乙肝肝硬化患者D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73的變化與HBV-DNA的關(guān)系

曹 蕾，桂建雄

（武漢市第八醫(yī)院 檢驗(yàn)科，武漢 430010）

乙肝病毒（HBV）是世界上最小的病毒之一，具有易傳染、難治愈的特點(diǎn)［1］。人們一旦感染上了HBV，有可能只是終身攜帶不引發(fā)疾病，還有可能會(huì)患上乙型肝炎、乙肝肝硬化、肝癌等疾病，據(jù)報(bào)道［2］，每年全世界大約有100萬(wàn)人因感染HBV而死亡。乙肝肝硬化是由慢性乙肝肝炎發(fā)展而來(lái)，由于乙肝肝炎患者長(zhǎng)期發(fā)炎，使得肝臟受損、肝細(xì)胞壞死，從而刺激肝臟內(nèi)纖維組織過(guò)度增生，就形成了乙肝肝硬化［3］。HBV-DNA即乙肝病毒載量，是衡量HBV感染的指標(biāo)，具有直接性、特異性和靈敏性，當(dāng)HBV-DNA呈陽(yáng)性，說(shuō)明HBV可以復(fù)制和傳染［4］。有研究［5］表明，HBV能引起血小板生成減少，造成骨髓抑制，那么肝病患者體內(nèi)的血小板參數(shù)MPV和PDW的水平可能會(huì)發(fā)生異常變化，此外D-D、AFP-L3、GP-73也是衡量肝病嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)，可能與HBV-DNA有著密切的相關(guān)性。所以本研究選取180例患者，通過(guò)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)和HBV-DNA，來(lái)探討乙肝肝硬化患者體內(nèi)的指標(biāo)與HBV-DNA的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取我院2017年1月～2017年12月確診的90例乙肝肝硬化患者（肝硬化組）、90例乙肝病毒感染但是未發(fā)生肝硬化的患者作為乙肝組。

肝硬化組，年齡35～69歲，平均為57.4±12.4歲，男52例、女38例，肝功能Child-pugh分級(jí)：A級(jí)20例、B級(jí)57例、C級(jí)13例。乙肝組，年齡32～69歲，平均為55.8±11.0歲，男48例、女42例，肝功能Child-pugh分級(jí)：A級(jí)29例、B級(jí)53例、C級(jí)8例。兩組患者的年齡、性別、Child-pugh分級(jí)比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）慢性乙肝感染及乙肝后肝硬化患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《慢性乙型肝炎診斷指南2015年版》中的標(biāo)準(zhǔn)；（2）肝硬化患者經(jīng)超聲、肝臟CT檢查明確診斷；（3）本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)、研究對(duì)象的知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并甲狀腺功能疾病；（2）近2個(gè)月具有免疫治療病史、糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物治療史；（3）伴有全身感染性疾??；（4）類(lèi)風(fēng)濕、結(jié)締組織疾病；（5）惡性腫瘤。

1.2 D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73的檢測(cè)方法兩組患者清晨空腹，采集全血3mL，置于滅菌的試管中，離心5min，靜置，吸取上清液；取血清50uL，利用ELISA檢測(cè)D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73的水平。

1.3 HBV-DNA檢測(cè)方法再取肝硬化組全血樣本2 mL，置于滅菌的試管中，離心5min，靜置，吸取上清液；取血清50uL，加入等體積的細(xì)胞裂解液，提取模板DNA，然后利用PCR進(jìn)行測(cè)定。 根據(jù)患者的HBV-DNA檢測(cè)結(jié)果將肝硬化組患者分為低載量組（HBV-DNA<104copies/mL）；中載量組（HBV-DNA范圍104copies/mL<但是<106copies/mL）；高載量組（HBV-DNA>106copies/mL）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量數(shù)據(jù)表述采用mean±SD表示，組間比較采用-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson線(xiàn)性相關(guān)分析法；P值<0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS 16.0版本。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平比較肝硬化組患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73測(cè)定值顯著的高于乙肝組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

表1 兩組患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平比較

2.2 不同病毒載量患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平比較高載量組肝硬化患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73測(cè)定值顯著的高于中載量組和低載量組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；中載量組肝硬化患者的D-D、PDW、AFP-L3、GP-73測(cè)定值顯著的高于低載量組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

表2 不同病毒載量患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平比較

2.3 病毒載量與D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平的相關(guān)性乙肝肝硬化患者的D-D、AFP-L3、GP-73與HBV-DNA呈顯著的正相關(guān)關(guān)系（P<0.05），乙肝肝硬化患者的HBV-DNA水平與MPV、PDW無(wú)相關(guān)關(guān)系（P>0.05）（表3）。

表3 病毒載量與D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73水平的相關(guān)性

3 討論

HBV是一種DNA病毒，它是迄今為止感染人類(lèi)最小的DNA病毒，也是最難攻克的病毒之一，它復(fù)制存在著逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，且具有很強(qiáng)的隱蔽性，擁有頑強(qiáng)的抵抗力、明顯的嗜肝性，但本身對(duì)肝臟沒(méi)有致病性，只有人體內(nèi)的免疫細(xì)胞參與，它才會(huì)導(dǎo)致人發(fā)生肝損傷［6-7］。乙肝肝硬化是一種慢性的肝臟疾病，是由乙型肝炎過(guò)渡而來(lái)的，病理表現(xiàn)：肝細(xì)胞大范圍的壞死、殘余肝細(xì)胞結(jié)節(jié)性再生、結(jié)締組織增生與纖維隔生成，致使肝小葉組織破壞和假小葉生成，肝臟逐步變形、變硬而轉(zhuǎn)化為肝硬化。隨著肝臟功能代謝失調(diào)，會(huì)累及體內(nèi)多個(gè)系統(tǒng)，導(dǎo)致肝性腦病、繼發(fā)感染和癌變等并發(fā)癥，嚴(yán)重危害患者的生病健康，因此通過(guò)檢測(cè)體內(nèi)的一些指標(biāo)來(lái)判斷患者肝臟損傷程度是十分必要的［8-9］。

AFP-L3和GP-73是以往判斷乙肝肝硬化主要指標(biāo)，而本文又多檢測(cè)了D-D 、MPV和PDW這三個(gè)指標(biāo)，具有一定的創(chuàng)新性。其中D-D是在機(jī)體發(fā)生凝血時(shí)，纖維蛋白被凝血酶作用后轉(zhuǎn)變?yōu)榻宦?lián)纖維蛋白，并被纖溶系統(tǒng)降解的特異性碎片，當(dāng)其升高時(shí)代表體內(nèi)存在著凝血及纖溶活性增強(qiáng)的重要分子標(biāo)志物，雖然它在凝血過(guò)程中發(fā)揮巨大作用，但是有研究［10］表明其也是判斷乙肝肝硬化的指標(biāo)。研究結(jié)果表明肝硬化組患者的D-D測(cè)定值顯著的高于乙肝組，且D-D測(cè)定值在肝硬化組與HBV-DNA呈正相關(guān)，原因可能是肝硬化時(shí)肝臟細(xì)胞及組織大量遭到破壞，纖溶酶抑制物合成顯著減少，纖維蛋白降解增加，導(dǎo)致D-D異常升高［11］。此外，肝臟是體內(nèi)新陳代謝的重要器官，是多種凝血、抗凝及纖溶因子合成的場(chǎng)所，在維持機(jī)體正常凝血平衡方面發(fā)揮著重要的作用，而肝硬化患者的肝功能不斷下降，以出血為主的并發(fā)癥發(fā)生率顯著提高［12］。通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)我們可以看出肝硬化組患者的MPV和PDW明顯高于乙肝組，但是MPV和PDW和HBV-DNA沒(méi)有相關(guān)性，可能是因?yàn)楦斡不颊叽嬖诿黠@肝功能損傷，內(nèi)毒素清除能力顯著降低，大量無(wú)法清除的內(nèi)毒素可引起血小板破壞增多，因此數(shù)量明顯下降，而且肝臟是合成血小板生成素的重要場(chǎng)所，肝硬化患者的血小板生成素合成明顯受到抑制，因此導(dǎo)致血小板生成減少，上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為探究乙肝肝硬化的打開(kāi)了新思路。AFP-L3是小扁豆凝集素結(jié)合型甲胎蛋白（AFP）易質(zhì)體，為肝癌細(xì)胞所特有［13］；GP-73是一種跨膜糖蛋白，主要存在于高爾基體順面，可以維持肝臟、腎臟等器官生長(zhǎng)發(fā)育，GP-73在健康肝臟組織中幾乎不表達(dá)，但是在肝臟組織發(fā)生肝炎、肝硬化以及肝癌病變時(shí)表達(dá)量明顯增加［14］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肝硬化組的AFP-L3和GP-73明顯高于乙肝組，并且AFP-L3和GP-73和HBV-DNA具有明顯的相關(guān)性，說(shuō)明了肝硬化組的患者的肝臟的發(fā)育狀態(tài)較差，而HBV-DNA是反映HBV在體內(nèi)復(fù)制及存在的重要指標(biāo)，肝硬化患者體內(nèi)組織中HBV大量復(fù)制，進(jìn)而引發(fā)機(jī)體一系列反應(yīng)導(dǎo)致肝細(xì)胞中的高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等重要細(xì)胞器發(fā)生損傷，從而使AFP L3和GP-73水平異常升高，所以AFP L3和GP-73可能是反映機(jī)體HBVDNA復(fù)制情況的重要指標(biāo)，即HBV-DNA表達(dá)量增加，AFP-L3和GP-73也隨著增加［15］。

綜上所述，肝硬化組患者的D-D、MPV、PDW、AFP-L3、GP-73測(cè)定值顯著的高于乙肝組，而且乙肝肝硬化患者的D-D、AFP-L3、GP-73與HBV-DNA呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明 D-D、AFP-L3、GP-73可以在一定程度上反映肝硬化患者肝臟的惡化程度，但是該實(shí)驗(yàn)的樣本量太少，還需要進(jìn)一步進(jìn)行研究。