GC法同時測定連花清瘟膠囊中百秋李醇、薄荷腦的含量

劉艷平，張秀花，曾慶真，李懷偉，朱 山

（菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院，山東 菏澤 274000）

連花清瘟膠囊由連翹、金銀花、炙麻黃、炒苦杏仁、石膏、板藍(lán)根、綿馬貫眾、魚腥草、廣藿香、大黃、紅景天、薄荷腦、甘草十三味中藥組方[1]，具有良好的清瘟解毒，宣肺泄熱功效，治療熱毒襲肺證的流行感冒。目前連花清瘟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測定僅針對連翹，尚未對市場問題較多的廣藿香、薄荷腦進(jìn)行質(zhì)量控制。前期有文獻(xiàn)對組方中的薄荷含量進(jìn)行質(zhì)控[2]，未發(fā)現(xiàn)同時測定廣藿香、薄荷腦含量的報道。查閱《中華人民共和國藥典》2020年版一部發(fā)現(xiàn)，百秋李醇、薄荷腦分別為檢測廣藿香和薄荷的指標(biāo)性成分。其中百秋李醇是廣藿香揮發(fā)油中倍半萜類成分，薄荷腦是薄荷中單萜類成分，其分子量小，易揮發(fā)，沸點較低，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，宜于用氣相色譜法檢測其含量。本實驗室通過GC法同時測定組方中的廣藿香（百秋李醇）、薄荷腦含量測定，方法簡便，穩(wěn)定性可靠，可有效地控制連花清瘟的質(zhì)量，保證其臨床用藥安全性提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

7890B安捷倫氣相色譜儀（美國安捷倫公司，配置Openlab CDS 2色譜工作站）；XS-105電子天平（上海梅特勒）；KQ3200E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

薄荷腦對照品（110728-201707，含量為99.8 %）、百秋李醇對照品（110722-201608，含量為 99.8 %）均購自中國食品藥品檢定研究院；乙酸乙酯（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；3批市售連花清瘟膠囊，重新編號分別為：s1，s2，s3。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 取百秋里醇對照品、薄荷腦對照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯溶解并稀釋制成：（1）含百秋李醇 20.98 μg/ml，薄荷腦0.4260 mg/ml的混合溶液；（2）分別含百秋李醇0.5245 mg/ml，薄荷腦 10.65 mg/ml 的溶液。

2.1.2 供試品溶液制備 取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約1.5 g，精密稱定，置入具塞錐形瓶，精密加入乙酸乙酯25 ml，稱定重量，超聲處理30 min（功率250 W，頻率40 kHz），取出，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，0.45 μm濾膜過濾，即得。

2.1.3 陰性樣品溶液 按處方比例及工藝，制備缺廣藿香、薄荷的陰性樣品，按照“2.1.2”項方法制備相應(yīng)的溶液，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱：安捷倫HP-5MS色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；程序升溫：起始溫度40 ℃，保持5 min，以8 ℃/min升至180 ℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度240 ℃；FID檢測器溫度250 ℃；分流比10:1；氣體流速1 ml/min；進(jìn)樣量1 μl。

2.3 專屬性試驗

精密量取“2.1”項下對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各適量，按照“2.2”項下條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，對照品溶液色譜圖中兩組分峰能夠完全分離；供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜圖相應(yīng)位置上有相同保留時間的色譜峰；陰性對照溶液對測定無干擾，專屬性好。

圖1 GC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取2.1.1項下溶液2，4，8，10，12，15 μl，按照“2.2”項下條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。以對照品的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），以峰面積值為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸，回歸方程百秋醇Y=43.525X-1.2139，r=0.9999；薄荷腦 Y=306.38X+26.494，r=0.9995；在0.8520 ～6.390 μg 范圍內(nèi)百秋李醇有良好的線性關(guān)系；在41.96 ～629.4 ng范圍內(nèi)薄荷腦有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實驗

精密吸取同一供試品溶液（s1），進(jìn)樣1 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，百秋李醇峰面積RSD為0.12 %，薄荷腦峰面積RSD為0.12 % ，表明儀器的精密度較好。

2.6 重復(fù)性

取同一批號（s1）供試品粉末6份，按照“2.1.2”項方法制備溶液，按照“2.2”項條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果百秋里醇平均含量0.26695，RSD為0.26 %，薄荷腦平均含量19.78，RSD為0.31 %（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品溶液（s1），分別于溶液制備后0，2，4，8，12，24 h進(jìn)樣測定，百秋李醇峰面積RSD為0.26 %，薄荷腦峰面積RSD為0.41 %，即供試液溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加標(biāo)回收率試驗

取同一批號（s1）供試品粉末適量，精密稱定，按照“2.1.2”項方法制備溶液，加入“2.1.1”項下（2）百秋李醇對照溶液 0.8 ml， 薄荷腦對照溶液1 ml，按照“2.2”項條件進(jìn)樣，測定供試品中百秋李醇及薄荷腦的含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

2.9 供試品含量測定

取3個批次連花清瘟膠囊，精密稱定，按照2.1.2項下制備溶液，按照2.2項下條件進(jìn)樣，測定每份供試品中百秋李醇及薄荷腦含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3 討論

由于中藥材廣藿香含量批次之間不均，薄荷腦具有揮發(fā)性，在生產(chǎn)過程中存在投料不勻，未嚴(yán)格按照要求貯藏，導(dǎo)致產(chǎn)品批次之間含量測定結(jié)果不均，是含量測定結(jié)果的RSD偏高的主要原因。

根據(jù)百秋李醇、薄荷腦的性質(zhì)，參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-8]，考察了超聲提取、超聲加冰兩種方法，并對正己烷、環(huán)己烷、無水乙醇、乙酸乙酯等不同溶劑和提取時間進(jìn)行綜合考察。結(jié)果表明，乙酸乙酯提取效果最好，最終選擇用毒性小，價格便宜的乙酸乙酯作為提取溶劑，加冰與不加冰超聲提取無顯著差別，最終選擇了簡單省時的超聲提取方法。

本方法用GC同時測定連花清瘟膠囊中的薄荷腦、百秋李醇兩種成份含量的方法，專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性較好，準(zhǔn)確度高，回收率較好，簡單方便，能較好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，可為連花清瘟膠囊的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。