基于質(zhì)量控制分析不同產(chǎn)地絞股藍(lán)的水分、灰分和浸出物含量

溫秀萍，鄒福賢,2，盧澤雨，洪 旖，于虹敏，劉小芬，范世明，林 羽,3

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬泉州市正骨醫(yī)院，福建 泉州 362000；3.福建中醫(yī)藥大學(xué)生物醫(yī)藥研發(fā)中心，福建 福州 350122）

【研究意義】絞股藍(lán)〔（Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）Makino〕為葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生草質(zhì)攀援植物［1］，是常用的中草藥之一，又名五葉參、七葉膽。絞股藍(lán)是除五加科植物外含有人參皂苷成分的藥用植物之一，主要分布在湖南、云南、廣西等省區(qū)，因此有“南方人參”的美稱［2］。最早作為救荒的野菜食物記載于《救荒本草》［3］?！吨腥A本草》記載其以全草入藥，味苦，微甘，性涼，歸肺、脾和腎經(jīng)，具有清熱、補(bǔ)虛、解毒的功效，主治體虛乏力、虛勞失精。原中華人民共和國衛(wèi)生部在2002 年將絞股藍(lán)列為可用于保健食品的藥物之一；2017 年福建省中藥材產(chǎn)業(yè)協(xié)會(huì)將其列入“福九味”，作為福建省重點(diǎn) 發(fā)展的中藥材。目前，絞股藍(lán)已有10 余個(gè)省級(jí)中藥材標(biāo)準(zhǔn)，但尚未收錄于《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》），其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有性狀鑒別、顯微鑒別，或水分、總灰分、浸出物含量測定，未能全面反映和評(píng)價(jià)絞股藍(lán)的質(zhì)量。

【前人研究進(jìn)展】現(xiàn)代化學(xué)成分研 究表明，絞股藍(lán)主要含有皂苷類、黃酮類和多糖類成分以及多種氨基酸、微量元素和礦物質(zhì)等［4-7］。藥理研究表明，絞股藍(lán)具有抗腫瘤［8］、鎮(zhèn)靜抗焦慮［9］、降血脂［10］、抗氧化以及延緩衰老等重要作用［11］。質(zhì)量研究主要涉及農(nóng)殘、重金屬、總苷提取物和總苷片制劑、配方顆粒［3，12-16］等方面。近年來，絞股藍(lán)的各種茶類飲料、口服液、養(yǎng)生酒以及食品添加劑等銷售量巨大，但其質(zhì)量控制體系還不夠完善，關(guān)于藥材中水分、灰分、浸出物含量的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和研究較少。

【本研究切入點(diǎn)】水分、灰分等是影響中藥材和代用茶質(zhì)量的一個(gè)重要因素，水分超過一定范圍容易在儲(chǔ)藏過程中霉變、潮解，導(dǎo)致蟲害或者變質(zhì)［17］。為了能更安全有效地利用絞股藍(lán)，本試驗(yàn)以不同產(chǎn)地的絞股藍(lán)為研究對(duì)象，比較不同產(chǎn)地藥用和茶飲絞股藍(lán)的水分、灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物的含量。【擬解決的關(guān)鍵問題】本研究通過評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地藥用和茶飲絞股藍(lán)的質(zhì)量，明確各質(zhì)量控制項(xiàng)目的限量，以期為提升絞股藍(lán)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)樣品：包括產(chǎn)自陜西、福建、廣西、安徽、河北、江西等不同省區(qū)的絞股藍(lán)樣品（均被加工成藥材或茶葉），購于安徽亳州、河北安國等多個(gè)藥材市場，共計(jì)75 批次，其中藥用絞股藍(lán)20 批、茶飲絞股藍(lán)55 批（表1）。供試樣品存放于福建中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源標(biāo)本館，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院范世明正高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為絞股藍(lán)。根據(jù)采摘部位不同，絞股藍(lán)樣品分全草、莖和葉、莖、葉、龍須（圖1、圖2）。全草即為絞股藍(lán)的地上全草；莖和葉為絞股藍(lán)距離地面15 cm 以上的整株莖蔓；葉為絞股藍(lán)整株莖蔓2/5～4/5 之間的葉；龍須為絞股藍(lán)頂尖6～12 cm 的嫩芽尖（須葉完整、嫩莖尖）；莖為絞股藍(lán)整株莖。

圖1 藥用絞股藍(lán)的不同部位Fig.1 Different parts of medicinal Gynostemma pentaphyllum

圖2 茶飲絞股藍(lán)的不同部位Fig.2 Different parts of tea Gynostemma pentaphyllum

表1 絞股藍(lán)樣品來源Table 1 Sample sources of Gynostemma pentaphyllum

主要試劑：5%硝酸銀水溶液（南京森貝伽生物科技有限公司），鹽酸和無水乙醇（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

儀器與設(shè)備：恒溫水浴鍋（蘇州珀西瓦實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、XM7D-8222 型電熱恒溫干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司）、SHB-III 循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）、BSA224S 型萬分之一分析天平〔賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司〕、KSW-4D-11 箱式電阻爐（上海實(shí)驗(yàn)電阻爐）、調(diào)節(jié)式萬用電爐（南通市長江光學(xué)儀器有限公司）、XS-05 藥材粉碎機(jī)（上海兆申科技有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 水分測定 采用《中國藥典》（2020 年版）四部通則0832 中的烘干法測定絞股藍(lán)樣品水分。取絞股藍(lán)樣品約3 g，平鋪于烘至恒重的稱量瓶中，厚度不超過10 mm，精密稱定，將稱量瓶放入105 ℃烘箱中，瓶蓋打開，干燥5 h 后取出，移置干燥器中冷卻30 min 后，取出精密稱定，再按上述方法進(jìn)行干燥1 h，放冷，精密稱重，計(jì)算兩次稱重的差異，直至連續(xù)兩次稱量差異不超過5 mg。平行操作3 次，計(jì)算樣品的含水量。

1.2.2 灰分測定（1）總灰分：參照《中國藥典》四部通則2302 測定絞股藍(lán)灰分。取絞股藍(lán)粉末3 g，精密稱定，置于熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量，置于電爐上緩慢熾熱使樣品充分炭化至無煙，注意避免燃燒。炭化后放入馬弗爐中，在550 ℃下灼燒6 h，冷卻至200℃后取出，放入干燥器中冷卻30 min，準(zhǔn)確稱量。反復(fù)灼燒至前后兩次稱量差異不超過5 mg。平行操作3 次，根據(jù)殘?jiān)亓浚?jì)算總灰分含量。

（2）酸不溶性灰分：取上述所得的灰分，根據(jù)《中國藥典》四部通則2302 測定酸不溶性灰分。在坩堝中加入稀鹽酸10 mL，蓋上表面皿，水浴加熱10 min，表面皿用5 mL 熱水沖洗，洗液并入坩堝中，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，用蒸餾水反復(fù)洗滌至洗液中滴入硝酸銀不變渾濁為止。將濾渣連同濾紙移置原坩堝中，在沸水浴上蒸干坩堝內(nèi)水分，再移至馬弗爐中熾灼5 h。待爐溫降至200℃，取出坩堝，放入干燥器內(nèi)冷卻至室溫，精密稱定。重復(fù)操作直到前后兩次稱量差異不超過5 mg。平行操作3 次，根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算酸不溶性灰分含量。

1.2.3 浸出物測定 依據(jù)《中國藥典》四部通則2201 中的熱浸法測定水溶性浸出物。精密稱定絞股藍(lán)粉末4.0 g，置250 mL 錐形瓶中，添加蒸餾水100 mL，蓋上瓶蓋搖晃均勻，稱定裝有樣品和試劑的錐形瓶，靜置1 h 后連接回流冷凝管，待水浴鍋溫度達(dá)到100 ℃后將試樣加熱至沸騰，并保持微沸1 h。取出錐形瓶蓋上瓶塞放冷，補(bǔ)足失重，搖勻，用干燥濾器濾過。精密量取濾液25 mL，置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置于干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定并記錄數(shù)據(jù)，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用 Excel 2013 進(jìn)行整理，應(yīng)用SPSS 19.0 軟件對(duì)不同產(chǎn)地絞股藍(lán)的水分、灰分和浸出物含量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并通過繪制柱形圖進(jìn)行結(jié)果可視化展示。

2 結(jié)果與分析

根據(jù)絞股藍(lán)樣品作用不同，分為藥用和茶飲兩種，藥用絞股藍(lán)共收集20 批次樣品，產(chǎn)于福建、安徽、湖北、廣西、陜西、四川和云南，主要以全草為主，僅福建1 批次藥用部位為莖。茶飲絞股藍(lán)共收集55 批次樣品，產(chǎn)于福建、安徽、甘肅、廣西、貴州、湖北、吉林、江蘇、陜西、江西、四川和云南，基本為莖和葉、葉，有6 批次為龍須，僅吉林產(chǎn)地的2 批次茶飲絞股藍(lán)為全草。

2.1 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)含水量分析

根據(jù)供試絞股藍(lán)水分測定結(jié)果，20 批次藥用絞股藍(lán)樣品中，含水量范圍在8.31%～12.78%之間，均值為10.29%。絞股藍(lán)的部位不同，其含水量也不同，其中全草的含水量最高，與龍須、葉、莖和葉3 種部位的含水量均具有顯著性差異（表2）。根據(jù)絞股藍(lán)樣品產(chǎn)地進(jìn)行比較，結(jié)果（圖3）發(fā)現(xiàn)，全草類樣品僅廣西兩批次的含水量超過12%，其他均在12%以下，吉林和福建樣品的含水量較低；莖和葉樣品中，云南、江西、貴州和廣西樣品的含水量較高，陜西與湖北樣品的含水量較低；在單純的葉樣品中，含水量從高到低分別為福建、四川和陜西樣品；在龍須樣品中，福建、甘肅、陜西和湖南樣品的含水量逐漸降低；莖樣品僅有福建1 批次，含水量為9.1%。

表2 絞股藍(lán)不同部位的水分、總灰分、酸不溶性灰分和水溶性浸出物含量Table 2 Contents of moisture,total ash,acid-insoluble ash and water-soluble extract in different parts of Gynostemma pentaphyllum

圖3 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)不同部位的水分含量Fig.3 Moisture content in different parts of Gynostemma pentaphyllum from different origins

2.2 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)總灰分含量分析

根據(jù)供試絞股藍(lán)總灰分測定結(jié)果可知，不同產(chǎn)地20 批次藥用絞股藍(lán)樣品中，總灰分含量范圍在9.41%～20.19%之間，總灰分均值為14.39%。絞股藍(lán)不同部位之間的總灰分含量無顯著性差異（表2）。但相同部位不同產(chǎn)地樣品的總灰分差異較大，全草類樣品中，以吉林樣品的總灰分含量最高、為17.79%，而云南樣品的總灰分含量最低、為9.9%；莖和葉樣品中，江蘇、貴州、云南和安徽樣品的總灰分含量較高，超過15%，而陜西、湖北樣品的總灰分含量均值低于8%；在單純的葉樣品中，含水量從高到低分別來源于四川、福建和陜西；在單純的龍須樣品中，福建和甘肅樣品的總灰分含量較高，陜西和湖南樣品的總灰分含量較低；單純的莖樣品僅福建1 批次，總灰分為20.19%（圖4）。

圖4 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)不同部位的總灰分含量Fig.4 Total ash content in different parts of Gynostemma pentaphyllum from different origins

2.3 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)酸不溶性灰分含量分析

根據(jù)供試絞股藍(lán)酸不溶性灰分測定結(jié)果，除部位為莖之外的19 批次藥用絞股藍(lán)樣品，其酸不溶性灰分含量范圍在0.57%～6.99%之間，均值為2.62%。絞股藍(lán)不同部位之間的酸不溶性灰分含量無顯著性差異（表2）。全草類樣品中，以湖北樣品的酸不溶性灰分含量最高、為6.99%，其他樣品含量均低于5%；莖和葉樣品中，安徽樣品的酸不溶性灰分含量均值最高，最低為湖北樣品；在單純的葉樣品中，酸不溶性灰分含量從高到低分別為四川、福建和陜西樣品；在單純的龍須樣品中，酸不溶性灰分含量從高到低分別為甘肅、福建、湖南和陜西樣品；單純的莖樣品僅福建1 批次，酸不溶性灰分為9.84%（圖5）。

圖5 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)不同部位的酸不溶性灰分含量Fig.5 Acid-insoluble ash content in different parts of Gynostemma pentaphyllum from different origins

2.4 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)水溶性浸出物含量分析

根據(jù)供試絞股藍(lán)水溶性浸出物測定結(jié)果，不同產(chǎn)地20 批次藥用絞股藍(lán)樣品的水溶性浸出物（熱浸法）含量在20.86%～39.79%之間，均值為27.92%。莖和葉樣品的浸出物含量顯著高于全草類樣品，其他不同部位樣品之間無顯著性差異（表2）。陜西樣品在各個(gè)部位（除莖外）的浸出物含量均高于其他產(chǎn)地樣品；此外在全草類中，廣西、湖北和福建樣品的浸出物含量較高，而安徽、云南和四川樣品的含量較低；在莖和葉中，江西、湖北、甘肅和福建樣品的含量也較高，而貴州和云南樣品的含量較低（圖6）。

圖6 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)不同部位的水溶性浸出物含量Fig.6 Water-soluble extract content in different parts of Gynostemma pentaphyllum from different origins

3 討論

3.1 藥用絞股藍(lán)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

中藥材中含有較多親水大分子，如蛋白質(zhì)、多酚、糖類等，當(dāng)其含水量超過15%，易引起霉變、酸敗、蟲害等情況，影響中藥材的藥用價(jià)值［18］，而灰分含量能反映金屬礦物質(zhì)水平。目前省級(jí)中藥材標(biāo)準(zhǔn)中，《福建省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2006 年版）、《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2010 年版）、《廣西壯族自治區(qū)瑤藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（第一卷）、《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（1996 年版）和《貴州省中藥材民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（2003 年版）等均未有絞股藍(lán)的質(zhì)量控制指標(biāo)及限量［19-24］；《山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2012 年版）、《山西省中藥材中藥飲片標(biāo)準(zhǔn)》（2017 年版）、《湖北省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2009 年版）、《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2009 年版）和《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（第五冊(cè)）［25-29］5 個(gè)?。▍^(qū)）有絞股藍(lán)的質(zhì)量控制限量，其中水分限量在10.0%～15.0%之間，總灰分限量標(biāo)準(zhǔn)在10.0%～16.0%之間（湖南省無），酸不溶性灰分最高限量為4.0%（湖南省無），熱浸法水溶性浸出物最低限量為16.0%（湖南、湖北省無）。而本試驗(yàn)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，供試的20 批次藥用絞股藍(lán)的含水量基本在12.0%以下，浸出物含量均在20.0%以上，均符合標(biāo)準(zhǔn)要求；但有7 批次的總灰分含量超過16.0%，基本涵蓋每個(gè)省區(qū)的樣品；有6 批次的酸不溶性灰分含量超過最高限量（4.0%），14批次的酸不溶性灰分含量不高于3.0%。從上述數(shù)據(jù)可看出，目前有關(guān)絞股藍(lán)藥材質(zhì)量控制指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)較少，而且部分限量要求較低，為進(jìn)一步提升藥用絞股藍(lán)的品質(zhì)，結(jié)合本研究結(jié)果，建議將水分、總灰分、酸不溶性灰分和水溶性浸出物（熱提法）4 項(xiàng)檢查均納入各省絞股藍(lán)藥材質(zhì)量控制項(xiàng)目，擬定絞股藍(lán)藥材標(biāo)準(zhǔn)中水分限量為不高于12.0%，總灰分含量不高于16.0%，酸不溶性灰分不高于3.0%，熱浸法所得水溶性浸出物含量不低于25.0%。在此限量標(biāo)準(zhǔn)下，本研究中符合要求的供試樣品為安徽、福建、陜西和湖南各1 批次，其他批次不合格的主要原因?yàn)榭偦曳趾退岵蝗苄曰曳殖^限量。建議在絞股藍(lán)藥材生產(chǎn)過程中規(guī)范生產(chǎn)技術(shù)、保存得當(dāng)，以保證絞股藍(lán)藥材的質(zhì)量。

3.2 茶飲絞股藍(lán)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

代用茶是由可用于食用的植物花、葉、果、根等為原料加工制成，應(yīng)當(dāng)符合《NYT2140-2015綠色食品代用茶》標(biāo)準(zhǔn)，其中規(guī)定葉類的水分含量低于7.5%，灰分含量低于12%［30］，但在本試驗(yàn)55 批次茶飲絞股藍(lán)中，水分達(dá)標(biāo)的僅14 批次，不合格率為74.5%，達(dá)標(biāo)的樣品中8 批次來源于陜西，2 批次來源于湖北，各占對(duì)應(yīng)省份總樣品的57.1%和66.7%，其他省份的樣品幾乎都不達(dá)標(biāo)；總灰分共有19 批次合格，不合格率為65.5%，其中陜西11 批，湖南和湖北各2 批；陜西、湖北和福建茶飲絞股藍(lán)的浸出物含量較其他省份樣品更高。目前，關(guān)于絞股藍(lán)茶的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)主要為陜西、廣西和江西發(fā)布的《DB36T 1264-2020 絞股藍(lán)規(guī)范化生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》《DB45T 2046-2019 地理標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品 金秀絞股藍(lán)茶》《DB61T 931.5-2014 絞股藍(lán)茶采摘技術(shù)規(guī)范》《DB61T 931.6-2014 絞股藍(lán)茶加工技術(shù)規(guī)范》《DB61T 931.7-2014 絞股藍(lán)茶》和《DBS61 0019-2019 食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 平利絞股藍(lán)》［31-36］，其中平利絞股藍(lán)有較為嚴(yán)格的理化指標(biāo)限量，要求樣品水分和灰分含量均較低。除陜西、廣西和江西三?。▍^(qū)）外，其他省份未有絞股藍(lán)茶的相關(guān)理化指標(biāo)限制，故生產(chǎn)規(guī)范有待進(jìn)一步提高。本研究通過對(duì)不同產(chǎn)地、不同部位的茶飲絞股藍(lán)樣品進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)含水量和浸出物存在不同，但總灰分和酸不溶性灰分差異較小。此外，各省區(qū)采用的標(biāo)準(zhǔn)不同，導(dǎo)致不同產(chǎn)地的茶飲絞股藍(lán)質(zhì)量差異較大，其中陜西、廣西、湖北和福建等產(chǎn)地的茶飲絞股藍(lán)浸出物含量較高，質(zhì)量較好。結(jié)合茶飲絞股藍(lán)現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)和本研究結(jié)果，建議建立全國性統(tǒng)一的茶飲絞股藍(lán)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)絞股藍(lán)的開發(fā)利用將具有較大提升。

4 結(jié)論

我國現(xiàn)有的5 個(gè)省（區(qū)）絞股藍(lán)藥材質(zhì)量控制項(xiàng)目設(shè)置，已不能滿足目前的市場需求。本研究采用《中國藥典》通則項(xiàng)下方法測定不同產(chǎn)地絞股藍(lán)的水分、灰分、水溶性浸出物含量，結(jié)合研究結(jié)果建議將水分、總灰分、酸不溶性灰分和水溶性浸出物（熱提法）4 項(xiàng)檢查設(shè)置為各省絞股藍(lán)藥材質(zhì)量控制項(xiàng)目，擬定藥用絞股藍(lán)水分、總灰分含量分別不得超過12.0%、16.0%，酸不溶性灰分含量不高于3.0%，水溶性浸出物（熱浸法）含量不低于25.0%。結(jié)合陜西、廣西和江西三?。▍^(qū)）絞股藍(lán)茶的相關(guān)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和《NYT2140-2015 綠色食品代用茶》標(biāo)準(zhǔn)，建議依據(jù)茶飲絞股藍(lán)使用部位的不同制定或細(xì)化相應(yīng)質(zhì)量控制或標(biāo)準(zhǔn)，建立全國性統(tǒng)一的茶飲絞股藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步提高絞股藍(lán)的生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范。