不同基因型H型高血壓患者葉酸補(bǔ)充治療后的效果研究

劉自強(qiáng) 魏良煜 張 勇

高血壓病現(xiàn)已成為當(dāng)今世界上最常見的慢性疾病之一，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，高血壓合并高同型半胱氨酸血癥（HHcy）及葉酸缺乏癥（folate deficiency）的現(xiàn)象廣泛存在，在我國高血壓患者總數(shù)中占據(jù)較大比例[1]。中國高血壓防治指南中把HHcy定義為血漿中Hcy水平＞15 μmol/L[2]，有研究證明HHcy是腦卒中發(fā)病的獨立預(yù)測因子之一[3]。Li等[4]研究顯示：高血壓合并HHcy患者比單純高血壓患者腦卒中發(fā)生風(fēng)險升高12.7倍，腦卒中死亡風(fēng)險升高11.7倍。考慮到高血壓合并HHcy的危害以及我國高血壓患者伴有HHcy的普遍性，我國學(xué)者提出了H型高血壓的新概念，把血漿Hcy水平≥10 μmol/L的高血壓患者統(tǒng)稱為H型高血壓患者[5]。據(jù)統(tǒng)計，在我國成年高血壓患者中，大約有四分之三的患者為H型高血壓，其中男性H型高血壓患者占男性高血壓總?cè)藬?shù)的91%，女性占60%[5-6]。因此，加強(qiáng)我國H型高血壓患者的預(yù)防和治療迫在眉睫。

H型高血壓患者預(yù)防和治療的關(guān)鍵在于降低血漿Hcy水平，臨床一般采取口服葉酸的方法，在人體葉酸代謝過程中有一個關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶——亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）。根據(jù)亞甲基四氫葉酸還原酶基因檢測（MTHFR 677CT）可將H型高血患者分為CC組（野生型）、CT組（雜合型）、TT組（突變型），統(tǒng)計結(jié)果顯示，我國人群MTHFR 677CT TT基因型比率相較于歐美等國家明顯偏高[7]。為驗證葉酸補(bǔ)充治療對H型高血壓患者的有效性、分析葉酸補(bǔ)充治療對不同基因型H型高血壓患者的療效差異及為H型高血壓患者的預(yù)防和治療提供幫助，本研究對121例符合納入標(biāo)準(zhǔn)的入選患者進(jìn)行基本信息（包括年齡、身高、體質(zhì)量等）、高血壓病史（包括既往最高血壓、降壓方案等）采集，并測定患者入院血壓、血漿Hcy水平及其他生化指標(biāo)。對入選患者進(jìn)行MTHFR 677C/T基因型檢測，并根據(jù)結(jié)果分為CC組、CT組及TT組三組，三組患者均在原有降壓方案的基礎(chǔ)上加用葉酸片（0.8 mg/d）。6個月后隨訪患者血壓及血漿Hcy水平，比較患者補(bǔ)充葉酸治療前后血壓及血漿Hcy變化情況，統(tǒng)計分析。

1 資料與方法

1.1 納入、排除及脫落標(biāo)準(zhǔn) ①納入標(biāo)準(zhǔn)：2018年6月-2019年6月在本醫(yī)院干部心內(nèi)科就診確診為H型高血壓；年齡18~90周歲，性別不限；規(guī)律口服降壓藥物治療且近3個月內(nèi)治療方案無變動；血壓控制穩(wěn)定；自愿同意參加本項研究并簽署知情同意書。②排除標(biāo)準(zhǔn)：不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的其他高血壓患者；近6個月內(nèi)發(fā)生心腦血管事件（包括但不限于心梗、卒中）；近6個月內(nèi)服用葉酸及其他含葉酸藥物。③脫落標(biāo)準(zhǔn)：本實驗需隨訪6個月，時間跨度較長，樣本隨訪期間發(fā)生死亡、失聯(lián)或被迫中止治療方案等意外則剔除此樣本。

1.2 研究方法

1.2.1 血壓測定 采用經(jīng)過校正的水銀血壓計，囑患者靜息狀態(tài)下取坐位，將袖帶置于患者優(yōu)勢臂正確位置，測量患者血壓讀取數(shù)值，間隔5分鐘后再次測量血壓，取2次平均值作為患者血壓并記錄。若2次測量的收縮壓或舒張壓差值大于5 mmHg則于5分鐘后再加測一次，選取血壓值相近的2次結(jié)果計算平均值作為患者的血壓值并記錄。

1.2.2 血漿Hcy測定 清晨于患者空腹?fàn)顟B(tài)下通過一次性采血針及黃色生化管采集患者5 mL靜脈血，實驗室離心機(jī)以3000 r/min的速度離心10 min后，取上清液于BS-120全自動生化分析儀中測定血漿Hcy值并記錄。

1.2.3 MTHFR 677C/T基因型檢測 ①DNA抽提：采集研究對象靜脈血2 mL，EDTA-K2抗凝。按照血液基因組DNA提取試劑盒說明書提取200 μL靜脈血中的基因組DNA。②PCR擴(kuò)增：采用無菌PCR薄壁管，加入熒光基團(tuán)預(yù)混液19 μL，DNA模板1 μL，蓋緊混勻后離心。將PCR管放入PCR儀中，設(shè)定擴(kuò)增程序為50 ℃ 2 min、95 ℃ 5 min、94 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s、65 ℃ 1 min（26Cycles）、65 ℃ 10 min；4 ℃冷卻。③基因型檢測：待上述步驟完成后將樣品放在熒光定量 PCR儀進(jìn)行結(jié)果判讀，并根據(jù)檢測結(jié)果將患者分為CC組（野生型）、CT組（雜合型）、TT組（突變型）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 對收集的所有信息進(jìn)行記錄、分類、匯總。使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料均使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）描述，不同組數(shù)據(jù)之間比較采用方差分析，同組數(shù)據(jù)之間比較采用配對樣本t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 MTHFR 677C/T基因型檢測結(jié)果 121例患者均完成MTHFR 677C/T基因型檢測，其中CC型31例（25.6%），CT型30例（24.8%），TT型60例（49.6%）。H型高血壓患者M(jìn)THFR 677C/T TT基因型比例較高。

2.2 三組患者葉酸治療前后血漿Hcy水平比較 三組患者葉酸補(bǔ)充治療前血漿Hcy水平、治療后血漿Hcy水平及治療前后血漿Hcy水平差值差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000，P=0.000，P=0.000）；治 療 前 血 漿Hcy水 平TT組 高 于CC組（P=0.000）及CT組（P=0.000）；治 療 前 后Hcy水平差值TT組高于CC組（P=0.000）及CT組（P=0.001）。見表1。

表1 三組患者葉酸治療前后血漿Hcy水平比較（±s，μmol/L）

表1 三組患者葉酸治療前后血漿Hcy水平比較（±s，μmol/L）

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2.3 三組患者葉酸補(bǔ)充治療前后血漿Hcy水平比較 三組患者加用葉酸補(bǔ)充治療后各組血漿Hcy水平均較同組治療前明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）。見表2。

表2 各組患者葉酸補(bǔ)充治療前后血漿Hcy水平比較（±s，μmol/L）

表2 各組患者葉酸補(bǔ)充治療前后血漿Hcy水平比較（±s，μmol/L）

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2.4 三組患者葉酸治療前后血壓水平比較 三組患者歷史最高收縮壓、歷史最高舒張壓、治療后收縮壓及治療后舒張壓差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；治療前后收縮壓差值及治療前后舒張壓差值差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.016，P=0.000）；治療前后收縮壓差值TT組高于CC組（P=0.005）及CT組（P=0.044）；治療前后舒張壓差值TT組高于CC組（P=0.000）及CT組（P=0.003）。見表3。

表3 三組患者葉酸治療前后血壓水平比較（±s，mmHg）

表3 三組患者葉酸治療前后血壓水平比較（±s，mmHg）

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3 討 論

高血壓和高同型半胱氨酸血癥（HHcy）均是造成心腦血管疾病發(fā)生發(fā)展的獨立危險因素[8]，但現(xiàn)有研究結(jié)果顯示H型高血壓患者相較于單純高血壓患者或單純HHcy患者發(fā)生心肌梗死、腦卒中等心腦血管事件概率顯著增加，這提示高血壓與HHcy之間可能存在某種協(xié)同作用[4]。因此對于H型高血壓患者而言，如何降低血漿Hcy水平成了研究的熱點，目前主流觀點是補(bǔ)充葉酸在控制H型高血壓患者血漿Hcy及血壓水平中具有較好的效果[9-10]，這本研究結(jié)果一致。其次，本研究結(jié)果還顯示，在隨機(jī)篩選的121例H型高血壓患者中TT型患者明顯高于CT型患者及CC型患者，這與既往我國H型高血壓患者基因型分布研究結(jié)果一致。而MTHFR作為葉酸代謝過程中的關(guān)鍵調(diào)劑酶，其不同基因型對于血漿Hcy水平影響也不盡相同。既往研究結(jié)果顯示，TT基因型患者血漿Hcy水平較CT型及CC型患者更高，其可能的機(jī)制是TT型（突變型）患者突變后酶的活性明顯低于CC型（野生型）和CT型（雜合型）患者，從而導(dǎo)致葉酸代謝過程受阻，使得Hcy無法復(fù)甲基化生成甲硫氨酸而引起HHcy[8,11]。本研究結(jié)果顯示相較于CC型及CT型患者，TT基因型患者的血漿Hcy水平更高，這也與上述觀點及目前國內(nèi)外主流結(jié)果一致[12]。

目前，根據(jù)現(xiàn)有的大量研究結(jié)果認(rèn)為葉酸缺乏是導(dǎo)致HHcy的發(fā)生的重要危險因素。因此予以葉酸補(bǔ)充治療，提高體內(nèi)葉酸含量是治療HHcy、降低血漿Hcy水平的重要手段。但也有人認(rèn)為補(bǔ)充葉酸治療對于不同基因型H型高血壓患者降低Hcy水平的有效性方面存在差異。本研究顯示顯示TT組患者葉酸補(bǔ)充治療前后血漿Hcy水平差值高于其余兩組，這可能說明TT型患者對于葉酸補(bǔ)充治療的效果更為明顯，因此TT型患者更應(yīng)該合理地使用葉酸補(bǔ)充治療控制血壓改善預(yù)后。本研究結(jié)果還顯示，CC組患者酸補(bǔ)充治療前后收縮壓差值、治療前后舒張壓差值高于CT組患者，這可能提示對于CC型患者，單純降壓治療可能效果并不理想，而葉酸補(bǔ)充治療后CC型患者收縮壓水平可得到明顯的控制。

綜上所述，本研究對既往的相關(guān)研究結(jié)果做了驗證，證實了葉酸補(bǔ)充治療對于H型高血壓患者控制血壓及血漿Hcy水平的有效性，同時還分析了不同基因型的H型高血壓患者基礎(chǔ)血漿Hcy水平的差異以及對葉酸補(bǔ)充治療的敏感性和有效性，為我國H型高血壓患者的治療和預(yù)防特別是個體化精細(xì)管理層面提供了有價值的參考意見。但是本研究樣本量偏少、地域性較局限，未來還需要更多數(shù)量、更大空間的樣本去進(jìn)行進(jìn)一步的驗證及深入研究，為我國H型高血壓患者管控提供更多的循證依據(jù)及新思路。