自噬相關(guān)基因Beclin1與乳腺癌病理相關(guān)性分析

鄒華偉 陳澎濤 劉 洋

乳腺癌發(fā)病率逐年升高，以成為我國(guó)女性最好發(fā)的腫瘤。當(dāng)前乳腺癌發(fā)病的原因與乳腺癌家族史和易感基因、放射線環(huán)境、高脂肪飲食以及體內(nèi)的雌激素水平等有著很大關(guān)系。其并發(fā)癥多、危險(xiǎn)性大，預(yù)后差，早期臨床癥狀并不明顯，大多數(shù)病人出現(xiàn)乳房皮膚改變、引流區(qū)淋巴結(jié)腫大時(shí)已是疾病晚期[1-3]。因此，需要更多分子生物學(xué)指標(biāo)來判斷乳腺癌患者對(duì)不同治療的反應(yīng)及惡性程度。Beclin1是在哺乳動(dòng)物之中發(fā)現(xiàn)和自噬相關(guān)的1種遺愛基因，它可以激活細(xì)胞程序性死亡過程并調(diào)節(jié)自噬活性。相關(guān)研究表明[4-6]，Beclin1能夠抑制腫瘤發(fā)展和發(fā)生，對(duì)于乳腺癌患者的病情惡化程度有著重要價(jià)值。因此，本文選取我院收治的120例乳腺癌患者作為研究對(duì)象，具體報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年6月至2020年6月共收治的120例乳腺癌患者作為研究對(duì)象，將其分為研究組，所有患者均行手術(shù)或空心針穿刺病理證實(shí)為乳腺癌，另取同期120例良性乳腺腫瘤患者作為對(duì)照組。兩組患者一般資料如下所示，見表 1。

表1 兩組患者一般資料對(duì)比分析

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

入選標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料與病理資料完整，患者治療依從性好；術(shù)后依照乳腺癌診療規(guī)范并依照病情進(jìn)行相應(yīng)的治療；溝通手術(shù)后的病理診斷確診為乳腺癌患者；在術(shù)前未經(jīng)免疫治療、化療以及放療等；無手術(shù)禁忌癥，具備手術(shù)指征；所有患者對(duì)本研究知情并簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料不全；嚴(yán)重器官功能不全；不愿意接受病理檢查的患者；孕婦或者哺乳期婦女；合并其他惡性腫瘤患者；合并精神類疾病或認(rèn)知障礙患者。

1.3 方法

免疫組織化學(xué)法：將收集的標(biāo)本在冰上進(jìn)行石蠟包埋，注意盡量將所有組織覆蓋，然后放入-20℃冰箱20～30 min，設(shè)置切片機(jī)3 μm，連續(xù)切片，認(rèn)真選取形態(tài)較好、組織完整的切片放到35 ℃溫水中，等到切片完全展平后收于防脫載玻片上，晾干后置于玻片架上，放入烤箱，調(diào)節(jié)烤箱溫度為65 ℃，烘烤2 h。

總RNA提取：從零下80 ℃的冰箱中取出不同類型的乳腺癌組織，將100 mg組織放入研缽之中加入氮液研磨，最后磨成粉末，加入BufferRLT 1 ml進(jìn)行反復(fù)的吹打，讓樣品能夠充分的裂解，并在室溫5 min等待核酸蛋白復(fù)合物分離，之后按照說明嚴(yán)格步驟提取RNA，并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。

免疫組化結(jié)果判定：應(yīng)用半定量計(jì)分法，細(xì)胞核內(nèi)和細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒，判定為陽性。并依照切片之中細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞總數(shù)分析。其中陽性著色重度為3分，中度為2分，輕度為1分，背景清晰無色為0分。陽性細(xì)胞數(shù)量>75%為3分，25%～75%為2分，<25%為1分?？偡钟?jì)3～6分為陽性[7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 三組患者自噬相關(guān)基因Beclin1mRNA表達(dá)水平

通過對(duì)比三組中自噬相關(guān)基因Beclin1mRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，良性組和惡性組均顯著低于對(duì)照組，且惡性組顯著低于良性組，對(duì)比差異顯著(P<0.05)，見表2。

表2 三組患者自噬相關(guān)基因Beclin1mRNA表達(dá)水平

2.2 三組患者自噬相關(guān)基因Beclin1蛋白表達(dá)陽性率

通過對(duì)比三組自噬相關(guān)基因Beclin1蛋白表達(dá)陽性率發(fā)現(xiàn)，良性組陽性率為60.00%，惡性組陽性率為26.67%，對(duì)照組陽性率為91.67%，對(duì)比差異顯著(P<0.05)，見表3。

表3 三組患者自噬相關(guān)基因Beclin1蛋白表達(dá)陽性率(例，%)

2.3 120例乳腺癌患者Beclin1陽性與陰性患者臨床病理特征對(duì)比分析

120例乳腺癌患者中，Beclin1陽性與Beclin1陰性患者月經(jīng)狀態(tài)、年齡、腫瘤大小對(duì)比無明顯差異(P>0.05)，兩組患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度對(duì)比差異顯著(P<0.05)，如表4所示。

表4 120例乳腺癌患者Beclin1陽性與陰性患者臨床病理特征對(duì)比分析/例

2.4 自噬相關(guān)基因Beclin1與乳腺癌病理相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)分析顯示，月經(jīng)狀態(tài)、年齡、腫瘤大小與自噬相關(guān)基因Beclin1不相關(guān)(P>0.05)，臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度與自噬相關(guān)基因Beclin1呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，如表5所示。

表5 自噬相關(guān)基因Beclin1與乳腺癌病理相關(guān)性分析

3 討論

自噬屬于1種細(xì)胞維持自身內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的手段，一旦人體內(nèi)自噬功能出現(xiàn)異常，可以導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)異常增生情況，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)癌變現(xiàn)象。因此深入了解細(xì)胞的自噬功能與腫瘤細(xì)胞的自噬功能，能夠判斷腫瘤患者的預(yù)后情況，并研究出針對(duì)于腫瘤治療的有效藥物。Beclin1又稱BECN1基因，屬于自噬啟動(dòng)的關(guān)鍵蛋白，其主要作用于細(xì)胞自噬成核時(shí)期。相關(guān)研究表明[8-10]，Beclin1表達(dá)在人類的卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌之中分別下降了75%、50%和40%。

本研究結(jié)果表明，通過對(duì)比三組中自噬相關(guān)基因Beclin1mRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，良性組和惡性組均顯著低于對(duì)照組，且惡性組顯著低于良性組，對(duì)比差異顯著(P<0.05)，相關(guān)研究表明[11]，Beclin1在膀胱癌組織之中的表達(dá)量明顯低于正常膀胱組織，而且在膀胱癌的發(fā)展與發(fā)生過程中具有重要作用，與本研究相一致；通過對(duì)比三組自噬相關(guān)基因Beclin1蛋白表達(dá)陽性率發(fā)現(xiàn)，良性組的陽性率為60.00%，惡性組患者的陽性率為26.67%，對(duì)照組的陽性率為91.67%，對(duì)比差異顯著(P<0.05)，由此證明，Beclin1在乳腺癌患者的陽性表達(dá)患者少于良性腫瘤組織和健康者，Beclin1的表達(dá)水平也就越低。由此可推測(cè)，Beclin1在乳腺細(xì)胞發(fā)生病變開始，會(huì)出現(xiàn)功能缺陷，這可能是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞的其他抑癌基因出現(xiàn)相互作用，從而導(dǎo)致Beclin1表達(dá)出現(xiàn)異常，對(duì)細(xì)胞的自噬功能產(chǎn)生抑制作用，從而導(dǎo)致其細(xì)胞惡性開始增殖，具體生物學(xué)通路還需要更多的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證[12-14]；120例乳腺癌患者中，Beclin1陽性與Beclin1陰性患者月經(jīng)狀態(tài)、年齡、腫瘤大小對(duì)比無明顯差異(P>0.05)，兩組患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度對(duì)比差異顯著(P<0.05)；Spearman相關(guān)分析顯示，月經(jīng)狀態(tài)、年齡、腫瘤大小與自噬相關(guān)基因Beclin1不相關(guān)(P>0.05)，臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度與自噬相關(guān)基因Beclin1呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腫瘤分化程度是體現(xiàn)腫瘤惡性程度的臨床病理指標(biāo)，對(duì)于乳腺癌患者具有重要的預(yù)測(cè)作用，因此本文以這三個(gè)指標(biāo)來分析Beclin1和病理相關(guān)性。陳小林等[15]對(duì)上皮性卵巢癌組織中Beclin1表達(dá)及相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與其明顯相關(guān)，與本研究相符。

總而言之，自噬相關(guān)基因Beclin1在乳腺癌患者的癌組織中表達(dá)低于良性腫瘤患者和健康人士，隨著患者病情加重，自噬相關(guān)基因Beclin1表達(dá)明顯降低，Beclin1與乳腺癌患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度呈負(fù)相關(guān)，因此可以應(yīng)用自噬相關(guān)基因Beclin1來判斷乳腺癌患者病情的嚴(yán)重程度。