乳酸脫氫酶與脂肪細(xì)胞因子resistin在胰腺癌中的表達及其臨床意義

尚鴛鴛 朱桂麗 邢建強

胰腺癌是1種惡性程度很高的消化道惡性腫瘤[1-3]，死亡率較高，診斷和治療均存在較大困難[4-5]。相關(guān)學(xué)者[6]發(fā)現(xiàn)肥胖人群中胰腺癌的發(fā)病率明顯高于普通人群，但其機制尚不明確[7-8]。目前臨床采取的治療仍然是以外科手術(shù)治療為主，并結(jié)合放化療等綜合治療[9-11]。雖然手術(shù)是唯一可能根治的方法，但已有相關(guān)研究指出胰腺癌早期診斷困難，因此其治愈性切除率僅5%，術(shù)后5年生存率低且并發(fā)癥多[12]。早期診斷和靶向治療可以成為綜合治療的手段彌補手術(shù)治療的不足。部分研究者認(rèn)為監(jiān)測癌胚抗原CEA和糖類抗原CA19-9能夠早期提示胰腺癌患者的病情輕重并指導(dǎo)手術(shù)治療[13-15]，然而其診斷結(jié)果假陽性率高。有研究發(fā)現(xiàn)乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase，LDH)和脂肪細(xì)胞因子resistin與胰腺癌預(yù)后有關(guān)。本文通過檢測胰腺癌患者的LDH和resistin表達的情況，探討乳酸脫氫酶與脂肪細(xì)胞因子resistin在胰腺癌中的表達及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

2013年6月至2019年1月我院收治的135例胰腺癌患者，男性78例，女性57例，年齡42～75歲，平均年齡(56.28±8.16)歲。參考2002年日本胰腺病協(xié)會修訂的分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期12例，Ⅱ期42例，Ⅲ期63例，Ⅳ期18例。收集患者的病理蠟塊患者均對本研究知情且簽署同意書。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前未行放化療；②病理確診為胰腺癌；③接受根治性手術(shù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神疾病；②患者或家屬不同意簽知情協(xié)議書。

1.3 研究方法

將入組胰腺癌患者病理蠟塊制備成切片后，依照試劑盒的說明書按次脫蠟，水化和抗原修復(fù)，滴入一抗兔抗人resistin抗體(SigmaR1779)，稀釋濃度比值1∶200，磷酸緩沖溶液(PBS)作為陰性對照組，經(jīng)沖洗后切片滴入二抗IgG(Dako EnVision K5007)，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，封片及鏡檢。

采集經(jīng)病理明確診斷的胰腺癌患者血清乳酸脫氫酶，通過TIMER數(shù)據(jù)庫搜索LDH在135例胰腺癌組織中和正常胰腺組織中的差異表達及臨床預(yù)后等情況。

1.4 脂肪細(xì)胞因子 resistin表達結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

Resistin陽性診斷(Volm方法)：依據(jù)切片中陽性細(xì)胞著色強度和所占比例，選擇十個高倍視野判斷結(jié)果。標(biāo)本0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。陽性細(xì)胞所占比例0是0分，1%～25%是1分，>25%～50%是2分，>50%是3分。最后將陽性細(xì)胞著色強度和陽性細(xì)胞占比分值相加得出得分，<3分即陰性，≥3分即陽性。

1.5 隨訪

隨訪起始時間從首次根治性手術(shù)日期開始，無病生存期主要起點時間為初次LDH檢查時間，主要終點時間為術(shù)后首次發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或其他原因死亡為止，末次回訪時間為2019年5月。隨訪方式為電話回訪與門診復(fù)診。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 胰腺癌組織中resistin表達

胰腺癌組織中resistin表達陽性率為49.1%(65/135)。resistin表達水平與年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)無關(guān)(P>0.05)，與JPS病理分期有關(guān)(表1)。

表1 Resistin表達水平與胰腺癌臨床參數(shù)的關(guān)系/例

2.2 Resistin表達與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

共有5例患者在研究中失訪，余130例患者的中位隨訪時間為23(2～48)個月。截至末次隨訪，resistin陰性組和陽性組患者的中位無病生存期為分別為28個月、9個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=9.833，P<0.05)，見圖1。

圖1 resistin表達與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

2.3 LDH在胰腺癌中的表達

在胰腺癌中，LDH mRNA的表達水平為(13.35±1.06)，而正常胰腺組織中的表達水平為(4.43±3.32)。LDH mRNA在胰腺癌組織中的表達水平明顯高于正常胰腺組織(t=29.738，P<0.05)，見圖2。

圖2 LDH在胰腺癌組織和正常胰腺組織中表達水平

2.4 胰腺癌患者預(yù)后影響因素Cox比例風(fēng)險回歸模型結(jié)果

Cox比例風(fēng)險回歸模型結(jié)果分析：年齡、LDH、腫瘤分期是影響胰腺癌患者預(yù)后的獨立因素，見表2。

表2 Cox比例風(fēng)險回歸模型結(jié)果分析

3 討論

Resistin為脂肪細(xì)胞因子分泌的多肽類細(xì)胞因子，位于人體染色體19p13.3，是108個氨基酸殘基組成，分子結(jié)構(gòu)含有半胱氨酸與絲氨酸殘基，因二硫鍵鏈接的二聚體形式存在[16]。既往研究，胰腺癌患者更多的是通過CT和MRI進行檢測和診斷。CT掃描具有簡單、易操作、時間短等優(yōu)點，MRT具有精準(zhǔn)性的成像結(jié)果，然而，二者在一定程度上誤診率較高。目前領(lǐng)域，有學(xué)者[17]檢測基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2/MMP9在胰腺癌組織中mRNA和總蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)有神經(jīng)周浸潤的胰腺癌組織MMP2/MMP9表達有所增加，但在早期胰腺癌組織中，MMP2/MMP9在癌旁組織與腫瘤組織中蛋白表達增加不明顯。胰腺癌具有較強的侵襲性[18]，因此需要我們進一步探討影響胰腺癌高侵襲轉(zhuǎn)移性的相關(guān)機制與敏感基因?qū)Ω纳苹颊哳A(yù)后的意義[19]。資料報道[20]，resistin的生理功能和肥胖、胰島素抵抗與慢性炎癥有關(guān)。此外，還有相關(guān)實驗證明，resistin 通過核轉(zhuǎn)錄因子-kB徑路介導(dǎo)機體的炎癥反應(yīng)，促進腫瘤白介素-12，壞死因子-α等促炎因子合成表達增加，讓機體保持過度炎癥反應(yīng)狀態(tài)。本研究使用免疫組化方法對135例胰腺癌患者病理組織標(biāo)本的脂肪細(xì)胞因子resistin 的表達情況進行檢測，結(jié)果顯示resistin 表達水平與胰腺癌JPS病理分期有關(guān)。Resistin表達陽性越高提示JPS病理分期越晚。同時resistin表達陽性者的無病生存期是短于表達陰性者?？偨Y(jié)以上，resistin的表達可能和胰腺癌發(fā)生、發(fā)展均有聯(lián)系。本研究還通過TIMER數(shù)據(jù)庫所知，LDH表達在局部免疫微環(huán)境中呈正相關(guān)。史里等檢測到LDH和轉(zhuǎn)錄因子Krvppel樣因子4在胰腺癌組織中呈負(fù)相關(guān)。觀察Cox比例風(fēng)險回歸模型，LDH能較為準(zhǔn)確地評估胰腺癌臨床預(yù)后，故LDH可能會被作為臨床預(yù)后指標(biāo)之一。此外，基于把腫瘤分期作為協(xié)變量，使用擬合函數(shù)方法分析，可能致使Cox比例風(fēng)險回歸模型結(jié)果沒有統(tǒng)計學(xué)意義。本研究通過實驗發(fā)現(xiàn)resistin 與LDH 在腫瘤分期上的表達水平出現(xiàn)了相關(guān)性。Resistin的高表達水平與血清LDH水平升高均作用于體內(nèi)環(huán)境，促進腫瘤出現(xiàn)和進展，影響胰腺癌的預(yù)后。

綜上所述，resistin及LDH參與胰腺癌腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程，但是二者是如何在腫瘤局部免疫微環(huán)境中發(fā)揮作用，還需要進一步通過實驗更深入發(fā)掘。