鄒華偉 陳澎濤 劉 洋
乳腺癌發(fā)病率逐年升高,以成為我國女性最好發(fā)的腫瘤。當(dāng)前乳腺癌發(fā)病的原因與乳腺癌家族史和易感基因、放射線環(huán)境、高脂肪飲食以及體內(nèi)的雌激素水平等有著很大關(guān)系。其并發(fā)癥多、危險性大,預(yù)后差,早期臨床癥狀并不明顯,大多數(shù)病人出現(xiàn)乳房皮膚改變、引流區(qū)淋巴結(jié)腫大時已是疾病晚期[1-3]。因此,需要更多分子生物學(xué)指標(biāo)來判斷乳腺癌患者對不同治療的反應(yīng)及惡性程度。Beclin1是在哺乳動物之中發(fā)現(xiàn)和自噬相關(guān)的1種遺愛基因,它可以激活細(xì)胞程序性死亡過程并調(diào)節(jié)自噬活性。相關(guān)研究表明[4-6],Beclin1能夠抑制腫瘤發(fā)展和發(fā)生,對于乳腺癌患者的病情惡化程度有著重要價值。因此,本文選取我院收治的120例乳腺癌患者作為研究對象,具體報告如下。
選取我院2015年6月至2020年6月共收治的120例乳腺癌患者作為研究對象,將其分為研究組,所有患者均行手術(shù)或空心針穿刺病理證實為乳腺癌,另取同期120例良性乳腺腫瘤患者作為對照組。兩組患者一般資料如下所示,見表 1。
表1 兩組患者一般資料對比分析
入選標(biāo)準(zhǔn):臨床資料與病理資料完整,患者治療依從性好;術(shù)后依照乳腺癌診療規(guī)范并依照病情進(jìn)行相應(yīng)的治療;溝通手術(shù)后的病理診斷確診為乳腺癌患者;在術(shù)前未經(jīng)免疫治療、化療以及放療等;無手術(shù)禁忌癥,具備手術(shù)指征;所有患者對本研究知情并簽署知情同意書。
排除標(biāo)準(zhǔn):臨床資料不全;嚴(yán)重器官功能不全;不愿意接受病理檢查的患者;孕婦或者哺乳期婦女;合并其他惡性腫瘤患者;合并精神類疾病或認(rèn)知障礙患者。
免疫組織化學(xué)法:將收集的標(biāo)本在冰上進(jìn)行石蠟包埋,注意盡量將所有組織覆蓋,然后放入-20℃冰箱20~30 min,設(shè)置切片機(jī)3 μm,連續(xù)切片,認(rèn)真選取形態(tài)較好、組織完整的切片放到35 ℃溫水中,等到切片完全展平后收于防脫載玻片上,晾干后置于玻片架上,放入烤箱,調(diào)節(jié)烤箱溫度為65 ℃,烘烤2 h。
總RNA提?。簭牧阆?0 ℃的冰箱中取出不同類型的乳腺癌組織,將100 mg組織放入研缽之中加入氮液研磨,最后磨成粉末,加入BufferRLT 1 ml進(jìn)行反復(fù)的吹打,讓樣品能夠充分的裂解,并在室溫5 min等待核酸蛋白復(fù)合物分離,之后按照說明嚴(yán)格步驟提取RNA,并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。
免疫組化結(jié)果判定:應(yīng)用半定量計分法,細(xì)胞核內(nèi)和細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒,判定為陽性。并依照切片之中細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞總數(shù)分析。其中陽性著色重度為3分,中度為2分,輕度為1分,背景清晰無色為0分。陽性細(xì)胞數(shù)量>75%為3分,25%~75%為2分,<25%為1分??偡钟?~6分為陽性[7]。
通過對比三組中自噬相關(guān)基因Beclin1mRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn),良性組和惡性組均顯著低于對照組,且惡性組顯著低于良性組,對比差異顯著(P<0.05),見表2。
表2 三組患者自噬相關(guān)基因Beclin1mRNA表達(dá)水平
通過對比三組自噬相關(guān)基因Beclin1蛋白表達(dá)陽性率發(fā)現(xiàn),良性組陽性率為60.00%,惡性組陽性率為26.67%,對照組陽性率為91.67%,對比差異顯著(P<0.05),見表3。
表3 三組患者自噬相關(guān)基因Beclin1蛋白表達(dá)陽性率(例,%)
120例乳腺癌患者中,Beclin1陽性與Beclin1陰性患者月經(jīng)狀態(tài)、年齡、腫瘤大小對比無明顯差異(P>0.05),兩組患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度對比差異顯著(P<0.05),如表4所示。
表4 120例乳腺癌患者Beclin1陽性與陰性患者臨床病理特征對比分析/例
Spearman相關(guān)分析顯示,月經(jīng)狀態(tài)、年齡、腫瘤大小與自噬相關(guān)基因Beclin1不相關(guān)(P>0.05),臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度與自噬相關(guān)基因Beclin1呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),如表5所示。
表5 自噬相關(guān)基因Beclin1與乳腺癌病理相關(guān)性分析
自噬屬于1種細(xì)胞維持自身內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的手段,一旦人體內(nèi)自噬功能出現(xiàn)異常,可以導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)異常增生情況,嚴(yán)重者會出現(xiàn)癌變現(xiàn)象。因此深入了解細(xì)胞的自噬功能與腫瘤細(xì)胞的自噬功能,能夠判斷腫瘤患者的預(yù)后情況,并研究出針對于腫瘤治療的有效藥物。Beclin1又稱BECN1基因,屬于自噬啟動的關(guān)鍵蛋白,其主要作用于細(xì)胞自噬成核時期。相關(guān)研究表明[8-10],Beclin1表達(dá)在人類的卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌之中分別下降了75%、50%和40%。
本研究結(jié)果表明,通過對比三組中自噬相關(guān)基因Beclin1mRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn),良性組和惡性組均顯著低于對照組,且惡性組顯著低于良性組,對比差異顯著(P<0.05),相關(guān)研究表明[11],Beclin1在膀胱癌組織之中的表達(dá)量明顯低于正常膀胱組織,而且在膀胱癌的發(fā)展與發(fā)生過程中具有重要作用,與本研究相一致;通過對比三組自噬相關(guān)基因Beclin1蛋白表達(dá)陽性率發(fā)現(xiàn),良性組的陽性率為60.00%,惡性組患者的陽性率為26.67%,對照組的陽性率為91.67%,對比差異顯著(P<0.05),由此證明,Beclin1在乳腺癌患者的陽性表達(dá)患者少于良性腫瘤組織和健康者,Beclin1的表達(dá)水平也就越低。由此可推測,Beclin1在乳腺細(xì)胞發(fā)生病變開始,會出現(xiàn)功能缺陷,這可能是因為腫瘤細(xì)胞的其他抑癌基因出現(xiàn)相互作用,從而導(dǎo)致Beclin1表達(dá)出現(xiàn)異常,對細(xì)胞的自噬功能產(chǎn)生抑制作用,從而導(dǎo)致其細(xì)胞惡性開始增殖,具體生物學(xué)通路還需要更多的細(xì)胞學(xué)實驗和動物實驗進(jìn)行驗證[12-14];120例乳腺癌患者中,Beclin1陽性與Beclin1陰性患者月經(jīng)狀態(tài)、年齡、腫瘤大小對比無明顯差異(P>0.05),兩組患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度對比差異顯著(P<0.05);Spearman相關(guān)分析顯示,月經(jīng)狀態(tài)、年齡、腫瘤大小與自噬相關(guān)基因Beclin1不相關(guān)(P>0.05),臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度與自噬相關(guān)基因Beclin1呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腫瘤分化程度是體現(xiàn)腫瘤惡性程度的臨床病理指標(biāo),對于乳腺癌患者具有重要的預(yù)測作用,因此本文以這三個指標(biāo)來分析Beclin1和病理相關(guān)性。陳小林等[15]對上皮性卵巢癌組織中Beclin1表達(dá)及相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn),患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與其明顯相關(guān),與本研究相符。
總而言之,自噬相關(guān)基因Beclin1在乳腺癌患者的癌組織中表達(dá)低于良性腫瘤患者和健康人士,隨著患者病情加重,自噬相關(guān)基因Beclin1表達(dá)明顯降低,Beclin1與乳腺癌患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織分化程度呈負(fù)相關(guān),因此可以應(yīng)用自噬相關(guān)基因Beclin1來判斷乳腺癌患者病情的嚴(yán)重程度。