微毛血見愁地上部分的化學(xué)成分研究

阮元，葛夢(mèng)煥，李文，文春南，田若丹，盛蒙珂，劉淼，麻兵繼（河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院中藥材系，鄭州 450046）

唇形科（Labiatae）香科科屬（Teucrium）植物在全球約有100～300種，遍布于世界各地，主產(chǎn)于地中海沿岸。我國有該屬植物18種、10變種，分布于全國各地，但主要集中分布于西南部[1]。河南省香科科屬植物資源主要分布在大別山、桐柏山和伏牛山地區(qū)，共有3種，即血見愁（T.viscidum）、廬山香科科（T.pernyi）和裂苞香科科（T.veronicoides）；另有3變種，分別為微毛血見愁（T.viscidumvar.nepetoides）、光萼血見愁（T.viscidumvar.leiocalyx）和小葉穗花香科科（T.japonicumvar.microphyllum）[2–3]。香科科屬部分植物在我國具有悠久的藥用歷史，其中血見愁全草入藥用于治療跌打損傷、出血、急性胃腸炎、消化不良、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺膿瘍、毒蛇咬傷、凍瘡腫痛、療瘡癤腫等癥[1]。

富含克羅烷型二萜被公認(rèn)為香科科屬植物的主要特征成分[4]。該屬植物的化學(xué)成分，尤其是二萜類成分具有廣泛的生物活性，如拒食、抗氧化、抗菌消炎、鎮(zhèn)痛解痙、降壓、降血糖和抗腫瘤等[5]。該屬植物中結(jié)構(gòu)豐富多樣的克羅烷二萜引起了合成化學(xué)家的關(guān)注，例如Liu等[6]對(duì)該屬植物中分離鑒定的teucvidin開展了全合成研究，Wu等[7]對(duì)克羅烷二萜結(jié)構(gòu)片段開展了合成研究。

文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，關(guān)于河南產(chǎn)香科科屬植物化學(xué)成分的研究報(bào)道仍是空白。因此，從該屬植物中進(jìn)一步挖掘利用結(jié)構(gòu)新穎、生物活性良好的化學(xué)成分具有重要意義。本研究采集了伏牛山地區(qū)的微毛血見愁地上部分，首次對(duì)該變種的化學(xué)成分進(jìn)行研究，以期發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎的活性次生代謝產(chǎn)物，為進(jìn)一步開發(fā)利用香科科屬植物資源提供一定的研究基礎(chǔ)和理論支撐。

1 材料

1.1 藥材

植物樣品于2017年10月采自河南省伏牛山，經(jīng)河南農(nóng)業(yè)大學(xué)高致明教授鑒定為唇形科香科科屬植物微毛血見愁（Teucrium viscidumvar.nepetoides）。標(biāo)本（編號(hào)20171012）保存于河南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院中藥材系。

1.2 儀器與試藥

Avance Ⅲ 400 MHz超導(dǎo)核磁共振儀（瑞士Bruker公司）；Waters 1525制備型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；ZORBAX SB-C18半制備柱（9.4 mm×250 mm，5 μm）（美國Agilent公司）；amaZon離子阱質(zhì)譜儀（德國布魯克）。MCP500旋光儀（奧地利安東帕）；薄層硅膠板GF254（青島鼎康硅膠有限公司）；柱色譜硅膠（80目，青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20（美國通用）；RP-C8（40～75 μm，日本富士）；MCI（CHP20/P，75～150 μm，日本三菱）；色譜甲醇、乙腈（天津四友）；其他試劑均為分析純（天津富宇）。

2 化合物的提取與分離

采集的微毛血見愁地上部分（10 kg），干燥后粉碎，95%乙醇浸提3次，每次3 d。提取液經(jīng)減壓濃縮除去乙醇后，加水混懸，用乙酸乙酯萃取，萃取液減壓濃縮除去有機(jī)溶劑得乙酸乙酯浸膏（272 g）。乙酸乙酯浸膏經(jīng)硅膠柱色譜，依次用二氯甲烷、二氯甲烷-丙酮（10∶1）、二氯甲烷-丙酮（1∶1）和甲醇洗脫，各洗脫部分分別收集，將提取物分成4個(gè)部分。二氯甲烷洗脫部分經(jīng)硅膠柱色譜，用不同比例石油醚-丙酮洗脫，分離得到化合物3（9 mg）。二氯甲烷-丙酮（10∶1）洗脫部分經(jīng)MCI柱色譜，90%甲醇洗脫，除去葉綠素，脫色后樣品在二氯甲烷-甲醇溶液中析出暗紅色沉淀和無色針晶，用二氯甲烷-甲醇（1∶1）反復(fù)洗滌，分別得到化合物4（63 mg）和化合物5（177 mg）。母液放置后析出無色透明片狀結(jié)晶，即化合物2（63 mg）。脫色后樣品18 g經(jīng)C8反相柱色譜，用30%、50%、70%和100%甲醇依次洗脫。其中，50%甲醇部分在二氯甲烷-甲醇混合有機(jī)溶劑中析出淡黃色結(jié)晶化合物1（6 mg），經(jīng)硅膠柱色譜，用不同比例石油醚-丙酮洗脫，分離得到化合物6（6 mg）。化合物結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～6的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig 1 Chemical structures of compound 1－6

3 結(jié)果

化合物1：淡黃色結(jié)晶（二氯甲烷-甲醇）。ESI-MSm/z：351 [M＋Na]＋。[α]20D＋29.9°（c＝0.06，CH3COCH3）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δH：7.48，7.46（2H，m，H-16，H-15），6.41（1H，m，H-14），5.74（1H，m，H-6），5.37（1H，dd，J＝10.0，7.3 Hz，H-12），2.72（1H，m，H-10），2.66（1H，dd，J＝13.7，7.3 Hz，H-11a），1.22（3H，d，J＝7.2 Hz，Me-17）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δC：23.7（C-1），23.3（C-2），18.8（C-3），123.8（C-4），166.6（C-5），76.8（C-6），31.8（C-7），35.8（C-8），51.1（C-9），43.1（C-10），42.8（C-11），71.7（C-12），124.3（C-13），108.0（C-14），144.4（C-15），140.0（C-16），17.7（C-17），173.8（C-18），176.2（C-20）。化合物1的核磁共振數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[8]基本一致，故鑒定該化合物為teuflin。

化合物2：無色透明片狀結(jié)晶（二氯甲烷-甲醇）。ESI-MSm/z：351 [M＋Na]＋。[α]20D－55.7°（c＝0.20，CH3COCH3）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δH：7.44（2H，overlap，H-16，H-15），6.35（1H，brs，H-14），5.35（1H，brt，J＝8.0 Hz，H-12），5.00（1H，m，H-6），3.27（1H，m，H-10），2.58（1H，dd，J＝13.9，8.3 Hz，H-11a），1.35（3H，d，J＝7.2 Hz，Me-17）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δC：23.6（C-1），21.6（C-2），20.2（C-3），128.0（C-4），162.4（C-5），76.3（C-6），35.9（C-7），38.9（C-8），52.3（C-9），36.0（C-10），39.2（C-11），72.1（C-12），125.4（C-13），108.1（C-14），144.6（C-15），139.6（C-16），14.5（C-17），172.8（C-18），177.8（C-20）。該化合物的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]基本一致，因此，鑒定該化合物為teucvidin。

化合物3：白色粉末。ESI-MSm/z：351 [M＋Na]＋。[α]20D＋145.1°（c＝0.35，CH3COCH3）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δH：7.45（1H，t，J＝1.6 Hz，H-15），7.41（1H，m，H-16），6.34（1H，dd，J＝1.6，0.7 Hz，H-14），5.56（1H，ddd，J＝9.2，3.3，1.0 Hz，H-12），4.96（1H，m，H-6），3.15（1H，m，H-4），2.85（1H，dd，J＝13.5，9.2 Hz，H-11a），1.07（1H，d，J＝7.2 Hz，H-15）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δC：22.4（C-1），23.4（C-2），21.2（C-3），39.7（C-4），132.1（C-5），74.7（C-6），31.8（C-7），35.4（C-8），51.1（C-9），129.0（C-10），40.5（C-11），71.9（C-12），126.2（C-13），107.7（C-14），144.4（C-15），138.6（C-16），15.3（C-17），176.2（C-18），176.7（C-20）。該化合物核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]基本一致，鑒定該化合物為isoteuflin。

化合物4：暗紅色固體。ESI-MSm/z：361 [M＋Na]＋。1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δH：13.72（1H，s，14-OH），9.84（1H，s，11-OH），6.69（1H，brs，H-15），6.60（1H，s，H-6），4.08（1H，d，J＝16.4 Hz，H-1a），2.45（1H，d，J＝16.4 Hz，H-1b），2.47（3H，brd，J＝0.9 Hz，Me-17），2.21（3H，brd，J＝0.7 Hz，Me-18），1.91（3H，s，Me-19），1.56（3H，s，Me-20）。13C NMR（100 MHz，DMSO-d6）δC：45.9（C-1），196.9（C-2），136.0（C-3），146.6（C-4），162.4（C-5），123.5（C-6），190.6（C-7），109.0（C-8），132.8（C-9），42.9（C-10），129.3（C-11），151.0（C-12），117.8（C-13），156.0（C-14），101.3（C-15），150.2（C-16），14.2（C-17），12.1（C-18），17.7（C-19），25.2（C-20）?；衔?的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]基本一致，鑒定該化合物為teuvincenone F。

化合物5：無色針晶（二氯甲烷-甲醇）。ESI-MSm/z：411 [M＋H]＋。[α]20D－33.9°（c＝0.15，CH3COCH3），1H NMR（400 MHz，CDCl3）δH：5.33（1H，brd，J＝5.2 Hz，H-6），5.20（1H，dd，J＝12.5，7.5 Hz，H-23），3.51（1H，m，H-3），4.69（1H，m，H-26），1.64（3H，s，Me-27）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δC：37.4（C-1），32.1（C-2），71.9（C-3），42.5（C-4），140.9（C-5），121.8（C-6），32.1（C-7），31.8（C-8），50.3（C-9），36.7（C-10），21.2（C-11），39.9（C-12），42.4（C-13），57.0（C-14），24.5（C-15），28.9（C-16），56.0（C-17），12.2（C-18），19.6（C-19），40.4（C-20），21.0（C-21），137.4（C-22），130.2（C-23），52.2（C-24），148.8（C-25），109.7（C-26），20.4（C-27），25.9（C-28），12.4（C-29）。該化合物的核磁共振數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12-13]基本一致，故鑒定該化合物為22-dehydroclerosterol。

化合物6：白色粉末。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δH：10.38（1H，-OH），7.94（1H，dd，J＝8.0，1.7 Hz，H-6），7.54（1H，m，H-4），7.05（1H，brd，J＝8.0 Hz，H-3），6.95（1H，m，H-5）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δC：111.5（C-1），162.4（C-2），118.1（C-3），137.2（C-4），119.8（C-5），131.2（C-6），175.2（C-7）。該化合物的核磁共振數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]基本一致，因此鑒定化合物6為水楊酸。

4 結(jié)論與討論

本研究首次對(duì)香科科屬植物微毛血見愁的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，分離得到6個(gè)化合物，通過波譜分析手段鑒定分別為teuflin（1）、teucvidin（2）、isoteuflin（3）、teuvincenone F（4）、22-dehydroclerosterol（5）和水楊酸（6），所有化合物均為首次從該植物中分離得到?；衔?、2和3為克羅烷型二萜，系同分異構(gòu)體，其中化合物1和2差異僅僅在于C-10的構(gòu)型不同；而化合物2和3的差異僅在雙鍵的位置不同。采用非選擇性葉蝶法，化合物1在10 μg·cm－2葉片面積濃度條件下對(duì)三齡小菜蛾（Plutella xylostella）和三齡斜紋夜蛾（Spodoptera litura）的拒食率分別達(dá)到（84.2±2.9）%和（80.2±2.1）%[15]；采用非選擇性葉蝶法，當(dāng)濃度為0.003 mol·L－1時(shí)，化合物2對(duì)四齡粘蟲（Mythimna separata）的拒食率為52.6%[16]。這表明化合物1和2均具有顯著的拒食作用?；衔?為松香烷型二萜，于1992年已被報(bào)道，但是關(guān)于其活性研究較少，近期研究表明該化合物能夠顯著抑制脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[17]?；衔?在25 μmol·L－1濃度下對(duì)人乳腺癌MCF7細(xì)胞的抑制率為54.21%[13]。化合物6是一種天然的消炎藥，同時(shí)也是一種植物激素。由此可見，該屬植物的化學(xué)成分及其生物活性仍有較大的挖掘潛力，然而，針對(duì)該屬植物化學(xué)成分的生物活性作用機(jī)制研究仍較少，有待于進(jìn)一步加強(qiáng)。