不同產(chǎn)地大黃質量優(yōu)劣評價研究＊

靳貴林，戴 迪，馮明科，李 雪，楊春艷

（西藏藏醫(yī)藥大學，西藏 拉薩 850000）

大黃藥用歷史悠久，氣味苦寒，無毒，主下疲血、血閉、寒熱，破癥癮積聚、留飲宿食，滌蕩腸胃、推陳致新、通利水谷、調中化食、安和五臟，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]?！睹t(yī)別錄》[2]有云“生河西山谷及隴西”，據(jù)考證其中所述“河西”即指甘肅張掖、武威，隴西為甘肅臨洮。《唐本草》[3]中記載有:“今出宕州、涼州，西羌蜀地者皆佳”。據(jù)考證“宕州”即為甘肅岷縣以南宕昌以北，涼州為今甘肅武威，西羌蜀地為四川北部。《本草綱目》[4]中有云“今以莊浪出者為最”據(jù)考證“莊浪”為現(xiàn)今甘肅東部，六盤山西麓。據(jù)本草記載可知古代大黃主產(chǎn)于今天甘肅的張掖、武威、臨洮一帶；現(xiàn)而今大黃種類主要有涼州大黃、銓水大黃、河州大黃、西寧大黃、雅黃；涼州大黃主產(chǎn)于甘肅武威，銓水大黃主產(chǎn)于禮縣，河州大黃主產(chǎn)于瑪曲，西寧大黃主產(chǎn)于青海同仁，雅黃主產(chǎn)于四川雅安。

現(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)大黃總蒽醌對雌性大鼠性激素水平、性周期和下丘腦、垂體組織結構均可逆損害[5]。大黃對大鼠脊髓損傷有保護作用[6]，同時具有抗炎作用[7]，大黃總蒽醌膠囊含藥血清具有肝細胞保護和毒性雙向作用[8]，大黃酚可降低細胞內總膽固醇和甘油三酯的含量,減輕肝細胞脂肪變性,改善脂質代謝的作用[9]。大黃具有重要的藥理藥效，其種植地較為分散，專家學者對大黃的質量優(yōu)劣也是各持己見；故而本實驗選取不同產(chǎn)地（武威、禮縣、瑪曲、青海同仁、四川雅安）的大黃，以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚為指標性成分[10]分別計算其總蒽醌及游離蒽醌含量,并以總蒽醌及游離蒽醌含量、浸出物為指標評價不同產(chǎn)地大黃質量優(yōu)劣，以期對不同產(chǎn)地大黃質量控制和安全性評價提供一定的依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 實驗材料及儀器

1.1.1 儀器

水浴鍋（鄭州長城科工貿有限公司；220 v、50 Hz1.5 kW 型號：WB-2000）；旋轉蒸發(fā)儀（鄭州長城科工貿有限公司）；超聲儀器（江蘇昆聲市超聲儀器有限公司；220 v、100 W，Q/320583GSFY008-2006）；LC-20 AT 高效液相色譜儀；AT.Lichom C18 液相分析色譜柱（250 mm×4.6 mmid.5 um，蘭州中科凱特）；分析天平（北京賽多利斯有限公司iso 9001）；錐形瓶、容量瓶、試管。

1.1.2 試劑

正丁醇(天津化學試劑有限公司)、甲醇（山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司）、三氯甲烷(天津化學試劑有限公司)、鹽酸(天津市大茂化學試劑廠)、磷酸（天津市大茂化學試劑廠）、蘆薈大黃素(中國食品藥品檢定研究院)、大黃酸(中國食品藥品檢定研究院)、大黃素(中國食品藥品檢定研究院)、大黃酚(中國食品藥品檢定研究)、大黃素甲醚(中國食品藥品檢定研究院)。

1.1.3 供試藥材

采收不同產(chǎn)地的大黃樣品各三份，藥材信息見表1：

表1 供試藥材

1.2 實驗方法

1.2.1 供試品制備

總蒽醌類化合物提取：精密稱取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.15 g，置于100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液5 mL，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10 mL，超聲2 min，再加三氯甲烷10 mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗中。用少量三氯甲烷洗滌容器，合并三氯甲烷溶液于分液漏斗。萃取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3 次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑，殘渣加甲醇溶解，定容于10 mL 量瓶中，濾過，取續(xù)濾液，待用。

游離蒽醌化合物提取：精密稱取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.15 g，置于100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.2 對照品制備

精密稱取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚對照品4 mg，大黃素甲醚對照品2 mg，加甲醇溶解，并定容于50 mL 容量瓶，既得每1 mL 含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各80 μg，大黃素甲醚40 μg 的標準品溶液；分別精密量取上述對照品溶液各2 mL，混勻，定容于10 mL 容量瓶，即每1 mL中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各16 μg，含大黃素甲醚8 μg 的標準品溶液。

1.2.3 標準曲線制作

取每l mL 中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各16 μg，含大黃素甲醚8 μg 的對照品溶液2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動相；在波長為254 nm 檢測波長下進樣，計算峰面積，以峰面積為y 軸，進樣量為x 軸制作標準曲線，得出蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚標準曲線如圖1 所示。

圖1 蘆薈大黃素標準曲線

y=113 529.8x+6.292 68，r=0.999；

y=83 075.27x-1.478 7，r=0.999;

y=84 817.32x-0.585 4，r=0.999;

y=710 48.93x-0.707 3，r=0.999;

y=124 88.50x-0.219 5，r=0.999。

1.2.4 精密度實驗

取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、含大黃素甲醚的標準品溶液，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動相；在波長為254 nm 用HPLC 測定峰面積，計算RSD 值小于2%，精密度較好。

1.2.5 穩(wěn)定性實驗

取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.1 g，置于100 mL 錐形瓶中，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL 制備，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動相；在波長為254 nm 于30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、10 h、12 h，用HPLC 測定峰面積，計算蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量，結果表明0.5～12 h 內RSD 值小于2%，穩(wěn)定性較好。

1.2.6 重現(xiàn)性實驗

取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.1 g，置于100 mL 錐形瓶中，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL 制備，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動相；在波長為254 nm，用HPLC 測定峰面積，計算蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量，結果表明RSD 值小于2%，重現(xiàn)性較好。

1.2.7 加樣回收實驗

取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.1 g，置于100 mL 錐形瓶中，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL 制備，加入蘆薈大黃素標準品，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動相；在波長為254 nm 測定峰面積，計算加樣回收率，見表2。

表2 加樣回收考察結果

結果顯示平均回收率為99.14%，RSD=1.0%<2%，回收率較為穩(wěn)定可靠。

1.3 總蒽醌類化合物含量測定

1.3.1 總蒽醌類化合物提取

精密稱取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.15 g，置于100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，按總蒽醌類化合物提取方法制備供試品溶液。

1.3.2 指標性成分峰位確定

取每1 mL 中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各16 μg，含大黃素甲醚8 μg 的標準品溶液10 μL，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動相；在波長為254 nm 處測定峰位，如圖2 所示。

圖2 標準品溶液峰位圖

精密稱取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.15 g，置于100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，按總蒽醌類化合物提取方法制備供試品溶液，進樣10 uL，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動相；在波長為254 nm 處測定峰位，確定指標性成分，如圖3所示。

圖3 蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚峰位確定

上圖峰位確定如下，1 號峰為蘆薈大黃素，2 號峰為大黃酸，3 號峰為大黃素，4 號峰為大黃酚，5 號峰為大黃素甲醚。

1.3.3 總蒽醌類化合物含量測定

精密稱取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.15 g，置于100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，按總蒽醌類化合物提取方法制備供試品溶液，進樣10 uL，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動相；在波長為254 nm 處測定峰面積，計算總蒽醌含量見表3。

表3 總蒽醌類化合物含量測定（%）

1.4 游離蒽醌類化合物含量測定

1.4.1 游離蒽醌類化合物提取

精密稱取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.15 g，置于100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，按游蒽醌類化合物提取方法制備供試品溶液。

1.4.2 指標性成分峰位確定

精密稱取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.15 g，置于100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，按游蒽醌類化合物提取方法制備供試品溶液，進樣10 uL，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動相；在波長為254 nm 處測定峰位，確定指標性成分，如圖4 所示：

圖4 蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚峰位確定

上圖峰位確定如下，1 號峰為蘆薈大黃素，2 號峰為大黃酸，3 號峰為大黃素，4 號峰為大黃酚，5 號峰為大黃素甲醚。

1.4.3 游離蒽醌類化合物含量測定

精密稱取60 ℃下干燥2 h 過40 目篩的大黃0.15 g，置于100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，按游蒽醌類化合物提取方法制備供試品溶液，進樣10 μL，以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）為流動相；在波長為254 nm 處測定峰面積，計算游蒽醌含量見表4。

表4 游離蒽醌類化合物含量（%）

2 數(shù)據(jù)處理

2.1 總蒽醌含量數(shù)據(jù)分析

以產(chǎn)地為X 軸，總蒽醌含量、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量為Y 軸，建立柱狀圖5。B 為總蒽醌含量，C 為大黃素甲醚含量，D為大黃酚含量，E 為大黃素含量，F(xiàn) 為大黃酸含量,G為蘆薈大黃素含量；1 為武威，2 為禮縣，3 為瑪曲，4 為青海，5 為四川。由圖5 可見禮縣所產(chǎn)大黃總蒽醌含量最高為2.12%，武威所產(chǎn)大黃總蒽醌含量為1.62%，四川所產(chǎn)大黃總蒽醌含量為1.70%，青海所產(chǎn)大黃總蒽醌含量為1.96%。

圖5 總蒽醌含量數(shù)據(jù)分析

2.2 游離蒽醌含量數(shù)據(jù)分析

以產(chǎn)地為X 軸，游離蒽醌含量、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量為Y 軸，建立柱狀圖6；B 為游離蒽醌含量，C 為大黃素甲醚含量，D 為大黃酚含量，E 為大黃素含量，F(xiàn) 為大黃酸含量,G 為蘆薈大黃素含量；1 為武威，2 為禮縣，3 為瑪曲，4 為青海，5 為四川。由圖6 可見禮縣所產(chǎn)大黃游離蒽醌含量最高為2.04%，武威所產(chǎn)大黃游離蒽醌含量為1.30%，四川所產(chǎn)大黃游離蒽醌含量為1.15%，青海所產(chǎn)大黃游離蒽醌含量為1.72%。

圖6 游離蒽醌含量數(shù)據(jù)分析

3 結論

大黃蒽醌類化合物為其瀉下成分，總蒽醌類化合物及游離蒽醌類化合物含量的高低決定了其藥用價值。以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚為指標性成分，用HPLC 測定其含量來評價不同產(chǎn)地大黃質量的優(yōu)劣，其方法簡單穩(wěn)定可行[11-12]；通過數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)采收的樣品中禮縣所產(chǎn)大黃所含總蒽醌類化合物及游離蒽醌類化合物含量較高，同時說明禮縣所產(chǎn)大黃的質量要優(yōu)于其他產(chǎn)地所產(chǎn)大黃。