C-1, 8)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[20]，故鑒定化合物19為2,3,6,7-tetrahydroxyxanthone。

化合物20：黃色無定形粉末（甲醇），分子式C13H8O6；HR-ESI-MSm/z: 283.021 1 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 7.48 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-4), 7.40 (1H, s, H-5), 6.91 (1H, s, H-8), 6.87(1H, d,J= 8.5 Hz, H-3)；13C-NMR (150 MHz DMSO-d6)δ: 174.8 (C-9), 153.4 (C-7), 151.2 (C-8a),150.8 (C-2), 146.8 (C-1a), 143.8 (C-6), 132.8 (C-1),116.5 (C-4), 114.9 (C-4a), 113.7 (C-5a), 113.0 (C-3),109.4 (C-5), 103.2 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[20]，故鑒定化合物20為1,2,6,7-tetrahydroxyxanthone。

化合物21：白色無定形粉末（甲醇），分子式C17H17NO3；HR-ESI-MSm/z: 306.110 1 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.44 (1H, d,J= 15.6 Hz, H-8), 7.39 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-2, 6), 7.04 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.78 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-3, 5),6.71 (2H, d,J= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.38 (1H, d,J= 15.6 Hz, H-7), 3.45 (2H, t,J= 7.2 Hz, H-8′), 2.75 (2H, t,J= 7.2 Hz, H-7′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ:169.2 (C-9), 160.5 (C-4), 157.0 (C-4′), 141.8 (C-7),131.3 (C-1′), 130.7 (C-2, 6), 130.6 (C-2′, 6′), 127.7(C-1), 118.4 (C-8), 116.7 (C-3, 5), 116.3 (C-3′, 5′),42.6 (C-8′), 35.8 (C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[21]，故鑒定化合物21為N-反式-對-香豆?；野?。

化合物22：白色無定形粉末（甲醇），分子式C17H17NO4；HR-ESI-MSm/z: 322.106 8 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 7.46 (1H, d,J= 15.7 Hz, H-3), 7.40 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-5, 9), 7.23 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-4′, 8′), 6.79 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-6, 8),6.78 (2H, d,J= 8.5 Hz, H-5′, 7′), 6.44 (1H, d,J= 15.7 Hz, H-2), 4.73 (1H, dd,J= 8.0, 4.9 Hz, H-2′), 3.53(1H, dd,J= 13.6, 4.9 Hz, H-1′a), 3.44 (1H, dd,J=13.6, 8.0 Hz, H-1′b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ:169.6 (C-1), 160.5 (C-6′), 158.1 (C-7), 142.0 (C-3),134.7 (C-3′), 130.6 (C-5, 9), 128.5 (C-4′, 8′), 127.7(C-4), 118.3 (C-2), 116.7 (C-6, 8), 116.1 (C-5′, 7′),73.5 (C-2′), 48.4 (C-1′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[21]，故鑒定化合物22為N-反式-對-香豆?；卖~胺。

化合物23：白色無定形粉末（甲醇），分子式C22H36N4O6；HR-ESI-MSm/z: 475.252 5 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 5.71 (2H, d,J= 1.0 Hz, H-8, 8′), 3.98 (2H, t,J= 5.5 Hz, H-2, 2′), 3.68(4H, t,J= 6.6 Hz, H-11, 11′), 3.22 (4H, m, H-5, 5′),2.31 (4H, t,J= 6.6 Hz, H-10, 10′), 2.11 (6H, brs,H-13, 13′), 1.84 (4H, m, H-3, 3′), 1.60 (4H, m, H-4,4′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 170.4 (C-1, 1′),169.7 (C-7, 7′), 151.6 (C-9, 9′), 120.9 (C-8, 8′), 60.8(C-11, 11′), 55.7 (C-2, 2′), 44.6 (C-10, 10′), 39.5 (C-5,5′), 32.7 (C-3, 3′), 26.0 (C-4, 4′), 18.5 (C-13, 13′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[22]，故鑒定化合物23為eleutherazine B。

化合物24：白色無定形粉末（甲醇），分子式C13H14N2O2；HR-ESI-MSm/z: 253.094 6 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.48 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-9), 7.34 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-12), 7.13 (1H, m,H-11), 7.04 (1H, m, H-10), 4.71 (1H, m, H-3), 3.97(1H, dd,J= 12.1, 5.0 Hz, H-5), 3.44 (1H, dd,J= 16.3,4.0 Hz, H-6a), 3.02 (1H, m, H-6b), 1.75 (3H, d,J=6.8 Hz, 3-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ:173.6 (5-COOH), 138.6 (C-13), 131.3 (C-2), 127.5(C-8), 123.3 (C-11), 120.6 (C-10), 119.2 (C-9), 112.3(C-12), 107.8 (C-7), 59.8 (C-5), 51.2 (C-3), 24.3 (C-6),17.1 (3-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[23]，故鑒定化合物 24為 1,2,3,4-tetrahydro-1-methyl-βcarboline-3-carboxylic acid。

化合物25：白色無定形粉末（甲醇），分子式C11H9NO2；HR-ESI-MSm/z: 210.052 5 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.69 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-5), 7.36 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-8), 7.19 (1H, s,H-4), 7.11 (1H, m, H-7), 7.04 (1H, m, H-6), 3.86 (1H,dd,J= 9.4, 3.8 Hz, H-9a), 3.52 (1H, dd,J= 15.2, 3.8 Hz, H-9b), 3.15 (1H, dd,J= 15.2, 9.4 Hz, H-9a)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 174.4 (C-3), 138.4(C-8a), 128.5 (C-4a), 125.2 (C-8), 122.8 (C-7), 120.1(C-6), 119.4 (C-5), 112.4 (C-4), 109.6 (C-3a), 56.7(C-9a), 28.5 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[24]，故鑒定化合物25為naphthisoxazol A。

化合物26：白色無定形粉末（甲醇），分子式C13H10N2O2；HR-ESI-MSm/z: 249.063 3 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 8.40 (1H, d,J= 5.0 Hz, H-3), 8.29 (1H, d,J= 5.0 Hz, H-4), 8.20 (1H, d,J= 7.9 Hz, H-5), 7.70 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-6), 7.60(1H, t,J= 7.4 Hz, H-8), 7.30 (1H, t,J= 7.4 Hz, H-7),4.10 (3H, s, 1-COOCH3)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 167.3 (1-CO), 143.3 (C-1), 138.8 (C-3),137.8 (C-13), 133.6 (C-10), 130.7 (C-12), 130.5 (C-6),122.8 (C-5), 121.7 (C-7), 121.6 (C-11), 119.9 (C-4),113.4 (C-8), 53.0 (1-COOCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[25]，故鑒定化合物26為1-甲氧甲酰-β-咔巴啉。

化合物27：白色無定形粉末（甲醇），分子式C19H18N2O2；HR-ESI-MSm/z: 329.125 8 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 7.49 (1H, d,J= 8.0 Hz, H-5), 7.33 (4H, m, H-3′, 4′, 5′, 8), 7.22 (2H, m,H-2′, 6′), 7.15 (1H, m, H-7), 7.06 (1H, m, H-6), 5.15(1H, t,J= 6.4 Hz, H-1), 3.88 (1H, dd,J= 8.6, 5.9 Hz,H-3), 3.55 (1H, dd,J= 14.4, 5.6 Hz, H-7′a), 3.34 (1H,m, H-7′b), 3.28 (1H, m, H-4a), 3.16 (1H, dd,J= 16.0,8.0 Hz, H-4b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 173.0(3-COOH), 138.4 (C-10), 136.2 (C-1′), 130.6 (C-2′,6′), 130.2 (C-3′, 5′), 129.5 (C-13), 128.8 (C-4′), 127.5(C-11), 123.5 (C-7), 120.5 (C-6), 119.2 (C-5), 112.3(C-8), 107.9 (C-12), 55.7 (C-3), 54.1 (C-1), 39.6(C-7′), 23.4 (C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[26]，故鑒定化合物27為1-benzyl-2,3,4,9-tetrahydro-1Hpyrido[3,4-b]indole-3-carboxylic acid。

化合物28：白色無定形粉末（甲醇），分子式C9H11NO，HR-ESI-MSm/z: 172.073 1 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.23～7.39 (5H, m,H-2′, 3′, 4′, 5′, 6′), 5.25 (1H, s, H-1), 1.66 (3H, s,H-3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 159.9 (C-2),142.3 (C-1′), 129.3 (C-3′, 5′), 128.5 (C-4′), 127.0(C-2′, 6′), 75.7 (C-1), 9.2 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[27]，故鑒定化合物28為 (±)-1-phenyl-2-imido-1-propanol。

化合物29：白色無定形粉末（甲醇），分子式C12H17NO2；HR-ESI-MSm/z: 230.115 0 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.30～7.39 (5H, m,H-2～6), 4.62 (1H, d,J= 8.4 Hz, H-7), 3.99 (1H, m,H-8), 2.82 (3H, s, H-12), 1.72 (3H, s, H-10), 1.42 (3H,d,J= 6.7 Hz, H-11)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ:173.3 (C-9), 144.1 (C-1), 129.1 (C-3, 5), 128.5 (C-4),127.5 (C-2, 6), 76.4 (C-7), 61.1 (C-8), 28.7 (C-12),21.2 (C-10), 15.4 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[28]，故鑒定化合物 29為(1S,2R)-Nacetylephedrine。

化合物30：白色無定形粉末（甲醇），分子式C12H17NO2；HR-ESI-MSm/z: 230.115 0 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.30～7.39 (5H, m,H-2～6), 4.72 (1H, d,J= 6.8 Hz, H-7), 4.68 (1H, m,H-8), 2.90 (3H, s, H-12), 1.91 (3H, s, H-10), 1.25 (3H,d,J= 6.8 Hz, H-11)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ:173.2 (C-9), 144.0 (C-1), 129.3 (C-3, 5), 128.9 (C-4),127.4 (C-2, 6), 77.0 (C-7), 56.5 (C-8), 32.7 (C-12),22.1 (C-10), 15.4 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的基本一致[28]，故鑒定化合物 30為(1R,2S)-Nacetylephedrine。

化合物31：白色無定形粉末（甲醇），分子式C11H15NO2；HR-ESI-MSm/z: 216.099 1 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 8.00 (1H, s, H-9),7.33～7.40 (5H, m, H-2～6), 4.59 (1H, d,J= 8.1 Hz,H-7), 3.77 (1H, m, H-8), 2.86 (3H, s, H-10), 1.07 (3H,d,J= 6.9 Hz, H-11)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ:166.0 (C-9), 143.5 (C-1), 129.5 (C-3, 5), 129.0 (C-4),127.9 (C-2, 6), 75.6 (C-7), 61.5 (C-8), 26.3 (C-10),15.8 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[29]，故鑒定化合物31為(1S,2R)-N-formylephedrine。

化合物32：白色無定形粉末（甲醇），分子式C11H15NO2；HR-ESI-MSm/z: 216.099 1 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 8.04 (1H, s, H-9),7.27～7.29 (5H, m, H-2, 3, 4, 5, 6), 4.68 (1H, d,J=8.8 Hz, H-7), 4.53 (1H, m, H-8), 2.97 (3H, s, H-10),0.96 (3H, d,J= 6.9 Hz, H-11)；13C-NMR (CD3OD,100 MHz)δ:165.9 (C-9), 143.5 (C-1), 129.4 (C-3, 5),129.0 (C-4), 128.2 (C-2, 6), 75.4 (C-7), 54.7 (C-8),31.3 (C-10), 14.3 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的基本一致[29]，故鑒定化合物 32為 (1R,2S)-Nformylephedrine。

化合物33：白色無定形粉末（甲醇），分子式C5H6N2O2；HR-ESI-MSm/z: 149.032 7 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 7.24 (1H, d,J= 1.0 Hz, H-6), 1.87 (3H, d,J= 1.0 Hz, 5-CH3)；13C-NMR(150 MHz, CD3OD)δ: 167.4 (C-4), 153.7 (C-2), 139.1(C-6), 110.4 (C-5), 12.1 (5-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[30]，故鑒定化合物33為胸腺嘧啶。

化合物34：白色無定形粉末（甲醇），分子式C10H14N2O5；HR-ESI-MSm/z: 265.080 0 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.81 (1H, d,J= 1.2 Hz, H-4), 6.28 (1H, t,J= 7.0 Hz, H-1′), 4.39 (1H, m,H-3′), 3.90 (1H, dt,J= 3.4, 3.4 Hz, H-4′), 3.79 (1H,dd,J= 12.0, 3.2 Hz, H-5′b), 3.72 (1H, dd,J= 12.0,3.7 Hz, H-5′a), 2.23 (2H, m, H-2′), 1.88 (3H, brs,3-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 166.4 (C-2),152.4 (C-6), 138.2 (C-4), 111.5 (C-3), 88.8 (C-4′),86.3 (C-1′), 72.2 (C-3′), 62.8 (C-5′), 41.2 (C-2′), 12.4(3-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[31]，故鑒定化合物34為脫氧胸腺嘧啶核苷。

化合物35：白色無定形粉末（甲醇），分子式C10H14N6O4；HR-ESI-MSm/z: 305.096 8 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 7.96 (1H, s, H-5),5.83 (1H, d,J= 5.6 Hz, H-1′), 4.60 (1H, t,J= 5.6 Hz,H-2′), 4.30 (1H, dd,J= 5.0, 3.4 Hz, H-3′), 4.10 (1H,dt,J= 3.0, 3.0 Hz, H-4′), 3.85 (1H, dd,J= 12.2, 3.0 Hz, H-5′b), 3.74 (1H, dd,J= 12.2, 3.2 Hz, H-5′a)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 159.4 (C-1), 155.2(C-2), 152.5 (C-3), 138.6 (C-5), 118.6 (C-4), 90.2(C-1′), 87.3 (C-4′), 75.5 (C-2′), 72.3 (C-3′), 63.2(C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的基本一致[32]，故鑒定化合物35為2-氨基腺苷。

化合物36：白色無定形粉末（甲醇），分子式C9H7NO；HR-ESI-MSm/z: 168.041 8 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 9.89 (1H, s, H-8),8.16 (1H, d,J= 7.6 Hz, H-4), 8.10 (1H, s, H-2), 7.48(1H, d,J= 8.0 Hz, H-7), 7.28 (1H, t,J= 8.0 Hz, H-6),7.24 (1H, t,J= 7.6 Hz, H-5)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 187.4 (C-8), 139.7 (C-2), 138.9 (C-7a),125.7 (C-3a), 125.0 (C-4), 123.6 (C-6), 122.4 (C-5),120.1 (C-3), 113.1 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的基本一致[33]，故鑒定化合物36為3-吲哚甲醛。

化合物37：白色無定形粉末（甲醇），分子式C9H11NO2；HR-ESI-MSm/z: 188.068 2 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 7.31～7.36 (4H, m,H-1, 2, 4, 5), 7.28 (1H, t,J= 7.1 Hz, H-3), 3.78 (1H,dd,J= 8.9, 4.3 Hz, H-8), 3.34 (1H, overlapped, H-7a),3.00 (1H, dd,J= 14.5, 8.9 Hz, H-7b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 173.7 (C-9), 137.3 (C-6), 130.4(C-1, 5), 130.0 (C-2, 4), 128.4 (C-3), 57.6 (C-8), 38.2(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的基本一致[34]，故鑒定化合物37為L-苯丙氨酸。

化合物38：白色無定形粉末（甲醇），分子式C12H14N2O3；HR-ESI-MSm/z: 257.089 5 [M＋Na]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ: 7.33 (1H, m, H-5),7.26 (1H, td,J= 7.7, 1.0 Hz, H-7), 7.07 (1H, td,J=7.7, 1.0 Hz, H-6), 6.89 (1H, d,J= 7.7 Hz, H-8),3.15 (2H, m, H-11), 2.11 (2H, m, H-10), 1.83 (3H, s,H-2′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 181.7 (C-2),173.0 (C-1′), 142.7 (C-9), 132.5 (C-4), 130.6 (C-7),125.2 (C-5), 123.7 (C-6), 111.4 (C-8), 76.5 (C-3),37.9 (C-10), 35.6 (C-11), 22.4 (C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[35]，故鑒定化合物38為bacilsubteramide A。

化合物39：白色無定形粉末（甲醇），分子式C27H28N2O4；HR-ESI-MSm/z: 467.194 0 [M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.71 (2H, m, H-2′,6′), 7.52 (1H, m, H-4′), 7.43 (2H, m, H-3′, 5′), 7.22～7.26 (4H, m, H-2′′′, 3′′′, 5′′′, 6′′′), 7.07～7.19 (6H, m,H-2′′～6′′, 4′′′), 4.78 (1H, dd,J= 8.4, 6.8 Hz, H-7),4.30 (1H, m, H-4), 3.97 (1H, dd,J= 11.2, 4.4 Hz,H-3a), 3.90 (1H, dd,J= 11.2, 6.0 Hz, H-3b), 3.12 (1H,dd,J= 13.6, 6.8 Hz, H-10a), 2.98 (1H, dd,J= 13.6,8.4 Hz, H-10b), 2.81 (2H, dd,J= 7.9, 6.8 Hz, H-11),2.00 (3H, s, H-1)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ:173.3 (C-2), 172.6 (C-6), 169.9 (C-9), 138.9 (C-1′′),138.5 (C-1′′′), 135.3 (C-1′), 132.8 (C-4′), 130.4 (C-3′′′,5′′′), 130.3 (C-3′′, 5′′), 129.5 (C-2′′, 4′′, 6′′), 128.5(C-2′, 2′′, 6′, 6′′), 127.8 (C-3′, 5′), 127.5 (C-4′′′), 66.1(C-3), 56.6 (C-5), 51.2 (C-4), 39.0 (C-10), 38.0 (C-11),20.8 (C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[36]，故鑒定化合物39為金色酰胺醇酯。

4 體外抗炎活性

首先，通過采用MTT法，檢測所得化合物對RAW264.7細胞的細胞毒活性，發(fā)現(xiàn)在濃度為1～50 μmol/L時，各化合物吸光度（A）值與空白組相比并無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），所測化合物對RAW264.7細胞均無細胞毒性作用。

根據(jù)細胞毒性結果，采用Griess法[5]，檢測所得化合物對脂多糖（LPS）誘導的RAW264.7細胞的NO生成的影響，取對數(shù)生長期的RAW264.7細胞，制備成密度為1×105個/mL的單細胞懸液，以每孔100 μL接種于96孔板中，每組3個復孔，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜（37 ℃、5% CO2）。待細胞完全貼壁后，棄去培養(yǎng)基，分別給予各實驗組以LPS及藥物處理，實驗分為對照組（不含藥物細胞培養(yǎng)基）、給藥組（含有終濃度為5、10、20、30、40、50 μmol/L化合物的細胞培養(yǎng)基）、陽性藥N-monomethyl-Larginine（L-NMMA）組（含有陽性L-NMMA的細胞培養(yǎng)基）、LPS組（含有LPS的細胞培養(yǎng)基）。培養(yǎng)24 h后，取上清100 μL轉至另一干凈96孔板中，分別加入50 μL Griess試劑A液和B液（A液：稱取0.5 g對氨基苯磺酸，溶于150 mL 10%稀醋酸中；B液：稱取0.1 gN-α-萘乙二胺，溶于20 mL純凈水中，再用10%稀醋酸稀釋至150 mL），避光顯色30 min，于酶標儀570 nm下檢測各孔A值。計算其抑制率。

抑制率＝(ALPS－A藥物)/(ALPS－A對照)

結果（表1）顯示，化合物3、5、8～11、13～15、17、18、21～27、35、36、39對LPS誘導的RAW264.7細胞的NO分泌展現(xiàn)出了較為顯著的抑制作用。

表1 化合物1～39對LPS刺激RAW264.7細胞NO生成的抑制率 (±s , n=3)Table 1 NO inhibition of compounds 1—39 on LPS-induced RAW264.7 (±s , n=3)

表1 化合物1～39對LPS刺激RAW264.7細胞NO生成的抑制率 (±s , n=3)Table 1 NO inhibition of compounds 1—39 on LPS-induced RAW264.7 (±s , n=3)

化合物 IC50/(μmol·L-1) 化合物 IC50/(μmol·L-1) 化合物 IC50/(μmol·L-1)L-NMMA 14.77±1.50 14 21.38±0.71 28 ＞50 1 ＞50 15 21.19±0.64 29 ＞50 2 ＞50 16 ＞100 30 ＞50 3 42.89±2.35 17 25.57±1.95 31 ＞50 4 ＞50 18 28.33±1.29 32 ＞50 5 39.11±3.58 19 ＞50 33 ＞50 6 ＞50 20 ＞50 34 ＞50 7 ＞50 21 41.08±0.59 35 23.39±2.45 8 32.31±4.23 22 37.07±1.76 36 41.47±2.96 9 39.68±2.86 23 24.68±1.90 37 ＞50 10 42.08±3.98 24 41.00±1.47 38 ＞100 11 38.67±1.59 25 42.38±2.89 39 23.79±1.72 12 ＞100 26 42.60±1.88 13 42.89±1.52 27 37.15±1.61

5 討論

洋金花葉中含有豐富的黃酮類和生物堿類成分，且其中有23個化合物首次從茄科中分離得到，10個化合物首次從曼陀羅屬中分離得到。通過對黃酮類和生物堿類成分的生物活性進行測定后，發(fā)現(xiàn)黃酮類和生物堿類都具有一定的抗炎活性，且黃酮類化合物（1～20）的抗炎活性強于生物堿類（21～39），其中黃酮類化合物的黃酮醇苷類化合物（3～18）較其苷元類（1、2、19、20）的抗炎活性強；連接2個糖的黃酮苷（9、10、15、17）較連接1個糖的黃酮苷（3～8、11～13）活性強，可推測黃酮類化合物的抗炎活性與糖的個數(shù)相關。當然，由于樣本量較少，該結論還需進一步證實。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突