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    馬蘇大馬哈魚(yú)籽營(yíng)養(yǎng)成分分析及其卵磷脂對(duì)胰島素抵抗的改善作用

    2021-07-11 16:10武瑞赟王安陳春山尚楠
    肉類(lèi)研究 2021年5期
    關(guān)鍵詞:糖異生營(yíng)養(yǎng)成分胰島素抵抗

    武瑞赟 王安 陳春山 尚楠

    摘 要:從氨基酸組成、礦物質(zhì)含量、維生素和卵磷脂含量等角度分析大馬哈魚(yú)(Oncorhynchus keta)和馬蘇大馬哈魚(yú)(Oncorhynchus masou)魚(yú)籽的基本營(yíng)養(yǎng)組成,并通過(guò)構(gòu)建胰島素抵抗HepG2肝細(xì)胞模型,以葡萄糖吸收水平為指標(biāo),研究馬蘇大馬哈魚(yú)籽來(lái)源的卵磷脂對(duì)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的改善效果。結(jié)果表明:馬蘇大馬哈魚(yú)籽中的氨基酸、B族維生素和卵磷脂含量顯著高于大馬哈魚(yú)籽,其中卵磷脂含量為234 mg/g,約占總質(zhì)量的23%,是細(xì)胞膜的主要構(gòu)成成分,具有多種生物學(xué)活性;二肽基態(tài)酶-Ⅳ活性抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明卵磷脂具有潛在的降血糖能力。模型組葡萄糖消耗量為3.87 mmol/L,顯著低于正常對(duì)照組(5.86 mmol/L)(P<0.05),說(shuō)明模型建立成功;與模型組相比,馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂處理組均能夠促進(jìn)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的葡萄糖消耗,其質(zhì)量濃度為800 μg/mL時(shí),葡萄糖消耗量與空白對(duì)照組(5.86 mmol/L)接近,為5.60 mmol/L。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)測(cè)定胰島素蛋白激酶B信號(hào)通路中關(guān)鍵酶基因的表達(dá)水平,卵磷脂降低胰島素抵抗HepG2細(xì)胞中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、葡萄糖-6-磷酸酶和糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK(3)β)基因的相對(duì)表達(dá)量,其中GSK(3)β相對(duì)表達(dá)量由模型組的2.60 倍下調(diào)至1.59 倍,增加了HepG2細(xì)胞中糖原合成酶基因表達(dá)水平,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)糖原合成,糖原相對(duì)含量從30.67%增加到73.00%,抑制糖異生過(guò)程的發(fā)生,改善了胰島素抵抗HepG2細(xì)胞對(duì)葡糖糖的利用水平。

    關(guān)鍵詞:馬蘇大馬哈魚(yú)籽;營(yíng)養(yǎng)成分;卵磷脂;胰島素抵抗;糖異生;糖原合成

    Analysis of Nutritional Components and Hypoglycemic Effect of Lecithin in Oncorhynchus masou Roes

    WU Ruiyun1, WANG An1, CHEN Chunshan2, SHANG Nan3,*

    (1.College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China;

    2.Beijing Aquatic Wildlife Rescue and Conservation Centre, Beijing 102100, China;

    3.College of Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China)

    Abstract: The basic nutritional components of Oncorhynchus keta and Oncorhynchus masou roes including amino acids, minerals, vitamins and lecithin were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC). The effect of lecithin from Oncorhynchus masou roes on improving insulin resistance in HepG2 cells was evaluated by determining glucose absorption levels. The results showed that the contents of amino acids, vitamin B and lecithin in Oncorhynchus masou roes were significantly higher than those in Oncorhynchus keta roes; the lecithin content in Oncorhynchus masou roes was 234 mg/g,

    accounting for 23% of the total mass. Lecithin was the main component of the cell membrane, having many biological activities. The results of dipeptidylpeptidase-Ⅳ (DPP-Ⅳ) inhibition tests showed that lecithin had a potential hypoglycemic activity. Furthermore, glucose consumption was 3.87 mmol/L in the insulin resistance model group, significantly lower than in the normal control group (5.86 mmol/L) (P < 0.05), indicating successful modeling. Compared with the model group, lecithin from Oncorhynchus masou roes could improve the glucose consumption of insulin-resistant cells. The glucose consumption at a lecithin concentration of 800 μg/mL was 5.60 mmol/L, similar to that in the normal control group

    (5.86 mmol/L). Meanwhile, quantitative real-time polymerase chain reaction was used to detect the expression levels of the key enzymes in the insulin protein kinase B (Akt) signaling pathway, which indicated that lecithin reduced the relative expression levels of phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK), glucose-6-phosphatase (G6Pase), and glycogen synthase kinase 3β (GSK(3)β) genes? in insulin-resistant HepG2 cells. Compared with the normal control group, the relative expression level of GSK(3)β was up-regulated by 2.60 folds in the model group, and the up-regulation fold was decreased to 1.59 in the lecithin-treated group. Lecithin increased the expression level of the glycogen synthase (GS) gene in hepatocytes and consequently promoted intracellular glycogen synthesis, increasing glycogen relative content from 30.67% to 73.00%, inhibited gluconeogenesis and improved the utilization of glucose in insulin-resistant HepG2 cells.

    Keywords: Oncorhynchus masou roes; nutritional composition; lecithin; insulin resistance; gluconeogenesis; glycogen synthesis

    DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20210329-086

    中圖分類(lèi)號(hào):TS254.9? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):1001-8123(2021)05-0001-10

    引文格式:

    武瑞赟, 王安, 陳春山, 等. 馬蘇大馬哈魚(yú)籽營(yíng)養(yǎng)成分分析及卵磷脂對(duì)胰島素抵抗的改善作用[J]. 肉類(lèi)研究, 2021, 35(5): 1-10. DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20210329-086.? ? http://www.rlyj.net.cn

    WU Ruiyun, WANG An, CHEN Chunshan, et al. Analysis of nutritional components and hypoglycemic effect of lecithin in Oncorhynchus masou roes[J]. Meat Research, 2021, 35(5): 1-10. DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20210329-086.? ? http://www.rlyj.net.cn

    隨著經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展,人們的生活水平日益提高,我國(guó)居民的膳食結(jié)構(gòu)和生活方式發(fā)生了極大的變化,糖尿病成為繼心腦血管疾病、癌癥后的第三大疾病,嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康[1]。其中2型糖尿病是最常見(jiàn)的一種,患者人數(shù)占糖尿病總?cè)藬?shù)的90%以上,其主要發(fā)病機(jī)制是胰島素抵抗或/和胰島素分泌不足[2]。胰島素抵抗是指因各種原因使胰島素靶組織(包括肝臟、脂肪等)對(duì)胰島素的反應(yīng)性或敏感性降低[3-5],導(dǎo)致正常量的胰島素產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)低于正常水平。在對(duì)2型糖尿病不斷深入研究過(guò)程中,根據(jù)不同的致病機(jī)理和作用靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)出了多種改善胰島素抵抗的藥物,如促胰島素分泌劑、提高胰島素敏感性類(lèi)藥物、減緩碳水化合物吸收類(lèi)藥物等[6-8]。但是這些藥物都是化學(xué)合成藥物[9],生產(chǎn)成本高,且存在一些安全問(wèn)題,如在臨床實(shí)驗(yàn)中導(dǎo)致上呼吸道感染、胰腺炎、鼻咽炎、肝酶升高、皮疹等不良反應(yīng)[10-13]。因此,積極尋求、開(kāi)發(fā)功能活性因子,改善肝臟胰島素抵抗對(duì)于

    2型糖尿病的預(yù)防和治療具有重要意義。

    大馬哈魚(yú)屬鮭形目、鮭科、馬哈魚(yú)屬[14]。目前我國(guó)主要分布有3 種大馬哈魚(yú):大馬哈魚(yú)(Oncorhynchus keta)、馬蘇大馬哈魚(yú)(Oncorhynchus masou)和駝背大馬哈魚(yú)(Oncorhynchus gorbuscha)[15],其中馬蘇大馬哈魚(yú)是我國(guó)大馬哈魚(yú)屬中分布最南的一種,其肉質(zhì)細(xì)膩、呈紅色、味鮮美,脂肪含量極為豐富,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高[16-17]。

    魚(yú)籽晶瑩透亮,富含磷酸鹽、鈣質(zhì)及VA、VD,具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和食用價(jià)值,被公認(rèn)為宴席珍膳[18]。目前,魚(yú)籽主要用于加工魚(yú)籽醬,但是魚(yú)籽醬對(duì)原料的要求較為苛刻,如魚(yú)籽顆粒圓潤(rùn)、顏色透亮等,許多魚(yú)籽不具備這些加工特性,在加工過(guò)程中無(wú)法得到有效的加工和利用,被丟棄,造成資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。但是,魚(yú)籽中含有豐富的蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸、磷脂等重要營(yíng)養(yǎng)成分,其中卵磷脂又稱(chēng)為蛋黃素,被譽(yù)為與蛋白質(zhì)、維生素并列的“第三營(yíng)養(yǎng)素”,是細(xì)胞磷脂雙分子層的主要構(gòu)成成分,具有調(diào)節(jié)代謝、調(diào)節(jié)血脂水平、預(yù)防心腦血管疾病、促進(jìn)胰臟分泌胰島素、降血糖等生物功能[19-20]。Elaine等[21]通過(guò)大鼠模型發(fā)現(xiàn),卵磷脂可以促進(jìn)胰島素分泌;徐雷雷[22]發(fā)現(xiàn),海參來(lái)源的卵磷脂可以通過(guò)調(diào)節(jié)胰島素介導(dǎo)的磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)

    葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)通路及糖原合成通路達(dá)到降血糖效果。

    相較于傳統(tǒng)卵磷脂,水生來(lái)源的卵磷脂有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和更廣泛的應(yīng)用空間[23]。目前關(guān)于馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂改善胰島素抵抗的研究還很少,因此本研究首先對(duì)常見(jiàn)的2 種大馬哈魚(yú)籽(大馬哈魚(yú)籽和馬蘇大馬哈魚(yú)籽)的氨基酸組成、維生素和卵磷脂含量進(jìn)行測(cè)定,分析營(yíng)養(yǎng)組成;在此基礎(chǔ)上利用有機(jī)溶劑萃取法對(duì)馬蘇大馬哈魚(yú)籽中卵磷脂進(jìn)行提取,探究馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂對(duì)二肽基態(tài)酶-Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ)活性的抑制能力;并通過(guò)以人肝HepG2細(xì)胞為受體模型研究卵磷脂對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響,明確馬蘇大馬哈魚(yú)籽來(lái)源的卵磷脂對(duì)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的改善效果;同時(shí)結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)技術(shù),探究可能的作用機(jī)制,為魚(yú)籽深加工利用和提高附加值提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    大馬哈魚(yú)籽、馬蘇大馬哈魚(yú)籽 北京市水生野生動(dòng)植物救護(hù)中心北京鱘魚(yú)、鮭鱒魚(yú)團(tuán)隊(duì)贈(zèng)與。

    甲醇、正己烷、乙腈(均為色譜純) 北京化工廠;

    無(wú)水硫酸鈉、三氟乙酸 上海麥克林生化科技有限公司;DPP-Ⅳ 美國(guó)Sigma公司;DMEM高糖培養(yǎng)基 美國(guó)Corning公司;磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline(PBS),0.01 mol/L,pH 7.2、7.4) 北京酷來(lái)搏科技有限公司;葡萄糖(分析純) 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑(北京)有限公司;K576-100卵磷脂檢測(cè)試劑盒 美國(guó)

    Biovision公司;葡萄糖檢測(cè)試劑盒 南京建成生物科技有限公司;Trizol試劑 美國(guó)Invitrogen公司;PrimeScript第1鏈cDNA合成試劑盒 日本TaKaRa生物科技公司;SYBR Fast qPCR試劑盒 美國(guó)Kapa Biosystems生物技術(shù)有限公司;糖原分析試劑盒 中國(guó)北京索萊博生物有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    T1400S馬弗爐 鄭州天縱電氣設(shè)備有限公司;UDK142凱氏定氮自動(dòng)分析儀 意大利Velp公司;A300氨基酸自動(dòng)分析儀 德國(guó)曼默博爾公司;Synergy HT多功能酶標(biāo)儀、分光光度計(jì) 美國(guó)Bio-Tek公司;MCO15AC二氧化碳培養(yǎng)箱 日本三洋電機(jī)株式會(huì)社;7890A氣相色譜儀、1260高效液相色譜系統(tǒng) 美國(guó)安捷倫公司;7500 Fast Real Time PCR system 美國(guó)Applied Biosystems公司。

    1.3 方法

    1.3.1 魚(yú)籽處理

    將新鮮魚(yú)籽去除卵膜后,去離子水清洗,去除破碎物等,冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2 魚(yú)籽營(yíng)養(yǎng)成分分析

    1.3.2.1 氨基酸組成分析及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)

    樣品中除色氨酸、胱氨酸外的16 種氨基酸測(cè)定參照GB 5009.124—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸的測(cè)定》。樣品中的色氨酸、胱氨酸用氨基酸分析儀測(cè)定。

    營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)主要使用氨基酸評(píng)分(amino acid score,AAS)和化學(xué)評(píng)分(chemical score,CS)。AAS標(biāo)準(zhǔn)為聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織(Food and Agriculture Organization of the United Nations/World Health Organisation,F(xiàn)AO/WHO)提出的氨基酸評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)模式,CS為全雞蛋蛋白氨基酸模式。AAS和CS越接近1,則表明蛋白營(yíng)養(yǎng)價(jià)值越高。AAS、CS分別按式(1)~(2)計(jì)算。

    (1)

    (2)

    1.3.2.2 礦物質(zhì)、維生素及卵磷脂含量測(cè)定

    樣品經(jīng)前處理后按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行處理并上機(jī)檢測(cè)。Fe、Ca含量測(cè)定:采用原子吸收分光光

    度法[14];維生素含量測(cè)定:水溶性維生素用熒光測(cè)定法,脂溶性維生素采用高效液相色譜法[24];P含量測(cè)定:采用分光光度法[14];卵磷脂含量測(cè)定:采用卵磷脂檢測(cè)試劑盒。

    1.3.3 魚(yú)籽中卵磷脂的提取

    按照許艷萍等[25-26]的方法,使用有機(jī)溶劑萃取法提取卵磷脂。將1 g魚(yú)籽加入到10 mL去離子水中破碎后,加入9.5 mL體積分?jǐn)?shù)95%乙醇,在40 ℃條件下靜置2 h后離心(10 000 r/min、10 min),收集上清液,重復(fù)進(jìn)行上述醇沉步驟3 次后,將上清液冷凍干燥后備用。

    1.3.4 馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂DPP-Ⅳ抑制活性測(cè)定

    根據(jù)Zhang Yuyang等[27]描述的方法進(jìn)行測(cè)定。將0.5 g冷凍干燥后樣品及1 g DPP-Ⅳ分別溶解在100 mL 100 mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH 8.0)中,配制樣品溶液和DPP-Ⅳ溶液。取25 μL 5 mg/mL樣品溶液于96 孔板中,并加入25 μL 1.6 mmol/L Gly-Pro-對(duì)硝基苯胺,混合均勻后放置在37 ℃的烘箱中孵育10 min;之后每孔加入50 μL 8 U/L

    DPP-Ⅳ溶液,混合均勻后在37 ℃條件下精確反應(yīng)60 min;反應(yīng)結(jié)束時(shí)立即加入100 μL 1 mol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH 4.0)終止反應(yīng),使用酶標(biāo)儀在405 nm波長(zhǎng)處測(cè)定反應(yīng)液的吸光度。DPP-Ⅳ活性抑制率按式(3)計(jì)算。

    (3)

    式中:A樣品為25 μL樣品溶液+25 μL Gly-Pro-對(duì)硝基苯胺+50 μL DPP-Ⅳ;A樣品空白為25 μL樣品溶液+25 μL Gly-Pro-對(duì)硝基苯胺+50 μL Tris-HCl緩沖液;

    A陰性對(duì)照為25 μL Tris-HCl緩沖液+25 μL Gly-Pro-對(duì)硝基苯胺+50 μL DPP-Ⅳ;A陰性空白為25 μL Tris-HCl緩沖液+25 μL Gly-Pro-對(duì)硝基苯胺+50 μL Tris-HCl緩沖液。

    1.3.5 細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞模型的建立

    1.3.5.1 馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂對(duì)正常HepG2細(xì)胞活性的影響

    采用CCK8法測(cè)定馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂對(duì)HepG2細(xì)胞活性的影響。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞,用0.25 mg/100 mL胰蛋白酶溶液消化并用培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度為2×104 cell/mL,然后以每孔200 μL接種在96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,在37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后,吸棄舊培養(yǎng)基,依次向培養(yǎng)孔中添加馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂溶液,使其終質(zhì)量濃度分別為25、50、100、200、400、800 μg/mL,以不添加為空白組。培養(yǎng)24 h后,每孔加入20 μL 5 mg/mL CCK8試劑,繼續(xù)孵育4 h。培養(yǎng)結(jié)束后,用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,細(xì)胞存活率按式(4)計(jì)算。

    (4)

    式中:A卵磷脂為不同質(zhì)量濃度卵磷脂處理組吸光度;A空白為未加卵磷脂的空白組吸光度。

    1.3.5.2 胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型的建立及分組

    采用高糖高胰島素法建立胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HepG2細(xì)胞,用0.25 mg/100 mL胰蛋白酶溶液消化,調(diào)整細(xì)胞密度為2×104 cell/mL,以每孔200 μL接種在96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,加入含30 mmol/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基,于37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后,棄培養(yǎng)液,加入新配制的含終濃度10-6 mol/L胰島素的培養(yǎng)液,在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱孵育24 h,建立胰島素抵抗細(xì)胞模型。

    分別向HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型中加入終質(zhì)量濃度分別為25、50、100、200、400、800 μg/mL的馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂,在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育24 h,作為處理組。以加入終濃度10-3 mol/L二甲雙胍為陽(yáng)性對(duì)照組,無(wú)胰島素的空白孔為空白對(duì)照組。

    1.3.5.3 卵磷脂對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響

    按照葡萄糖檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)方法檢測(cè)1.3.5.2節(jié)處理前后培養(yǎng)基上清的葡萄糖含量,計(jì)算各組每孔中細(xì)胞的葡萄糖總消耗量。然后加入20 μL 5 mg/mL CCK8試劑,繼續(xù)孵育4 h后,用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,按照1.3.5.1節(jié)的方法計(jì)算每孔中活細(xì)胞數(shù)。HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗量按式(5)計(jì)算。

    (5)

    1.3.6 RT-qPCR檢測(cè)胰島素Akt信號(hào)通路中關(guān)鍵酶基因相對(duì)表達(dá)水平

    按照說(shuō)明書(shū)使用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA。使用PrimeScript第1鏈cDNA合成試劑盒對(duì)RNA樣本進(jìn)行cDNA合成。使用SYBR Fast qPCR試劑盒進(jìn)行RT-qPCR

    檢測(cè)。表1列出了糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK(3)β)、糖原合成酶(glycogen synthase,GS)、葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)4 種關(guān)鍵酶基因的特異性引物序列。以β-actin作為參照基因,采用2-ΔΔCt法計(jì)算各目的基因相對(duì)表達(dá)量。

    1.3.7 細(xì)胞內(nèi)糖原含量的測(cè)定

    使用糖原分析試劑盒測(cè)定細(xì)胞內(nèi)糖原含量,并進(jìn)行部分修改。含體積分?jǐn)?shù)10%的牛血清和體積分?jǐn)?shù)10%的青霉素-鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基加入6 孔板中,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106 cell/mL,每孔1 mL,培養(yǎng)12 h,然后將細(xì)胞于冰上用PBS緩沖液重懸(1 mL/孔),煮沸15 min以使胞內(nèi)酶失活,2 000 r/min離心15 min,收集上清液,在405 nm

    波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。糖原相對(duì)含量按式(6)計(jì)算。

    (6)

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    每組實(shí)驗(yàn)均進(jìn)行3 次平行。使用SPSS 20.0軟件(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)進(jìn)行單因素方差分析。采用Duncans檢驗(yàn)評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)之間的差異顯著性,

    P<0.05表示差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 大馬哈魚(yú)和馬蘇大馬哈魚(yú)魚(yú)籽氨基酸組成及營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)

    食品的氨基酸組成及含量決定其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高低。由表2可知,2 種魚(yú)籽中的氨基酸種類(lèi)齊全,共檢測(cè)出EAA 8 種、NEAA 10 種,18 種氨基酸的TAA含量分別為26.43 g/100 g(大馬哈魚(yú)籽)和31.14 g/100 g(馬蘇大馬哈魚(yú)籽),其中,EAA是指日常新陳代謝必需但人體不能自身合成的氨基酸,因而是評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)水平的最關(guān)鍵指標(biāo)[28-29]。EAA/TAA分別為45.21%(大馬哈魚(yú)籽)和44.28%(馬蘇大馬哈魚(yú)籽),符合且高于FAO/WHO標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的40%,說(shuō)明2 種魚(yú)籽均具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

    分析比較可以看出,馬蘇大馬哈魚(yú)籽的各項(xiàng)氨基酸含量均高于大馬哈魚(yú)籽,這可能是由于人工喂養(yǎng)的原因,飼料中的氨基酸組成和含量較為豐富造成的,馬蘇大馬哈魚(yú)籽中的谷氨酸含量最高,其次是天冬氨酸和蘇氨酸,含量分別為3.38、2.90、2.90 g/100 g,這3 種氨基酸均為呈味氨基酸,決定了馬蘇大馬哈魚(yú)籽具有更加獨(dú)特的風(fēng)味。

    人體含有的8 種必需氨基酸對(duì)機(jī)體的生長(zhǎng)、健康起著重要作用。如甲硫氨酸具有分解脂肪、預(yù)防脂肪肝的功能;色氨酸具有促進(jìn)睡眠和治療偏頭痛的作用,其中,纈氨酸作為必需氨基酸之一,最早的研究表明其具有加快傷口愈合、促進(jìn)生長(zhǎng)的作用,最近的研究發(fā)現(xiàn),纈氨酸具有降血糖的潛力等[30-31],測(cè)定分析也表明,馬蘇大馬哈魚(yú)籽中的纈氨酸含量(1.94 g/100 g)明顯高于大馬哈魚(yú)籽(1.72 g/100 g)。為了更加明確分析必需氨基酸的含量和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,結(jié)合FAO/WHO標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算AAS和CS。

    由表3可知,AAS測(cè)定結(jié)果表明,除色氨酸外,其余氨基酸AAS均大于1,說(shuō)明2 種魚(yú)籽均可以極大滿足FAO/WHO

    的推薦攝入,是優(yōu)質(zhì)的氨基酸攝入來(lái)源。CS測(cè)定結(jié)果顯示,色氨酸CS分別為0.49(大馬哈魚(yú)籽)和0.47(馬蘇大馬哈魚(yú)籽),小于0.5。以上結(jié)果說(shuō)明,2 種魚(yú)籽的第一限制氨基酸為色氨酸,但是色氨酸在谷類(lèi)、蔬菜類(lèi)植物中含量較為豐富,我國(guó)居民的膳食結(jié)構(gòu)長(zhǎng)期以谷物和植物膳食纖維為主,完全滿足人體自身的需求。

    在馬蘇大馬哈魚(yú)籽中,蘇氨酸的ASS為2.33,CS也高達(dá)1.98,顯著高于其他必需氨基酸的評(píng)分,說(shuō)明馬蘇大馬哈魚(yú)籽中蘇氨酸含量豐富。蘇氨酸具有保護(hù)細(xì)胞膜、促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育的作用,此外,隨著人們的深入研究,李川等[32]發(fā)現(xiàn),蘇氨酸具有降血糖和保護(hù)肝臟的作用,說(shuō)明馬蘇大馬哈魚(yú)籽具有降血糖的潛力。

    2.2 大馬哈魚(yú)和馬蘇大馬哈魚(yú)魚(yú)籽礦物質(zhì)、維生素及卵磷脂含量及營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)

    2.2.1 礦物質(zhì)元素含量分析

    *. 同一指標(biāo)組間有顯著差異(P<0.05)。圖2同。

    由圖1可知,2 種魚(yú)籽中含有豐富的Ca和P,Ca、P主要以無(wú)機(jī)鹽形式存在于體內(nèi),高含量的P可以較好促進(jìn)魚(yú)籽中Ca的吸收,滿足機(jī)體對(duì)Ca、P的需求。

    2 種魚(yú)籽中微量元素Fe含量也較為豐富,分別為24.8 mg/kg(大馬哈魚(yú)籽)和23.3 mg/kg(馬蘇大馬哈魚(yú)籽),顯著高于饒秋華等[33]測(cè)定的史氏鱘魚(yú)籽中Fe含量(22.07 mg/kg)。Fe作為人體所需的微量元素,具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功能,所以2 種魚(yú)籽均可以作為Fe的良好來(lái)源,用于補(bǔ)充人體所需。

    2.2.2 維生素含量分析

    維生素是一種有機(jī)化合物的統(tǒng)稱(chēng),每種維生素在體內(nèi)通常會(huì)參與多種反應(yīng),是維持機(jī)體健康所必需的物質(zhì)[34]。但是,人體自身幾乎不能合成維生素,所以必須由食物供給。為更加全面評(píng)價(jià)2 種魚(yú)籽的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,對(duì)2 種魚(yú)籽中常見(jiàn)的8 種維生素含量進(jìn)行測(cè)定。

    由圖2可知,大馬哈魚(yú)籽中VA和VD含量均高于馬蘇大馬哈魚(yú)籽,且2 種魚(yú)籽中VA和VD的含量均高于100 μg/100 g。VA和VD都是脂溶性維生素,通常在食物中共存,在動(dòng)物肝臟和蛋類(lèi)中含量較多,由于VA和VD在人體發(fā)育尤其是嬰幼兒視力和骨骼發(fā)育中起著重要作用,此外,VA和VD的缺乏可以引發(fā)妊娠期糖尿病[35],

    因此受到人們的關(guān)注。本研究結(jié)果也表明,大馬哈魚(yú)籽和馬蘇大馬哈魚(yú)籽可以作為VA、VD類(lèi)保健食品。

    B族維生素是一種水溶性維生素,促進(jìn)體內(nèi)代謝,是糖、脂肪、蛋白質(zhì)等轉(zhuǎn)化成能量不可缺少的物質(zhì)[36]。VB1是糖代謝的重要輔助因子,在醛基和糖基的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)中起輔酶作用,對(duì)神經(jīng)傳導(dǎo)和神經(jīng)元傳導(dǎo)具有輔助作用。大馬哈魚(yú)籽和馬蘇大馬哈魚(yú)籽VB1含量分別為410、436 μg/100 g,此外,一些研究表明糖尿病患者的血液中VB1含量低于正常值,而且VB1可以直接在體內(nèi)進(jìn)行體循環(huán),不需要載體分子即可進(jìn)行自由循環(huán),由于VB1在體內(nèi)存儲(chǔ)時(shí)間很短,容易被代謝,所以要保持其血液中含量就必須經(jīng)常攝入VB1,因此馬蘇大馬哈魚(yú)籽可以作為VB1的膳食補(bǔ)充來(lái)源。

    在檢測(cè)的6 種B族維生素中,除了VB1外,馬蘇大馬哈魚(yú)籽中VB5和VB12含量分別為1 990、1.3 μg/100 g,顯著高于大馬哈魚(yú)籽(1 700、0.61 μg/100 g)。VB5又稱(chēng)泛酸,是一種維生素輔酶A前體,長(zhǎng)期以來(lái)一直被認(rèn)為是各種有機(jī)體生化反應(yīng)的基本輔助因子,參與許多中間代謝反應(yīng),在葡萄糖、脂肪酸和氨基酸進(jìn)入產(chǎn)能的三羧酸循環(huán)、乙酰膽堿和脂肪酸的生物合成中起著關(guān)鍵作用。近年來(lái)的研究中,VB5主要集中在抗動(dòng)脈粥樣硬化的治療中,同時(shí),VB5在體內(nèi)也可以結(jié)合輔酶A來(lái)促進(jìn)抗氧化物質(zhì)谷胱甘肽的合成和表達(dá),減少氧化應(yīng)激和炎癥的發(fā)生。VB12俗稱(chēng)鈷胺素,是維生素大家族中分子質(zhì)量最大、結(jié)構(gòu)最復(fù)雜的一員,具有促進(jìn)脫鹵反應(yīng)的作用[37],同時(shí),在哺乳期外源補(bǔ)充VB12可以改善母乳中VB12的含量,并具有調(diào)節(jié)腸道菌群的能力。以上結(jié)果說(shuō)明,馬蘇大馬哈魚(yú)籽相比于大馬哈魚(yú)籽更適合作為維生素的補(bǔ)充來(lái)源,同時(shí),高含量的維生素(VA、VD、VB1、VB5)賦予馬蘇大馬哈魚(yú)籽降血糖的潛力。

    VB2又稱(chēng)核黃素,參與體內(nèi)氧化還原反應(yīng)和能量生成,可將色氨酸轉(zhuǎn)化為煙酸,可以提高機(jī)體對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力,VB2的缺乏會(huì)影響Fe的吸收,導(dǎo)致缺鐵性貧血,馬蘇大馬哈魚(yú)籽中VB2含量為533.3 μg/100 g。VB6是機(jī)體中很多酶系統(tǒng)的輔酶,參與氨基酸的脫羧作用、轉(zhuǎn)氨基作用和不飽和脂肪酸的代謝。VB9(葉酸)作為體內(nèi)生化反應(yīng)中的重要輔酶,參與DNA合成,促進(jìn)氨基酸代謝。大馬哈魚(yú)籽和馬蘇大馬哈魚(yú)籽中VB6和VB9含量分別為112.3、161.3 μg/100 g和263.7、98.7 μg/100 g。以上結(jié)果說(shuō)明,2 種魚(yú)籽均可以作為B族維生素的膳食補(bǔ)充劑。

    2.2.3 卵磷脂含量分析

    小寫(xiě)字母不同,表示差異顯著(P<0.05)。下同。

    由圖3可知,馬蘇大馬哈魚(yú)籽中卵磷脂含量(234 mg/g)顯著高于大馬哈魚(yú)籽(197 mg/g)。卵磷脂是一種多元醇的脂肪酸磷酸酯,結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜,主要分布在蛋黃中,研究發(fā)現(xiàn),水生來(lái)源的卵磷脂較陸生生物而言,富含二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)等,可預(yù)防冠狀動(dòng)脈心臟疾病、炎癥、癌癥及糖尿病等,也可以促進(jìn)嬰兒的大腦發(fā)育等[24]。Hossain等[38]研究表明,富含EPA和DHA的卵磷脂較普通卵磷脂而言,具有更好的滲透、轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收能力;Elaine等[21]通過(guò)大鼠模型發(fā)現(xiàn),水生來(lái)源的卵磷脂可以促進(jìn)胰島素分泌,從而具有降血糖能力,并可以預(yù)防糖尿病引起的肝臟疾病,可見(jiàn),水生來(lái)源的卵磷脂具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和降血糖能力。本研究結(jié)果也表明,馬蘇大馬哈魚(yú)籽中含有較為豐富的卵磷脂,卵磷脂含量較其他營(yíng)養(yǎng)元素而言占比較大,是水生卵磷脂的優(yōu)良來(lái)源,為深入研究卵磷脂的生物活性功能提供了良好的來(lái)源和充足的保證。

    2.3 馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂對(duì)DPP-Ⅳ活性的影響

    糖尿病是由于機(jī)體內(nèi)胰島素分泌缺陷或胰島素抵抗而引起的一種代謝疾病,治療方式主要以口服降血糖藥物或注射胰島素等為主[1],如雙胍類(lèi)、磺酰脲類(lèi)及一些酶抑制劑類(lèi)等。其中DPP-Ⅳ抑制劑是一種由766 個(gè)氨基酸組成的跨膜糖蛋白,由2 個(gè)單體以非共價(jià)形式結(jié)合而形成同源二聚體,作用方式是通過(guò)延長(zhǎng)具有刺激胰島素分泌、抑制餐后胰高血糖素分泌功能的腸降血糖素的壽命,從而起到降血糖的功效[6]。目前,已經(jīng)從牛乳、雞蛋、魚(yú)皮等中分離得到了具有DPP-Ⅳ抑制活性的產(chǎn)物。但是卵磷脂抑制DPP-Ⅳ活性的研究受到了研究者的關(guān)注,尤其是來(lái)源于馬蘇大馬哈魚(yú)籽的卵磷脂降血糖活性的研究鮮有報(bào)道。

    結(jié)合對(duì)馬蘇大馬哈魚(yú)籽中營(yíng)養(yǎng)成分的分析和比較,發(fā)現(xiàn)馬蘇大馬哈魚(yú)籽中富含多種營(yíng)養(yǎng)成分,且卵磷脂含量較高,因此對(duì)馬蘇大馬哈魚(yú)籽來(lái)源的卵磷脂進(jìn)行提取,卵磷脂含量純度為78%,并考察其對(duì)DPP-Ⅳ活性的抑制能力。

    由圖4可知,馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂對(duì)DPP-Ⅳ活性的抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴(lài)效應(yīng),即隨著卵磷脂質(zhì)量濃度的增加,對(duì)DPP-Ⅳ活性抑制率不斷增大,當(dāng)卵磷脂質(zhì)量濃度為800 μg/mL時(shí),抑制率可達(dá)87.26%。說(shuō)明馬蘇大馬哈魚(yú)籽來(lái)源的卵磷脂對(duì)DPP-Ⅳ活性的抑制效果較好,具有降血糖、改善胰島素抵抗的潛力。

    2.4 馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型葡萄糖消耗的影響

    胰島素抵抗是2型糖尿病的主要特征,是指細(xì)胞無(wú)法對(duì)胰島素刺激作出反應(yīng),包括胰島素對(duì)內(nèi)源性葡萄糖產(chǎn)生的抑制性效應(yīng)、胰島素對(duì)外周組織(主要是骨骼?。┢咸烟菙z取和糖原合成的刺激性效應(yīng)[3]。特征包括非氧化性葡萄糖糖原儲(chǔ)存減少、脂肪酸氧化受損、高胰島素血癥時(shí)脂肪酸和葡萄糖氧化轉(zhuǎn)換能力降低等,可造成人體內(nèi)正常的胰島素含量不能夠提升細(xì)胞的葡萄糖攝取能力,進(jìn)而提升糖尿病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

    肝臟作為胰島素作用的靶組織,具備貯存和分泌葡萄糖的能力,主要是通過(guò)調(diào)節(jié)糖異生、糖原合成和分解等過(guò)程之間的平衡,從而起到維持機(jī)體內(nèi)葡萄糖和血糖水平的穩(wěn)態(tài)。因此,通過(guò)提高機(jī)體細(xì)胞對(duì)葡萄糖的耐受性、增加葡萄糖的消耗可以緩解肝臟胰島素抵抗,降低血糖[39]。

    由圖5可知,隨著馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂質(zhì)量濃度的增加,HepG2細(xì)胞死亡率小于10%,表明馬蘇大馬哈魚(yú)籽來(lái)源的卵磷脂對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性。即使在卵磷脂質(zhì)量濃度為800 μg/mL時(shí),細(xì)胞存活率仍為90.25%,可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    由圖6可知,模型組葡萄糖消耗量為3.87 mmol/L,顯著低于空白對(duì)照組(5.86 mmol/L)(P<0.05),說(shuō)明模型建立成功。與模型組相比,陽(yáng)性對(duì)照組的葡萄糖消耗量為5.25 mmol/L,與空白對(duì)照組接近,說(shuō)明方法可靠。與模型組相比,馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂處理組均能夠促進(jìn)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的葡萄糖消耗,其中在質(zhì)量濃度為800 μg/mL時(shí),葡萄糖消耗量與空白對(duì)照組接近,為5.60 mmol/L。

    HepG2細(xì)胞是一種人源肝癌細(xì)胞,臨床表型與肝臟瘤細(xì)胞株極為相似,近年來(lái)作為體外研究胰島素抵抗、降血糖等疾病的理想細(xì)胞模型已被廣泛使用[31]。肝臟胰島素抵抗以胰島素促進(jìn)糖原合成能力減弱為主要特征,表現(xiàn)為機(jī)體或組織對(duì)葡萄糖的利用能力變差。Ansari等[13]

    利用高濃度胰島素(>30 mmol/L)刺激HepG2細(xì)胞,可以損傷肝細(xì)胞胰島素信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo),降低肝細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收及細(xì)胞內(nèi)糖原合成。本研究利用

    10-6 mmol/L濃度的胰島素刺激HepG2細(xì)胞,體外建立肝細(xì)胞胰島素抵抗模型,結(jié)果表明,馬蘇大馬哈魚(yú)籽來(lái)源的卵磷脂可以改善胰島素抵抗模型中細(xì)胞的葡萄糖消耗量,促進(jìn)葡萄糖的攝取。Hu Xin等[40]以胰島素抵抗HepG2細(xì)胞對(duì)葡萄糖吸收為指標(biāo)評(píng)價(jià)七葉蓮三萜皂苷對(duì)胰島素抵抗的改善作用,結(jié)果表明,七葉蓮三萜皂苷可以促進(jìn)胰島素抵抗模型對(duì)葡萄糖的消耗,改善胰島素抵抗效果,與本研究結(jié)果相類(lèi)似,說(shuō)明馬蘇大馬哈魚(yú)籽來(lái)源的卵磷脂具有改善肝細(xì)胞胰島素抵抗的生物學(xué)活性。

    2.5 馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂對(duì)葡萄糖代謝相關(guān)mRNA表達(dá)的影響

    胰島素信號(hào)通路異常是胰島素抵抗的主要原因,其中胰島素受體、胰島素受體底物-2、磷脂酰肌醇-3-激酶、磷酸活化的蛋白激酶、Akt和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4等信號(hào)傳導(dǎo)關(guān)鍵分子受損是導(dǎo)致胰島素抵抗的重要原因[34]。同時(shí)胰島素抵抗將會(huì)引起糖原合成酶激酶及糖原合成酶失調(diào),表現(xiàn)為糖原合成過(guò)程減弱;糖異生過(guò)程的關(guān)鍵酶PEPCK和G6Pase表達(dá)增加,使得糖異生過(guò)程增強(qiáng),最終導(dǎo)致組織對(duì)葡萄糖吸收減少,肝臟葡萄糖輸入增加。Akt通路作為調(diào)節(jié)GSK(3)β、GS、G6Pase和PEPCK等糖代謝酶活性的主要信號(hào)通路[40],信號(hào)傳導(dǎo)異常是胰島素抵抗發(fā)生的主要原因,在葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)、糖異生等代謝過(guò)程中發(fā)揮重要作用。為了評(píng)價(jià)卵磷脂對(duì)胰島素抵抗模型葡萄糖異生的影響,利用RT-qPCR探究糖異生調(diào)控途徑中4 種關(guān)鍵基因的mRNA表達(dá)情況。

    2.5.1 馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞關(guān)鍵糖異生基因表達(dá)的影響

    糖異生又稱(chēng)為葡糖異生,是指由簡(jiǎn)單的非糖前體(乳酸、甘油、生糖氨基酸等)轉(zhuǎn)變?yōu)樘牵ㄆ咸烟腔蛱窃┑倪^(guò)程[2]。由于糖異生作用越快,非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)化為糖的速度越快,空腹血糖就越高,因此糖異生是糖尿病發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵。PEPCK和G6Pase基因是糖異生過(guò)程中的關(guān)鍵限速基因[6]。胰島素抵抗發(fā)生時(shí),關(guān)鍵基因PEPCK和G6Pase在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)增加可上調(diào)糖異生速率。因此,通過(guò)抑制PEPCK和G6Pase的表達(dá),可以有效通過(guò)抑制糖異生速率來(lái)減緩和改善胰島素抵抗。

    由圖7可知,與空白對(duì)照組相比,模型組PEPCK和G6Pase mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào),分別為空白對(duì)照組的6.06、4.42 倍,經(jīng)400 μg/mL卵磷脂處理后,與模型組相比,PEPCK和G6Pase mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào),說(shuō)明卵磷脂可以一定程度上降低糖異生速率。

    2.5.2 馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞糖原合成關(guān)鍵基因表達(dá)的影響

    由圖8可知,與空白對(duì)照組相比,模型組GSK(3)β

    mRNA相對(duì)表達(dá)量上調(diào)(2.59 倍),高質(zhì)量濃度卵磷脂(400 μg/mL)處理后,GSK(3)β mRNA相對(duì)表達(dá)量下調(diào)(1.24 倍),與二甲雙胍組(1.26 倍)接近。另一方面,與空白對(duì)照組相比,400 μg/mL卵磷脂處理后GS mRNA相對(duì)表達(dá)量上調(diào)(1.20 倍),與陽(yáng)性對(duì)照組相接近(1.26 倍)。這是由于在胰島素抵抗時(shí),肝臟中抑制糖原合成的關(guān)鍵酶GSK(3)β被激活,GSK(3)β表達(dá)上調(diào),導(dǎo)致GS活性喪失,基因表達(dá)水平下調(diào),進(jìn)而導(dǎo)致糖原合成受阻[41-42]。因此,通過(guò)改善肌肉和/或肝臟的胰島素抵抗,抑制GSK(3)β表達(dá)被認(rèn)為是治療2型糖尿病的新靶點(diǎn)。

    2.6 馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂對(duì)細(xì)胞內(nèi)糖原合成的影響

    先前的研究[6]發(fā)現(xiàn),處于胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)的HepG2細(xì)胞顯示細(xì)胞內(nèi)糖原合成受阻,表現(xiàn)出糖原含量降低的現(xiàn)象,同時(shí)胰島素介導(dǎo)的糖原合成與Akt通路中的相關(guān)基因表達(dá)相關(guān),如GSK(3)β、GS的異常表達(dá)。在明確了卵磷脂可以調(diào)節(jié)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞糖原合成基因的表達(dá)后,對(duì)細(xì)胞內(nèi)糖原含量進(jìn)行檢測(cè)。

    由圖9可知,經(jīng)400 μg/mL卵磷脂處理后,胰島素抵抗HepG2細(xì)胞內(nèi)糖原相對(duì)含量從30.67%增加到73.00%,且呈現(xiàn)一定的質(zhì)量濃度依賴(lài)效應(yīng)。說(shuō)明馬蘇大馬哈魚(yú)籽來(lái)源的卵磷脂對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞中糖原的合成具有調(diào)節(jié)作用。

    根據(jù)以上結(jié)果可以說(shuō)明,卵磷脂處理細(xì)胞后,一方面通過(guò)抑制胰島素抵抗模型中PEPCK和G6Pase的表達(dá),起到降低糖異生的作用,另一方面,通過(guò)抑制GSK(3)β基因的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá),激活GS基因,使得糖原合成受到GS的正向調(diào)控,促進(jìn)糖原的合成,從而起到緩解胰島素抵抗、降低血糖的作用。

    3 結(jié) 論

    魚(yú)籽富含多種生物活性功能成分,是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高的食品。本研究定量分析和比較大馬哈魚(yú)籽和馬蘇大馬哈魚(yú)籽中氨基酸、維生素和卵磷脂,結(jié)果顯示,馬蘇大馬哈魚(yú)籽中氨基酸和B族維生素及卵磷脂含量較高,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值優(yōu)于大馬哈魚(yú)籽。進(jìn)一步利用HepG2細(xì)胞,通過(guò)胰島素誘導(dǎo)構(gòu)建胰島素抵抗模型,考察馬蘇大馬哈魚(yú)籽來(lái)源的卵磷脂降血糖活性和可能的作用機(jī)制,結(jié)果表明,馬蘇大馬哈魚(yú)籽卵磷脂可以抑制DPP-Ⅳ活性、降低糖異生相關(guān)基因的表達(dá)、促進(jìn)糖原合成基因的表達(dá),從而通過(guò)恢復(fù)胰島素信號(hào)通路緩解胰島素抵抗,改善葡萄糖攝取,起到調(diào)節(jié)血糖平衡、降低血糖的效果。本研究為開(kāi)發(fā)馬蘇大馬哈魚(yú)籽的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值、提高綜合利用率提供了重要信息和參考,也為開(kāi)發(fā)魚(yú)籽生物活性功能研究提供了新思路。

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