RPA1基因多態(tài)性與晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效的相關性

沙金平 薛 萌 謝媛媛

結直腸癌又稱大腸癌，屬于人體最常見的惡性腫瘤之一，晚期結直腸癌的治療以化療為主，鉑類藥物是其常用化療藥物[1-2]。研究表明，RPA1基因與鉑類等化療藥物耐藥性的產生息息相關，其基因多態(tài)性與多種腫瘤化療后臨床療效與總體生存期密切相關[3-4]。在上述研究背景下，本研究探討了RPA1基因多態(tài)性與晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效的相關性，為臨床制定結直腸癌患者個性化治療方案提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2015年8月至2017年8月本院的晚期結直腸癌患者92例作為研究對象，納入標準：均符合《臨床腫瘤內科手冊》中晚期結直腸癌的病理學診斷標準[5]。排除標準：合并除結直腸癌外其他惡性腫瘤者；對本研究所用藥物過敏及不耐受者；非首次治療者；適宜手術治療者；臨床病理資料不全者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會會議表決通過。

1.2 方法

基因分型：在給予鉑類藥物化療前采集所有患者外周靜脈血5 ml，置于抗凝管內靜置1.5 h，用離心機(德國Hettich，ROTOFIX32A)離心10 min，轉速3 000 r/min，用移液槍抽取上清液置入微型離心管中，-80 ℃保存?zhèn)溆谩Ｈ〕鰝溆醚?，用水浴鍋預熱5 min，溫度37 ℃，預熱畢取血清200 μl，用DNA提取試劑盒提取患者外周血清總DNA，用基因分型試劑盒、熒光定量試劑盒、PCR儀(美國ABI，QuantStudio3)對RPA1基因進行標記、擴增，用SDS軟件對擴增后產物進行基因分型。相關試劑盒操作流程均嚴格參照試劑和儀器說明書。藥物治療：對所有患者給予奧沙利鉑注射液靜脈滴注2 h，每次劑量130 mg/m2，每3周給藥1次。整個療程為3個月。分組：根據(jù)RPA1基因型的不同將患者分為CC組、CT組、TT組。

1.3 觀察指標

(1)觀察所有患者RPA1基因分型結果。(2)療程結束后，參照《RECIST療效評價標準》[6]，對所有患者進行療效評定，以腫瘤病灶消失視為完全緩解(complete remission，CR)；以腫瘤病灶最大直徑縮小30%以上視為部分緩解(partial remission，PR)；以腫瘤最大直徑縮小30%以下或增大20%以下視為病情穩(wěn)定(stable Disease，SD)；以腫瘤最大直徑增大20%以上視為病情惡化(progression disease，PD)。總有效=CR+PR+SD。比較CC組、CT組、TT組之間的療效差異。(3)將CR、PR、SD患者劃分為有效組，將PD患者劃分為無效組，比較2組一般資料差異，并對相關影響因素進行Logistic回歸分析，觀察晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效的獨立影響因素。(4)對患者進行為期2年的門診、電話隨訪，第1年前6個月每半月1次，后6個月每月1次，第2年每2個月1次，記錄CC+CT組、TT組的總生存期(overall survival，OS)情況。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 RPA1基因分型結果

本研究92例晚期結直腸癌患者中，RPA1基因116為密碼子中第二位堿基共存在3種等位基因型，分別為CC型(n=38)、CT型(n=28)、TT型(n=26)，基因出現(xiàn)頻率分別為41.31%、30.43%、28.26%。

2.2 CC組、CT組、TT組治療后臨床療效比較

CC組、CT組、TT組總體臨床療效與治療總有效率比較，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；組間比較，CC組、CT組治療總有效率明顯高于TT組(P<0.05)，CC組與CT組治療總有效率無明顯差異(χ2=0.001，P>0.05)。見表1。

表1 CC組、CT組、TT組治療后臨床療效比較(例，%)

2.3 有效組與無效組一般資料比較

單因素分析結果顯示，有效組與無效組在有無癌栓、RPA1基因分型上差異明顯(P<0.05)。見表2。

表2 有效組與無效組一般資料比較

2.4 影響化療療效的Logistic多因素回歸分析

將晚期結直腸癌患者化療療效作為因變量，將單因素分析中差異具有統(tǒng)計學意義的因素(有無癌栓、RPA1基因分型)作為自變量，并進行賦值，晚期結直腸癌患者化療療效(有效=0，無效=1)，有無癌栓(無=0，有=1)、RPA1基因分型(CC型或CT型=0，TT型=1)，將上述數(shù)據(jù)納入Logistic回歸模型，結果顯示，RPA1基因分型是晚期結直腸癌患者鉑類藥物臨床療效的獨立影響因素(OR=1.570，P<0.05)。見表3。

表3 晚期結直腸癌患者化療療效的Logistic多因素回歸分析

2.5 不同RPA1基因型患者用藥后的生存分析

CC+CT組中位OS為18個月，TT組中位OS為6個月；CC+CT組2年內生存率92.42%，TT組2年內生存率為57.69%，差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=32.212，P<0.05)。生存曲線分析結果顯示，CC+CT組2年內生存情況明顯優(yōu)于TT組，經(jīng)Log-rank檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=33.590，P<0.05)。見圖1。

圖1 不同RPA1基因型患者用藥后的生存曲線

3 討論

結直腸癌早期多無明顯癥狀，晚期可表現(xiàn)為大便性狀改變、腹痛、腹脹、發(fā)熱、貧血、消瘦、腹部包塊、腸梗阻等，可因腫瘤轉移而累及其他器官，導致多器官功能障礙，嚴重威脅患者生命健康[7]。鉑類藥物是臨床用于治療晚期結直腸癌的常用化療藥物，但其臨床療效具有個體差異性，其差異形成原因尚且不明[8]。據(jù)相關文獻報道，RPA1基因可參與多種惡性腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展，與多種惡性腫瘤患者化療后的無進展生存率相關[9]。現(xiàn)為探討RPA1基因多態(tài)性與晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效的相關性，特做此研究。

本研究結果顯示，CC組、CT組、TT組總體臨床療效與治療總有效率比較，差異具有統(tǒng)計學意義；兩組間比較，CC組、CT組治療總有效率明顯高于TT組，而CC組與CT組治療總有效率無明顯差異，提示整體上，不同RPA1基因型的晚期結直腸癌患者用鉑類藥物治療的效果存在明顯差異，其中CC型、CT型患者臨床療效要優(yōu)于TT型患者。究其原因，鉑類化療藥物的藥理機制主要是通過產生水化衍生物靶向作用于DNA，與DNA雙鏈共價結合，易形成鏈內或鏈間的相互交聯(lián)，從而干擾腫瘤細胞DNA結構的正常復制[10]。研究表明，RPA1基因可合成一種具有高度保守蛋白序列的RPA1蛋白，此蛋白可與啟動子上游含大量GATA序列的順式作用元件相結合，能抑制腫瘤細胞惡性增殖所需蛋白的表達，同時可促進鉑類藥物與腫瘤細胞DNA的靶向結合，與鉑類藥物發(fā)揮協(xié)同抑癌作用[11]。而研究表明，CC型、CT型RPA1基因均可正常合成RPA1蛋白，TT型RPA1基因由于密碼子發(fā)生無義突變，RPA1蛋白表達缺失，因此抑癌作用明顯弱于CC型、CT型[12]。

本研究Logistic多因素回歸分析結果顯示，RPA1基因分型是晚期結直腸癌患者鉑類藥物臨床療效的獨立影響因素(OR=1.570，P<0.05)；生存曲線分析結果顯示，CC+CT組2年內生存情況明顯優(yōu)于TT組，提示RPA1基因多態(tài)性與晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效的密切相關，TT型RPA1基因是晚期結直腸癌患者鉑類藥物治療無效的獨立危險因素。探究其機制，研究表明，DNA修復功能是人體保持基因穩(wěn)定性的重要保障，鉑類化療藥物通過破壞腫瘤細胞DNA正常雙鏈結構，抑制其DNA復制過程，從而發(fā)揮抑癌效應，因此DNA修復功能的個體化差異是晚期結直腸癌患者用鉑類藥物治療后出現(xiàn)療效差異的關鍵因素[13-14]。相關研究表明，RPA1基因CC型、CT型患者由于10號外顯子密碼子發(fā)生突變，導致氨基酸編碼序列變化，從而影響DNA修復功能，導致其對鉑類藥物的耐藥性要低于RPA1基因TT型患者[15]，因此RPA1基因CC型、CT型晚期結直腸癌患者鉑類藥物的臨床療效優(yōu)于RPA1基因TT型患者。

綜上所述，TT型RPA1基因是晚期結直腸癌患者鉑類藥物治療無效的獨立危險因素；RPA1基因多態(tài)性與晚期結直腸癌鉑類藥物臨床療效密切相關，有望成為預測臨床療效的新指標。