鹽吳茱萸飲片的炮制方法及含量測定

孫立麗，高瑩瑩，商麗麗，李巖

（1吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林；2白城市食品藥品檢驗所，吉林 白城）

0 引言

鹽吳茱萸為吳茱萸的炮制加工品，有溫中散寒，開郁止痛的功效。吳茱萸為常用中藥，除《中國藥典》1953年版未收載吳茱萸外，歷版中國藥典均有收載，現(xiàn)收載于《中國藥典》2015版一部[1]，其收載的飲片有吳茱萸、制吳茱萸兩種。主產(chǎn)于我國貴州、廣西、湖南、湖北、云南、四川、江西、江蘇、浙江等地。吳茱萸主要化學(xué)成分含有生物堿、揮發(fā)油、吳茱萸內(nèi)酯（檸檬苦素）、黃酮、酚酸等成分。生物堿是吳茱萸的主要化學(xué)和生物活性成分，其中吳茱萸堿、吳茱萸次堿、去氫吳茱萸堿、羥基吳茱萸堿是其主要活性成分[2,3]。藥理作用吳茱萸具有止嘔作用，對癬菌有抑制作用，同時具有抗病毒作用。對心臟具有廣泛壓力作用如抗心律失常，調(diào)節(jié)血壓；同時具有抗動脈粥樣硬化作用和抗炎作用。其鹽制品鎮(zhèn)痛作用最強,鹽制后使吳茱萸生物堿溶出增加所致。

炮制目的：吳茱萸經(jīng)鹽制，鹽能引藥入腎，鹽可涼血解毒，鹽炙與藥材配伍以提高療效；改變藥物性能，增強止痛、入腎作用；苷類及揮發(fā)油成分鹽制后含量降低，減毒，緩和吳茱萸的燥性，滋陰降火；鹽對植物細(xì)胞較強的穿透力可增加有效成分的溶出，提高藥材使用效率；防腐矯味，便于儲存[4,5]。

1 炮制工藝

1.1 樣品收集

起草樣品收集情況：共收集吳茱萸2個品種11批次藥材，其中吳茱萸9批、石虎2批，來自湖北省、江西省、貴州省、廣西壯族自治區(qū)10個產(chǎn)地。

1.2 炮制工藝參數(shù)考察

根據(jù)吳茱萸藥材的特性，以企業(yè)生產(chǎn)炮制方法為基礎(chǔ)，參照鹽炙法（《中國藥典》2015版四部通0213）炮制。用小型炒貨機進(jìn)行炮制工藝優(yōu)化，首先進(jìn)行悶潤時間、炒制溫度、藥鹽比例考察，選擇（80℃-150℃）不同溫度條件下炮制。對鹽吳茱萸外觀性狀、浸出物、吳茱萸堿與吳茱萸次堿的總量、檸檬苦素的含量為評價指標(biāo)，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行多因素炮制工藝研究，采用正交試驗方法進(jìn)一步炮制工藝優(yōu)化，選擇悶潤時間（min）、炒制溫度（℃）、時間炒制（min）為考察因素，以吳茱萸堿與吳茱萸次堿的含量、檸檬苦素的含量及浸出物為評價指標(biāo)，優(yōu)選鹽吳茱萸的炮制工藝條件，確定炮制的最佳工藝[6]。

單因素考察：吳茱萸的鹽制方法多為鹽水悶透后以“文火加熱，炒至近干”，故以外觀性狀、浸出物、檸檬苦素、吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量為考察指標(biāo)，選取“藥鹽比例、悶潤時間、炒制溫度和炒制時間”進(jìn)行單因素考察。

單因素考察結(jié)果：初步考察悶潤時間60min比較合適；炒制溫度120℃比較合適；炒制時間30min、40min比較合適；食鹽用量為100kg用食鹽2.0kg比較合適。

多因素考察：采用正交試驗方法進(jìn)行優(yōu)選，以悶潤時間（A）、炒制溫度（B）、炒制時間（C）為考察因素，三水平進(jìn)行正交試驗，以吳茱萸堿與吳茱萸次堿總量、檸檬苦素含量、浸出物為考察指標(biāo)。

多因素考察結(jié)果：按照正交試驗考察結(jié)果優(yōu)選最佳炮制工藝為悶潤時間60min、炒制溫度130℃、炒制時間30min。

2 含量測定

鹽吳茱萸參照吳茱萸飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)《中國藥典》2015年版一部正文171頁含量測定項進(jìn)行測定。方法學(xué)考察：

2.1 線性關(guān)系考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取吳茱萸次堿對照品適量，置100ml量瓶中，加甲醇超聲使溶解，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用；再精密稱取吳茱萸堿對照品適量、檸檬苦素對照品適量，置同一100ml量瓶中，加上述吳茱萸次堿對照品溶液50ml,超聲使溶解，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含吳茱萸堿83.6μg和吳茱萸次堿54.4μg，檸檬苦素0.1003mg的混合溶液，作為對照品混合溶液；精密吸取對照品溶液1、5、10、15、20、25、30μl，分別注入液相色譜儀，測得峰面積，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果吳茱萸堿回歸方程為Y=8E+06X-37213 r=1.0000，進(jìn)樣量在0.0836μg-2.5080μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。吳茱萸次堿回歸方程為Y=7E+06X-55365 r=0.9999，進(jìn) 樣 量 在0.0544μg-1.6320μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。檸檬苦素回歸方程為Y=553330X-435.91 r=0.9995，進(jìn) 樣 量 在0.1003μg-3.0090μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2 儀器精密度試驗

取同一供試品（WZY-11）溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μl，依法測定，記錄峰面積。吳茱萸堿峰面積平均：8523684，RSD=0.6%；吳茱萸次堿峰面積平均：3283522，RSD=1.0%；檸檬苦素峰面積平均：336839，RSD=1.2%。結(jié)果表明精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性考察

取同一供試品（WZY-11）溶液，分別在0h、3h、6h、9h、12h、18h、24h各進(jìn)樣測定一次，記錄峰面積。吳茱萸堿峰面積平均值：8494491，RSD=0.5%，吳茱萸次堿峰面積平均值：3282688，RSD=1.0%，檸檬苦素峰面積平均值：342128，RSD=1.8%。結(jié)果表明：供試品溶液在24h內(nèi)三個成分相對標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，穩(wěn)定性較好。

2.4 重復(fù)性考察

取同一批供試品（WZY-11）6份，依法測定，平行測定6次，計算。結(jié)果吳茱萸堿平均含量為1.00%，RSD為0.5%；吳茱萸次堿平均含量為0.44%，RSD為1.4%；檸檬苦素平均含量為0.56%，RSD為1.9%,表明本方法重復(fù)性較好。

2.5 準(zhǔn)確度試驗

取已知含量的樣品（WZY-11）（含吳茱萸堿0.997%、吳茱萸次堿0.441%、檸檬苦素0.568%）9份，每份約0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別按測定成分（1∶0.5、1∶1、1∶1.5）的比例加入對照品溶液，即分別精密加入對照品混合溶液（吳茱萸堿0.2562mg/ml、吳茱萸次堿0.1149mg/ml，檸 檬 苦 素0.1401mg/ml）3ml、6ml、9ml各3份，按擬定方法制備待測溶液9份，分別精密加入70%乙醇溶液適量，使總體積至25ml，依法測定，計算回收率，結(jié)果吳茱萸堿平均回收率為101.2%，RSD=2.7%；吳茱萸次堿平均回收率為96.4%，RSD=2.8%；檸檬苦素平均回收率為101.7%，RSD=1.5%，n=9。

對照品、鹽吳茱萸供試品、空白溶劑HPLC圖見圖1、圖2、圖3。

圖1 對照品混合溶液HPLC圖

圖2 鹽吳茱萸供試品HPLC圖

圖3 空白溶劑HPLC圖

3 討論

吳茱萸是一種比較常用的中藥，具有溫中止痛、理氣、燥濕的功效。主要成分之一為生物堿，有研究指出，吳茱萸鎮(zhèn)痛、體溫上升作用和吳茱萸堿及吳茱萸次堿有關(guān)[7,8]。本次研究對吳茱萸的化學(xué)成分、炒制目的及炮制方法進(jìn)行了分析，并采用反相高效液相色譜法，測定吳茱萸中吳茱萸堿和吳茱萸次堿及檸檬苦素含量。對吳茱萸炮制方法的研究應(yīng)結(jié)合其用途進(jìn)行，豐富炮制種類，擴大其用途，更好地服務(wù)于臨床。而反相高效液相色譜法檢驗方法簡便、重現(xiàn)性好，在吳茱萸的含量測定中有重要價值[9,10]。