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    ZEB2蛋白表達和E-caderin蛋白對NPC轉(zhuǎn)移的臨床應(yīng)用價值

    2021-07-07 07:45:28張媛媛陳選英薛曉會
    實用癌癥雜志 2021年6期
    關(guān)鍵詞:鼻咽癌陽性細胞分化

    張媛媛 陳選英 薛曉會

    鼻咽癌(NPC)是1種常見的惡性腫瘤,多發(fā)地區(qū)在東南地區(qū)和中國南方,發(fā)病早期容易發(fā)生轉(zhuǎn)移,是導(dǎo)致患者死亡的主要原因[1]。NPC患者進行放療治療不徹底,局部殘留病灶導(dǎo)致復(fù)發(fā),限制其療效和預(yù)后。因此,研究NPC的轉(zhuǎn)移機制和尋找疾病的分子標志物可以提高治療效果,改善預(yù)后,具有重要的臨床應(yīng)用價值[2]。在腫瘤不斷生長和增殖過程中,它們分泌的蛋白質(zhì)不僅是腫瘤細胞生長,侵襲和轉(zhuǎn)移所必需的,這些蛋白質(zhì)還可以從腫瘤細胞分泌并進入血液中,作為腫瘤標志物[3]。上皮型鈣黏蛋白(E-cadherin)是1種重要的細胞粘附分子,粘附連接作用受到破壞時會導(dǎo)致細胞分離[4]。E-box結(jié)合鋅指蛋白也稱Zeb蛋白,是特異性DNA序列轉(zhuǎn)錄因子,其家族成員包括Zeb1和Zeb2[5]。在本研究中,我們從我們的病理中心和相應(yīng)的鼻咽癌鄰近標本中選取鼻咽癌轉(zhuǎn)移標本,探討轉(zhuǎn)錄抑制因子ZEB2蛋白表達和靶蛋白E-caderin蛋白在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的臨床應(yīng)用價值?,F(xiàn)有報告如下。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料

    選取在我院病理中心獲取的術(shù)后鼻咽癌組織標本90例,符合要求的鼻咽癌癌旁標本90例,研究對象納入時間2017年2月至2019年4月。納入標準:①鼻咽癌的診斷標準參考《鼻咽癌規(guī)范化診療指南2013年版》中的標準;②術(shù)前經(jīng)食管鏡取活組織病檢、術(shù)后病理學檢查證實;③患者手術(shù)前未接受輔助性放化療;④鼻咽癌癌旁組織標本為距離腫瘤邊緣<5 cm的食管組織;⑤本研究獲得醫(yī)學倫理委員會的批準,研究對象的各種基礎(chǔ)資料完整。排除標準:①伴有其他部位的原發(fā)性腫瘤;②因其他類型腫瘤實施放化療;③伴有免疫系統(tǒng)疾病、長期使用免疫調(diào)節(jié)劑的患者;④合并其他類型的嚴重食管病變。

    90例鼻咽癌患者,年齡43~79歲,平均(59.8±10.3)歲,TNM分期:Ⅰ期21例、Ⅱ期36例、Ⅲ期29例、Ⅳ期4例;腫瘤組織分化程度:高分化20例、低分化32例、中分化38例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性59例;浸潤深度:肌層55例、未達肌層35例;病灶最大徑>5 cm 47例。

    1.2 方法

    1.2.1 免疫組化染色 將樣品用甲醛固定,脫水并包埋在石蠟中。制備4 μm厚的連續(xù)切片,在65 ℃下脫蠟,并使用30 ml/l的過氧化氫使內(nèi)源過氧化物酶失活5 min,微波修復(fù)抗原,在4 ℃濕盒中加入一抗過夜,在37 ℃下加入生物素化的二抗30 min,用辣根過氧化物酶標記的抗生物素蛋白在37 ℃加入30 min,然后用氨基苯甲酰胺沖洗(DAB)顯色,蘇木精復(fù)染,脫水,密封后在光學顯微鏡下觀察。

    1.2.2 免疫組化陽性結(jié)果判斷 ZEB2、E-caderin蛋白陽性染色分別表達于細胞核和細胞質(zhì)中,通過棕色或棕色的細胞核和/或細胞質(zhì)判斷陽性染色。每個切片選擇5個400倍視野,計算陽性細胞的數(shù)量計算為腫瘤細胞總數(shù)的百分比:沒有陽性細胞或陽性細胞<10%,其被判定為陰性;陽性細胞計數(shù)≥10%,并被判定為陽性。

    1.3 統(tǒng)計學處理

    2 結(jié)果

    2.1 兩組中ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率比較

    鼻咽癌組織中的ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率(67.78%、71.11%)顯著高于癌旁組織的22.22%、74.44%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表1)。

    表1 兩組ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率比較(例,%)

    2.2 ZEB2蛋白、E-caderin蛋白表達與鼻咽癌組織病理學參數(shù)的關(guān)系

    ZEB2蛋白陽性表達率與TNM分期和浸潤深度顯著相關(guān)(P<0.05);與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病灶直徑、組織學分化程度無顯著相關(guān)(P>0.05),見表2。

    表2 ZEB2蛋白表達與鼻咽癌癌組織病理學參數(shù)的關(guān)系(例,%)

    經(jīng)比較發(fā)現(xiàn),E-caderin蛋白陽性表達率與TNM分期和是否發(fā)生轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05);與病灶直徑、組織學分化程度、浸潤深度無顯著相關(guān)性(P>0.05),見表3。

    表3 E-caderin蛋白表達與鼻咽癌組織病理學參數(shù)的關(guān)系(例,%)

    2.3 鼻咽癌患者中ZEB2與E-caderin蛋白表達的相關(guān)性

    鼻咽癌組織中Zeb2陽性病例中有42例E-cadherin陽性,Zeb2陰性病例中E-eadherin陽性率為75.86%(22/29),兩者表達呈顯著負相關(guān)性(Z=0.031,P<0.000)(表4)。

    表4 兩組標本中ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達情況比較(例,%)

    3 討論

    在生長和增殖過程中,腫瘤不斷與身體交換,它們分泌的蛋白質(zhì)不僅是腫瘤細胞生長,侵襲和轉(zhuǎn)移所必需的。這些蛋白質(zhì)可以從腫瘤細胞分泌進入血液,成為腫瘤標志物,例如由前列腺癌細胞分泌的前列腺特異性抗原(PSA)和肝癌細胞分泌的甲胎蛋白可用作診斷,功效監(jiān)測和復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移預(yù)測的腫瘤標志物[5-6]。腫瘤發(fā)展,侵襲和轉(zhuǎn)移是涉及多個分子的多步驟,高選擇性非隨機過程,并且基因水平的變化不可避免地導(dǎo)致大量分泌蛋白功能發(fā)生變化[7]。然而,由于這些方法的局限性,以前關(guān)于腫瘤分泌蛋白的大多數(shù)研究都集中在單一或某些類型的蛋白質(zhì)上[8]。隨著蛋白質(zhì)組學的出現(xiàn),開始對分泌蛋白質(zhì)進行研究,分泌蛋白不限于由經(jīng)典分泌途徑分泌的蛋白質(zhì),還包括由非經(jīng)典分泌途徑分泌的蛋白質(zhì),包括細胞表面脫落的蛋白質(zhì)和其他途徑釋放的蛋白質(zhì),與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)[9]。

    E-cadherin是1種鈣依賴性跨膜糖蛋白,使細胞之間緊密連接,維持穩(wěn)定的組織結(jié)構(gòu),它在各種上皮細胞中普遍存在,參與細胞內(nèi)聚并在組織結(jié)構(gòu)重建和形狀維護中起著關(guān)鍵作用[10]。E-eadherin主要介導(dǎo)同源細胞的粘附功能,其表達降低或功能喪失降低了癌細胞與鄰近細胞之間的粘附,導(dǎo)致腫瘤細胞的活性和活動范圍增加,從而增加癌細胞的轉(zhuǎn)移和浸潤能力[11-12]。Zeb蛋白家族的成員,如Snail和Zeb,都含有螺旋-環(huán)-螺旋基序,可以特異性結(jié)合E-eadherin基因,促進E-cadherin在啟動子區(qū)E-box中的表達[13]。據(jù)報道,Zeb1和Zeb2抑制各種腫瘤細胞中E-cadhefin的表達,Zeb與轉(zhuǎn)錄共抑制因子CtBP1結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄抑制因子復(fù)合物,從而抑制E-cadhefin轉(zhuǎn)錄[14]。Zeb2通過與E-cadhefin基因啟動子的E-box結(jié)合來抑制腫瘤細胞的表達[15]。

    本次研究結(jié)果顯示,鼻咽癌組織中的ZEB2蛋白、E-caderin蛋白陽性表達率顯著高于癌旁組織。推測ZEB2蛋白、E-caderin蛋白可能參與鼻咽癌的發(fā)生和發(fā)展過程。并且ZEB2蛋白陽性表達率與不同TNM分期和浸潤深度比較,差異具有統(tǒng)計學意義;與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同病灶直徑、不同組織學分化程度差異無統(tǒng)計學意義。E-caderin蛋白陽性表達率與不同TNM分期和是否發(fā)生轉(zhuǎn)移組間比較,差異具有統(tǒng)計學意義;與不同病灶直徑、不同組織學分化程度、不同浸潤深度差異無統(tǒng)計學意義。說明ZEB2蛋白、E-caderin蛋白的表達均與病灶的直徑無關(guān),隨著浸潤的加深和TNM分期的增加,ZEB2蛋白陽性率顯著增加;E-caderin蛋白的陽性率表達與分化程度及遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)。NPC患者ZEB2和E-caderin蛋白表達的相關(guān)性來看,兩者表達呈顯著負相關(guān)。兩者之間存在調(diào)節(jié)關(guān)系,促進NPC的侵襲和轉(zhuǎn)移;聯(lián)合檢測ZEB2和E-caderin有望成為評估腫瘤惡性生物學行為的參考指標。

    綜上所述,ZEB2、E-caderin在鼻咽癌組織中表達上調(diào),與NPC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

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