改良涂片法復(fù)核血小板計(jì)數(shù)減少

關(guān)麗君

遼寧省沈陽市婦嬰醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧沈陽 110011

血小板是血液有形成分之一，是出血后止凝血的重要參與者，因此，快速而準(zhǔn)確地判定血小板減少可為臨床診治血小板減少相關(guān)疾病提供有利幫助。目前，臨床上計(jì)數(shù)血小板的方法主要有血小板電阻抗法(PLT-I)、血小板光學(xué)法(PLT-O)、血小板熒光法(PLT-F)及顯微鏡法(PLT-M)[1]。前3種都屬于儀器法，具有重復(fù)性好、檢測速度快、精密度高等優(yōu)點(diǎn)，但是當(dāng)儀器檢測血小板出現(xiàn)異常血小板的情況時(shí)，各計(jì)數(shù)方法間差異較大，仍需使用PLT-M進(jìn)行復(fù)核，因此，PLT-M是世界衛(wèi)生組織推薦的具有較高精確度的血小板計(jì)數(shù)“金標(biāo)準(zhǔn)”[2-3]。但傳統(tǒng)的PLT-M操作步驟相對繁瑣，影響因素較多，對于血小板計(jì)數(shù)極低的危急重癥患者結(jié)果回報(bào)耗時(shí)較長。因此，為更有效地爭取臨床診治時(shí)間，筆者在此基礎(chǔ)上建立改良涂片法進(jìn)行復(fù)核血小板減少的標(biāo)本。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院2015年3-12月門診及住院患者血常規(guī)結(jié)果血小板<100×109/L的94份標(biāo)本，所得血小板計(jì)數(shù)為A組。其中男4例，女90例，年齡2 d至80歲；主要集中于22～36歲，以孕產(chǎn)婦為主(72例)。

1.2儀器與試劑 邁瑞B(yǎng)C-6800全自動血液細(xì)胞分析儀及原裝配套試劑，儀器按要求維護(hù)保養(yǎng)、校準(zhǔn)、質(zhì)控、參與室間質(zhì)評確保儀器穩(wěn)定可靠，OLINPUS CX31顯微鏡，改良Neubauer計(jì)數(shù)板，珠海貝鎖生物技術(shù)有限公司提供劉氏染色液A液、B液，血小板計(jì)數(shù)稀釋液等。

1.3方法

1.3.1傳統(tǒng)目視計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù) 根據(jù)《臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)》復(fù)檢規(guī)則要求，對儀器檢測血小板<100×109/L的94份標(biāo)本即時(shí)進(jìn)行傳統(tǒng)目視計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)[4-5]，所得相應(yīng)血小板計(jì)數(shù)為B組。

1.3.2改良涂片法計(jì)數(shù)

1.3.2.1改良血涂片制備和染色 將儀器檢測血小板<100×109/L的94份血常規(guī)標(biāo)本即時(shí)制備成血涂片[6]，制備過程需注意將血滴0.05 mL調(diào)整為10 μL，推片角度要依據(jù)血細(xì)胞比容(HCT)做相應(yīng)調(diào)整，即HCT越大推片角度應(yīng)越小，按照劉氏染液操作說明進(jìn)行劉氏染液染色，以備鏡檢。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。非正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以M(P25，P75)表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1篩選標(biāo)本 94份血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果顯示，血小板<100×109/L的標(biāo)本經(jīng)手工復(fù)核發(fā)現(xiàn)，其中6例為假性血小板減少(其中5例為血小板聚集，1例為巨大血小板，經(jīng)采集末梢血預(yù)稀釋模式下檢測及顯微鏡復(fù)核后血小板均在正常范圍)，余88例為真性血小板減少。

2.2秩和檢驗(yàn)分析 88份真性血小板減少標(biāo)本采用上述3種方法計(jì)數(shù)血小板，A組為83.500(61.500×109/L，91.750×109/L);B組為84.000×109/L(67.250×109/L，92.000×109/L)；C組為83.000×109/L(66.250×109/L，92.000×109/L)。A、B、C 3組結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

血小板減少包括假性減少和真性減少，血小板假性減少主要由于穿刺不順、輸入血液制品、乙二胺四乙酸依賴、脂血及藥物的影響等[8]；血小板真性減少主要由于如惡性血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病、感染、藥物、妊娠晚期等原因?qū)е碌纳蓽p少、消耗或破壞增加、血液稀釋等[9-10]。作為婦產(chǎn)?？漆t(yī)院的醫(yī)生，筆者比較關(guān)注妊娠期血小板減少，妊娠期血小板減少是常見的僅次于妊娠期貧血的血象異常合并癥[11-12]。引起妊娠期血小板減少的病因很多，無論哪種病因都提示，可能發(fā)生妊娠期女性血栓栓塞、產(chǎn)科出血、內(nèi)臟出血，新生兒早產(chǎn)、凝血異常等不良母嬰結(jié)局[11,13-14]，因此，為臨床提供快速而準(zhǔn)確的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果，是檢驗(yàn)科醫(yī)生不可推卸的重要職責(zé)。

目前，隨著檢測技術(shù)的不斷進(jìn)步，血小板計(jì)數(shù)方法多種多樣[1]，其復(fù)核方法亦層出不窮。眾多研究顯示，PLT-O、PLT-F可對PLT-I檢測出的血小板減少標(biāo)本進(jìn)行復(fù)核[15-17]，其中PLT-O已被廣泛用于復(fù)核PLT-I檢測異常結(jié)果[18]；此外，還有自動血細(xì)胞形態(tài)分析系統(tǒng)復(fù)核法[19]，但是儀器復(fù)核方法成本都相對較高，且對于血小板聚集的標(biāo)本，仍需采用人工鏡檢法進(jìn)行確認(rèn)[15-16]。有研究顯示，脂肪乳注射液(C14-24)輸注后的標(biāo)本經(jīng)PLT-I提示低值后用PLT-O復(fù)核，結(jié)果顯示正常，其原因在于脂肪乳顆粒在體內(nèi)分解代謝成血小板體積的大小，經(jīng)核酸熒光染料染色后會呈現(xiàn)與血小板類似的熒光強(qiáng)度，易被儀器誤認(rèn)成血小板而進(jìn)行計(jì)數(shù)[20]。因此，儀器復(fù)核法不僅費(fèi)用高，且對血小板聚集和脂肪乳干擾等特殊情況的標(biāo)本仍需結(jié)合手工復(fù)核方法進(jìn)行確認(rèn)。手工復(fù)核方法除了傳統(tǒng)的目視計(jì)數(shù)法外，現(xiàn)有高倍鏡估測法[21]、血小板與紅細(xì)胞/白細(xì)胞比值法[22-23]、R值估測法[24]。傳統(tǒng)的目視計(jì)數(shù)法為手工復(fù)核的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是操作步驟繁瑣，耗時(shí)較長，整個復(fù)核過程在15～20 min，并且對于疑似血小板聚集的標(biāo)本仍需涂片觀察確認(rèn)；其余幾種方法都未被廣泛應(yīng)用于臨床，可能仍存在一些問題有待解決。為此，本研究針對血小板減少標(biāo)本，結(jié)合眾多手工復(fù)核方法建立改良涂片法進(jìn)行復(fù)核，結(jié)果顯示，改良涂片法可成功復(fù)核血小板減少標(biāo)本，計(jì)數(shù)結(jié)果與傳統(tǒng)目視計(jì)數(shù)法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。該方法從制備血涂片到鏡檢結(jié)束耗時(shí)約5 min，并且鏡檢的同時(shí)可觀察是否有血小板聚集、巨大血小板、紅細(xì)胞碎片等干擾因素存在。改良涂片法可大大彌補(bǔ)傳統(tǒng)復(fù)核方法的不足，能夠提升回報(bào)血小板復(fù)核結(jié)果的速度，為危急重癥患者的搶救爭取時(shí)間。但是用此方法復(fù)核時(shí)應(yīng)注意：(1)復(fù)核人員要具備快速制備血涂片的能力及扎實(shí)的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)；(2)要結(jié)合HCT調(diào)整推片的角度；(3)計(jì)數(shù)視野下紅細(xì)胞應(yīng)均勻分布且不重疊，計(jì)數(shù)的視野數(shù)應(yīng)≥10個；(4)由于是主觀判斷，人員間差異可能相對較大，因此實(shí)驗(yàn)室要定期進(jìn)行人員間比對等。

綜上所述，任何一種血小板復(fù)核方法都不存在絕對的優(yōu)勢，本研究有效地將傳統(tǒng)手工復(fù)核方法與血涂片復(fù)核方法的結(jié)合，成功地建立改良涂片法復(fù)核血小板減少標(biāo)本，在提高準(zhǔn)確回報(bào)血小板結(jié)果速度的同時(shí)節(jié)約了檢測成本，為臨床及時(shí)診治血小板減少及相關(guān)疾病提供了可靠有利的依據(jù)，為檢驗(yàn)科工作提供了便利。作為婦產(chǎn)特色專科醫(yī)院，及時(shí)準(zhǔn)確地回報(bào)血小板結(jié)果，對血小板減少的母嬰來說有可能是改善不良結(jié)局的重要前提之一。本研究的不足在于納入標(biāo)本數(shù)量相對較少，有待于擴(kuò)大標(biāo)本量做進(jìn)一步驗(yàn)證。