5-HT和CRH在肝癌中的表達(dá)及與其病理特征的相關(guān)性研究

姬粉芝 張志偉

肝癌是常見的惡性腫瘤之一，是指起源于肝細(xì)胞和肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，其中90%以上為肝細(xì)胞癌[1]。由于該病發(fā)病隱匿，進(jìn)展迅速，發(fā)現(xiàn)時多數(shù)患者已處于中晚期，為此肝癌的死亡率一直居高不下，且具有惡性程度高、侵襲性強(qiáng)等特點(diǎn)[2]。肝癌的治療方法包括手術(shù)治療和非手術(shù)治療，不過很多患者在確診時已失去了手術(shù)治療指征。肝癌的非手術(shù)治療方法包括經(jīng)肝動脈導(dǎo)管栓塞治療、化療、放療、中醫(yī)中藥治療、射頻消融治療、生物治療。肝癌的病因復(fù)雜，其發(fā)病的具體機(jī)制還不明確，不過也是涉及多途徑、多基因調(diào)控、多信號通路相互作用的復(fù)雜過程[3]。5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)在調(diào)節(jié)機(jī)體情緒、情感和睡眠中發(fā)揮重要作用，5-HT表達(dá)下降可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生抑郁，從而在臨床上出現(xiàn)認(rèn)知障礙、自殘自殺等行為[4]。5-HT也具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，但目前5-HT與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系還不明確。促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)最初在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)，是1個含有41個氨基酸的多肽，其由下丘腦釋放作用于垂體，可釋放促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic Hormone，ACTH)與促進(jìn)垂體合成，從而參與機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)[5]。有研究表明CRH在部分惡性腫瘤中存在高表達(dá)，其可能參與疾病發(fā)生和發(fā)展過程[6-7]。本文具體探討了5-HT、CRH在肝癌中的表達(dá)與病理特征的相關(guān)性，希望為明確肝癌的發(fā)生機(jī)制提供一定的參考。現(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2016年7月至2019年12月選擇在本院診治的肝癌患者880例作為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：本院倫理委員會批準(zhǔn)了此次研究；患者簽署了知情同意書；年齡20～70歲；患者均經(jīng)臨床檢查、影像學(xué)檢查及手術(shù)病理檢查確診為肝癌；患者入院前均未接受相關(guān)抗腫瘤治療；臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：正參與其他研究者；妊娠與哺乳期婦女；伴有心、肝、腎等臟器功能嚴(yán)重障礙者；存在神經(jīng)系統(tǒng)疾病或交流溝通障礙者；繼發(fā)性肝癌或肝膿腫血管瘤者；合并其他惡性腫瘤者；術(shù)前進(jìn)行過放療、化療及相關(guān)治療的患者。

在880例患者中，男性520例，女性360例；年齡32歲～68歲，平均年齡(48.52±2.19)歲；平均腫瘤直徑(5.19±0.24)cm；單發(fā)病灶576例，多發(fā)病灶304例；門靜脈癌栓448例，肝外轉(zhuǎn)移160例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期432例，Ⅲ～Ⅳ期448例；組織學(xué)分化：高分化200例，中分化440例，低分化240例。

1.2 5-HT、CRH表達(dá)檢測

取所有患者的病灶組織樣本(病灶組)與癌旁組織樣本(離病灶組織≥2 cm，癌旁組)，制作成病理切片。用5%血清進(jìn)行室溫封閉30 min左右，加入1∶1000的單克隆抗體(抗5-HT抗體與抗CRH抗體)4 ℃過夜孵育。隔天加入1∶2000 的二抗，37 ℃孵育30 min。然后進(jìn)行常規(guī)顯色、封片，在鏡下觀察，記錄5-HT、CRH表達(dá)情況。染色強(qiáng)度：不著色0分,黃色1分,棕黃色2分，黃褐色3分；陽性細(xì)胞所占比例評分標(biāo)準(zhǔn):陽性細(xì)胞數(shù)<10% 0分;，10%～40% 1分，40%～70% 2分，≥70% 3分。兩種評分相加，≥3分表明表達(dá)陽性。

1.3 病理特征調(diào)查

調(diào)查所有患者一般資料，包括性別、年齡。同時記錄患者的病理特征，包括腫瘤直徑、病灶類型、臨床分期、轉(zhuǎn)移情況、門靜脈癌栓、組織學(xué)分化等。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 19.00軟件對本研究進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，對比為t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以百分比表示，對比為卡方χ2檢驗(yàn)等，三組間對比采用方差分析，使用Logistic回歸分析進(jìn)行影響因素分析，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 5-HT、CRH表達(dá)水平對比

病灶組5-HT、CRH表達(dá)陽性率為分別為70.9%和20.0%，癌旁組分別為15.5%和60.9%，對比差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組5-HT、CRH表達(dá)水平對比(例，%)

2.2 不同病理特征肝癌患者5-HT、CRH表達(dá)水平對比

不同腫瘤直徑、臨床分期、轉(zhuǎn)移情況、門靜脈癌栓、組織學(xué)分化患者5-HT、CRH表達(dá)陽性率對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，不同病理類型、性別、年齡患者5-HT、CRH表達(dá)陽性率對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 不同病理特征肝癌患者5-HT、CRH表達(dá)水平對比(例，%)

2.3 相關(guān)性分析

在880例患者中，Pearson相關(guān)分析顯示：5-HT、CRH表達(dá)與腫瘤直徑、臨床分期、肝外轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓、組織學(xué)分化都存在相關(guān)性(P<0.05)，見表3。

2.4 影響因素分析

在880例患者中，以5-HT、CRH作為因變量，以腫瘤直徑、臨床分期、肝外轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓、組織學(xué)分化作為自變量，Logistic回歸分析顯示：臨床分期、肝外轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓為影響5-HT、CRH表達(dá)的主要因素(P<0.05)，見表4與表5。

表4 影響肝癌患者5-HT表達(dá)的病理特征多因素分析(n=880)

表5 影響肝癌患者CRH表達(dá)的病理特征多因素分析(n=880)

3 討論

肝癌是目前全球第二大癌癥死亡原因，以肝細(xì)胞癌和肝內(nèi)膽管癌最為常見。由于肝癌發(fā)病較為隱匿，多數(shù)患者在確診時已屬中晚期，具有惡性程度高、侵襲性強(qiáng)、死亡率高等特點(diǎn)，也喪失了手術(shù)根治的最佳時機(jī)[8]。有研究顯示中晚期肝癌5年生存率僅為10～20個月，并且由于放射性肝損傷、抗腫瘤藥物不良反應(yīng)、腫瘤耐藥性等多種問題的存在，肝癌的非手術(shù)治療的效果也一直不佳[9]。

肝癌的發(fā)生發(fā)展是1個復(fù)雜過程，是多種生長因子參與、多種信號傳導(dǎo)通路的過程，完整的信號傳導(dǎo)通路包括調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、入侵和血管生成等，通路受到中斷則可能導(dǎo)致肝癌的發(fā)生[10-11]。有研究表明肝癌的發(fā)生與神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)失調(diào)有關(guān)，而5-HT是該網(wǎng)絡(luò)的重要因子之一[12]。生理狀態(tài)下機(jī)體內(nèi)存在一定的5-HT，以維持肝臟正常的運(yùn)動和分泌功能；而在肝臟壓力增加、過敏反應(yīng)、十二指腸酸化、迷走神經(jīng)刺激等刺激下可導(dǎo)致細(xì)胞釋放更多的5-HT。5-HT受體廣泛分布于腸道及中樞，5-HT及能與其受體結(jié)合的配體介導(dǎo)不同的病理生理過程，可通過感知外周及中樞途徑調(diào)節(jié)肝臟的運(yùn)動、分泌和感覺，從而調(diào)節(jié)肝臟功能。CRH可參與炎癥和腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，能夠調(diào)節(jié)兩種PLA2的表達(dá)，即鈣離子非依賴型磷脂酶A2和胞質(zhì)型磷脂酶A2的表達(dá)，進(jìn)而影響惡性腫瘤的增殖與遷移[13]。本研究顯示病灶組的5-HT、CRH表達(dá)陽性率為分別為70.9%和20.0%，癌旁組分別為15.5%和60.9%，對比差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明肝癌患者多伴隨有5-HT的高表達(dá)與CRH的低表達(dá)。

中晚期肝癌患者由于癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、肝外轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓、腫瘤體積、數(shù)目等原因，已不適合或不能耐受手術(shù)，導(dǎo)致預(yù)后一直比較差。5-HT可激活內(nèi)源性初級感覺神經(jīng)及外在性初級感覺神經(jīng)，借助不同的5-HT受體亞型激活不同的神經(jīng)-內(nèi)源性感覺，從而誘導(dǎo)肝癌的發(fā)生[14]。正常肝細(xì)胞中5-HT表達(dá)較低，并起到調(diào)控細(xì)胞有絲分裂，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用；當(dāng)5-HT表達(dá)增加時，惡性腫瘤細(xì)胞的有絲分裂增加，凋亡降低，使得腫瘤惡性程度增加[15]。當(dāng)前也有研究表明CRH可能屬于抑癌基因，可能是通過間接作用，從而對惡性腫瘤的發(fā)生產(chǎn)生抑制作用[16]。本研究顯示Pearson相關(guān)分析顯示肝癌患者的5-HT、CRH表達(dá)與腫瘤直徑、臨床分期、肝外轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓、組織學(xué)分化都存在相關(guān)性(P<0.05)；Logistic回歸分析分析顯示臨床分期、肝外轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓為影響肝癌患者5-HT、CRH表達(dá)的主要因素(P<0.05)，表明5-HT、CRH在肝癌中的表達(dá)與病理特征存在顯著相關(guān)性。本研究也存在一定的不足，納入的病例數(shù)量較少，病理特征分析指標(biāo)也比較少，且只進(jìn)行了免疫組化分析，將在后續(xù)研究中深入探討。

總之，肝癌患者多伴隨有5-HT的高表達(dá)與CRH的低表達(dá)，臨床分期、肝外轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓為影響肝癌患者5-HT、CRH表達(dá)的主要因素。