基于數(shù)據(jù)挖掘和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的血脂異常用藥規(guī)律和作用機(jī)制研究＊

耿秀超，張雨豪，王 梓，蔡紫赟，尹艷紫，張曉蕾，孫坤舉，李 強(qiáng)＊＊，于文濤，4＊＊

(1.河北中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院 石家莊 050200；2.河北大學(xué)醫(yī)學(xué)院 保定 071000；3.河北中醫(yī)學(xué)院針灸推拿學(xué)院 石家莊 050200；4.河北省心腦血管病中醫(yī)藥防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 石家莊 050091)

血脂異常是以血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)增高和(或)高密度脂蛋白(HDL)降低為主要特征的代謝性疾病[1]。祖國(guó)醫(yī)學(xué)無(wú)“血脂”或“血脂異?！敝?，常將其引起的諸多癥狀歸于各種內(nèi)傷雜病中?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》記載“甘肥貴人，則膏粱之疾也”，張志聰在《靈樞集注》有“精微溢于外則皮肉膏肥，余于內(nèi)則膏脂豐滿(mǎn)”等論述，可見(jiàn)血脂異常符合“膏粱之疾、膏脂豐滿(mǎn)”的描述，且中醫(yī)認(rèn)為膏、脂皆為水谷精微所化有益物質(zhì)，而嗜食肥甘酒醪，膏脂過(guò)多又可釀生痰濁而致諸多疾病，這與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)血脂的認(rèn)識(shí)是不謀而合的。近年來(lái)，隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和飲食習(xí)慣的改變，血脂異常發(fā)病率逐年上升，我國(guó)人群的血脂異常總體患病率已高達(dá)40.40%[1]，美國(guó)成人單項(xiàng)低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)異常者超1億[2]。另外，該病呈低齡化趨勢(shì)，高膽固醇血癥在兒童和青少年中的患病率也明顯增加。血脂異常與脂肪肝、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、糖尿病和腦卒中等多種疾病密切相關(guān)[3]，現(xiàn)已發(fā)展為全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題，嚴(yán)重威脅人類(lèi)生命健康。世界衛(wèi)生組織報(bào)道由血脂異常誘發(fā)的心血管疾病死亡已占據(jù)了非感染性疾病死亡的一半以上[4]。

祖國(guó)醫(yī)學(xué)源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，大量數(shù)據(jù)證明，中藥在防治血脂異常的研究方面效果顯著，其具有多途徑、多靶點(diǎn)、多層次調(diào)節(jié)血脂異常，且不良反應(yīng)少、藥物依賴(lài)性低的優(yōu)點(diǎn)[5]。李平平等[6]通過(guò)隨機(jī)對(duì)照研究證實(shí)中成藥脂必泰膠囊治療血脂異常臨床療效可靠，與阿托伐他汀鈣在治療血脂異常方面臨床療效相當(dāng)，且安全可靠。卓冰帆等[7]通過(guò)臨床研究發(fā)現(xiàn)對(duì)于痰濕內(nèi)阻型高脂血癥合并脂肪肝患者，服用山荷降脂湯能明顯降低血脂，改善血液流變學(xué)且不良反應(yīng)少。趙穎等[8]通過(guò)對(duì)黃連素治療血脂異常有效性進(jìn)行Meta分析和安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示單用黃連素與他汀藥物對(duì)照時(shí)，其降低TC、TG、LDL-C的療效與他汀相當(dāng)并且具有良好的安全性。李越等[9]使用Meta分析的方法，對(duì)中藥健脾法治療血脂異常的臨床療效以及安全性進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)中醫(yī)健脾法聯(lián)合常規(guī)西藥治療高脂血癥或單純中醫(yī)健脾法，均較單純西藥降脂在總有效率方面具有一定的優(yōu)勢(shì)，且不良反應(yīng)較小。動(dòng)物試驗(yàn)亦表明中藥有效成分梔子苷[10]可通過(guò)上調(diào)miR-142a-5p，達(dá)到抑制脂質(zhì)代謝基因SREBP-1c肝表達(dá)水平的作用，從而有效降低高脂模型小鼠血清脂質(zhì)水平，并對(duì)肝脂質(zhì)蓄積有良好的治療作用。Sun等[11]通過(guò)代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)五味子木脂素可顯著抑制肝臟脂肪生成基因的mRNA表達(dá)水平，并降低肝X受體α(LXRα)的mRNA表達(dá)，具有良好的調(diào)節(jié)血脂異常作用，其作用機(jī)制與三羧酸循環(huán)、酮體和TC合成、膽堿代謝和脂肪酸代謝有關(guān)。Huang等[12]研究表明普洱茶中的茶黃素可以減少腸道膽鹽水解酶活性相關(guān)的微生物，從而改變小鼠和人類(lèi)的腸道菌群和微環(huán)境，達(dá)到調(diào)節(jié)血脂異常的良好效果。但由于中醫(yī)醫(yī)家臨證經(jīng)驗(yàn)和遣方用藥規(guī)律各具特色，加之中藥復(fù)方化學(xué)成分復(fù)雜，其作用機(jī)制并不明確，大大影響了臨床應(yīng)用。近年來(lái)，數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)[13]和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法[14-17]在中醫(yī)藥組方規(guī)律和作用機(jī)制研究中應(yīng)用日益廣泛，中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)(V2.5)是一款適合中醫(yī)藥特點(diǎn)的數(shù)據(jù)挖掘軟件，集合了數(shù)理統(tǒng)計(jì)、文本挖掘、關(guān)聯(lián)規(guī)則和復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類(lèi)等分析方法，可以總結(jié)中醫(yī)在臨床用藥過(guò)程中的用藥和配伍規(guī)律，并從中發(fā)現(xiàn)新的處方和核心藥對(duì)[18]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)強(qiáng)調(diào)從“單靶標(biāo)”向“網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)”研究模式的轉(zhuǎn)變，作為藥物研究的新模式，其研究特點(diǎn)和中醫(yī)理論中的整體觀念、辨證論治及配伍原則相一致[15,17]。李梢課題組[17,19]提出并利用“網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)”的方法，從中醫(yī)傳統(tǒng)的絡(luò)病方劑中提取了中藥核心配伍網(wǎng)絡(luò)，從網(wǎng)絡(luò)中預(yù)測(cè)出了多種成分的抗血管新生作用，并且得到了證實(shí)，成為利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的典范。該課題組[19-20]還通過(guò)中藥-靶標(biāo)-疾病的多層網(wǎng)絡(luò)聯(lián)合模塊分析，對(duì)中藥方劑配伍理論開(kāi)展研究，發(fā)現(xiàn)中藥六味地黃方治療疾病的表型多富集于代謝和免疫等通路，對(duì)該藥滋陰的傳統(tǒng)功效和臨床上“異病同治”的機(jī)制給出了新的闡釋。因此，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與中醫(yī)藥的有機(jī)結(jié)合是當(dāng)前中醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。馬麗娟等[21]采用數(shù)據(jù)挖掘方法獲得新冠肺炎預(yù)防核心藥組，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)其通過(guò)基礎(chǔ)代謝和炎癥相關(guān)通路發(fā)揮預(yù)防療效。嚴(yán)瑤琦等[22]采用中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)和BATMAN-TCM[23]在線分析工具，對(duì)治療痛風(fēng)濕熱蘊(yùn)結(jié)證的核心藥組進(jìn)行KEGG通路分析，揭示了藥物配伍規(guī)律和作用機(jī)制。尕藏措[24]采用數(shù)據(jù)挖掘的方法分析了藏醫(yī)治療高原紅細(xì)胞增多癥(HAPC)中高頻次使用的藏藥，并進(jìn)一步通過(guò)KEGG進(jìn)行通路注釋及GO功能富集分析研究了作用機(jī)制。因此，本課題組全面檢索并收集了近40年以來(lái)(1979年-2019年)中藥復(fù)方治療血脂異常的臨床研究文獻(xiàn)報(bào)道2萬(wàn)余篇，經(jīng)過(guò)篩選納入符合研究標(biāo)準(zhǔn)的786篇，將中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在線分析工具BATMAN-TCM結(jié)合使用，對(duì)其用藥規(guī)律和潛在作用信號(hào)通路進(jìn)行了分析，從宏觀和微觀2個(gè)角度去挖掘中醫(yī)組方規(guī)律及作用機(jī)制，為更好的防治該病提供新思路。

1 資料與方法

1.1 處方來(lái)源

檢索1979-2019年“中國(guó)知網(wǎng)(CNKI)”“萬(wàn)方數(shù)據(jù)”“維普中文期刊”數(shù)據(jù)庫(kù)中關(guān)于中醫(yī)藥治療“血脂異?！钡呐R床文獻(xiàn)。檢索方法為：運(yùn)用關(guān)鍵詞“血脂異?！薄案哐薄案哐Y”等進(jìn)行初級(jí)檢索，從數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索到相關(guān)文獻(xiàn)后，運(yùn)用關(guān)鍵詞“中藥”“中醫(yī)”“臨床”“醫(yī)案”“經(jīng)驗(yàn)”“療效”“觀察”“報(bào)道”等分別進(jìn)行二次檢索，在上述機(jī)檢的基礎(chǔ)上，根據(jù)文獻(xiàn)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行逐一篩選，完成第3次檢索。文獻(xiàn)篩選流程見(jiàn)圖1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

①血脂異常的中醫(yī)治療臨床研究資料，包括隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)、病例報(bào)告和專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn)等；②干預(yù)措施為中藥復(fù)方，給藥途徑為口服；③文獻(xiàn)中有明確方藥組成、劑量和治療效果；④研究病例數(shù)30例以上；⑤公開(kāi)的期刊、會(huì)議、學(xué)位論文文獻(xiàn)，有復(fù)診的文獻(xiàn)只取首次處方；⑥方藥組成完全相同，或同一作者發(fā)表多篇文章，以1篇計(jì)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

①非臨床研究，包括實(shí)驗(yàn)研究文獻(xiàn)、科普性期刊和綜述等；②外用中藥、針灸、耳穴、刮痧等非口服湯劑治療者；③臨床診療情況與文獻(xiàn)描述差異過(guò)大，方劑組成不完整或劑量表述不準(zhǔn)確者；④臨床總有效率低于85%的文獻(xiàn)報(bào)道；⑤在1個(gè)方劑基礎(chǔ)上根據(jù)不同證型辨證加減的文獻(xiàn)報(bào)道。

1.4 處方篩選及藥名規(guī)范

按照上述標(biāo)準(zhǔn)篩選后，共786篇文獻(xiàn)符合檢索條件，文獻(xiàn)來(lái)源期刊年度分布見(jiàn)圖2；文獻(xiàn)來(lái)源期刊類(lèi)型分布見(jiàn)圖3；提取中復(fù)方組成，共得到方劑786首，包含中藥314味，方劑類(lèi)型分布見(jiàn)圖4。根據(jù)《中藥學(xué)》(全國(guó)高等中醫(yī)藥院校規(guī)劃教材新世紀(jì)第4版)規(guī)范整理文獻(xiàn)內(nèi)中藥名稱(chēng)[25]，對(duì)于書(shū)中未記錄的藥物，按照《中國(guó)藥典》(2015年版)對(duì)中藥名進(jìn)行統(tǒng)一[26]。如：“紫丹參”統(tǒng)一記錄為“丹參”；“田七”統(tǒng)一記錄為“三七”；“炒棗仁”“棗仁”統(tǒng)一記錄為“酸棗仁”等。

圖2 文獻(xiàn)來(lái)源期刊年度分布

圖3 文獻(xiàn)來(lái)源期刊類(lèi)型分布

圖4 方劑類(lèi)型分布

1.5 數(shù)據(jù)錄入與核對(duì)

將篩選并規(guī)范后的處方錄入到中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)(V2.5)臨床采集模塊，該軟件是由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所聯(lián)合中國(guó)科學(xué)院自動(dòng)化研究所共同研制的統(tǒng)計(jì)分析軟件。全程錄入過(guò)程均由兩人配合完成，1人錄入1人審核，保證數(shù)據(jù)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

1.6.1 基于頻次統(tǒng)計(jì)分析

將藥物出現(xiàn)頻次從大到小進(jìn)行排序；對(duì)藥物類(lèi)別、性味和歸經(jīng)屬性占比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并將結(jié)果分別導(dǎo)出。

1.6.2 基于關(guān)聯(lián)規(guī)則分析

關(guān)聯(lián)規(guī)則[27]是分析項(xiàng)集之間頻繁模式、因果結(jié)構(gòu)和相關(guān)關(guān)系的數(shù)據(jù)算法，可對(duì)常用藥物組合、配伍規(guī)律進(jìn)行分析總結(jié)，并對(duì)創(chuàng)制新處方提供依據(jù)。“支持度”設(shè)置為20(支持度表示藥物組合在所選處方中出現(xiàn)的頻率，平臺(tái)默認(rèn)支持度為20)，“置信度”設(shè)置為0.9(置信度表示在藥物組合中，當(dāng)A出現(xiàn)時(shí)，B出現(xiàn)的概率，數(shù)值越靠近1，表示概率越大，如決明子→山楂0.915，表示決明子出現(xiàn)時(shí)，山楂出現(xiàn)的概率為91.5%)。根據(jù)藥組出現(xiàn)頻次進(jìn)行排序，通過(guò)“規(guī)則分析”功能得到常用藥物組合，并進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)可視化展示。

1.6.3 基于熵聚類(lèi)方法分析

熵聚類(lèi)分析法[27]能定量、定性分析藥物之間的相關(guān)性，特別是對(duì)挖掘具有混合型、離散型和連續(xù)型特點(diǎn)的數(shù)據(jù)具有優(yōu)勢(shì)，能揭示中藥核心組合以及用藥規(guī)律。使用平臺(tái)默認(rèn)數(shù)值，將“相關(guān)度”設(shè)置為8(相關(guān)度表示兩個(gè)事物間存在相互聯(lián)系的百分比)，“懲罰度”設(shè)置為2(懲罰度表示為了減少負(fù)面數(shù)據(jù)信息干擾的1個(gè)參數(shù))的條件進(jìn)行約束，通過(guò)復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類(lèi)算法演化出核心藥物組合，在此基礎(chǔ)上再運(yùn)用無(wú)監(jiān)督的熵層次聚類(lèi)算法演化出新處方。

1.7 作用機(jī)制分析

1.7.1 高頻藥組活性成分和潛在靶點(diǎn)分析

將組方規(guī)律分析中得到的核心藥物配伍錄入到BATMAN-TCM在線分析平臺(tái)，設(shè)定預(yù)測(cè)候選目標(biāo)(包括已知目標(biāo))得分不小于每個(gè)成分得分分界的20%，AdjustP-value設(shè)為0.05，獲取核心藥味活性成分和相應(yīng)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行生物信息學(xué)分析。

1.7.2“潛在靶點(diǎn)-信號(hào)通路-疾病”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

采用BATMAN-TCM在線分析系統(tǒng)，將核心高頻藥組的活性成分、作用疾病和潛在靶點(diǎn)作為“節(jié)點(diǎn)”，灰色的連線能可視化呈現(xiàn)節(jié)點(diǎn)間，直接、間接的調(diào)控關(guān)系，構(gòu)建核心高頻藥組的“潛在靶點(diǎn)-信號(hào)通路-疾病”網(wǎng)絡(luò)。

1.7.3 基因富集分析和通路注釋研究

通過(guò)基因本體(GO)和京都基因與基因組百科全書(shū)(KEGG)對(duì)藥物作用靶點(diǎn)的分子功能(MF)、細(xì)胞組分(CC)以及參與的生物過(guò)程(BP)和差異表達(dá)基因進(jìn)行信號(hào)通路分析，并依據(jù)P-value排名，將通路依次展示在結(jié)果中。通過(guò)研究核心高頻藥組的生物信號(hào)通路等生物學(xué)信息，可預(yù)測(cè)其發(fā)揮生物學(xué)功能的作用機(jī)制。

2 結(jié)果

2.1 藥物頻次

在篩選的786首方劑中，共包含中藥314味，使用藥物總頻次共4724次，其中27味藥物使用頻次超過(guò)10%，統(tǒng)計(jì)排名前10味中藥依次為山楂、澤瀉、丹參、決明子、茯苓、何首烏、白術(shù)、黃芪、大黃、陳皮，具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 藥物頻次統(tǒng)計(jì)

2.2 藥物功效

27味高頻次藥物按照功效統(tǒng)計(jì)，使用頻次較高的藥物依次為活血化瘀藥、補(bǔ)虛(健脾補(bǔ)腎為主)藥、利水滲濕藥、消食化積藥，具體結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 藥物功效統(tǒng)計(jì)

2.3 藥物性味和歸經(jīng)

27味高頻次藥物中，四氣頻次最高為溫性，其次為涼性，具體結(jié)果見(jiàn)圖5；五味頻次最高為苦味，其次為甘味，具體結(jié)果見(jiàn)圖6。藥物歸經(jīng)頻次最高為肝經(jīng)，其次為脾經(jīng)、胃經(jīng)，具體結(jié)果見(jiàn)圖7。

圖5 藥物四氣頻次統(tǒng)計(jì)

圖6 藥物五味頻次統(tǒng)計(jì)

圖7 藥物歸經(jīng)頻次統(tǒng)計(jì)

2.4 基于關(guān)聯(lián)規(guī)則的組方規(guī)律

當(dāng)支持度=20，置信度=0.9時(shí)，共得到常用藥對(duì)(藥組)17個(gè)，按藥物組合出現(xiàn)頻次由高到低排序，見(jiàn)表3。核心組方中藥6味，分別為：山楂、澤瀉、丹參、決明子、茯苓、何首烏，網(wǎng)絡(luò)展示見(jiàn)圖8。當(dāng)置信度≥0.9時(shí)，統(tǒng)計(jì)顯示多種藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則和組合模式，按照置信度升序排序，分別為決明子+山楂，決明子、澤瀉+山楂，決明子、丹參+山楂，具體結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 處方中高頻藥物的關(guān)聯(lián)規(guī)則(置信度≥0.9)

圖8 核心藥物關(guān)系網(wǎng)絡(luò)

表3 處方中的高頻藥物組合

2.5 基于熵聚類(lèi)的組方規(guī)律

2.5.1 基于復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類(lèi)的核心藥物組合分析

使用平臺(tái)默認(rèn)數(shù)值，通過(guò)復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類(lèi)分析，得到核心藥物組合22組，作為演化提取新處方的基礎(chǔ)(表5)。

表5 處方中的核心藥物組合

2.5.2 基于無(wú)監(jiān)督熵層次聚類(lèi)的新方組合分析

結(jié)合上述核心藥物組合提取結(jié)果，獲得新處方11個(gè)(表6)。

表6 防治血脂異常的新處方

2.6 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)高頻藥組治療血脂異常的作用機(jī)制

基于數(shù)據(jù)挖掘研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)山楂、澤瀉和決明子是防治血脂異常的高頻藥物，三藥不僅作為常用藥物組合出現(xiàn)，而且也在生成的新處方中列出。通過(guò)BATMAN-TCM在線分析系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)，三藥共涉及182個(gè)有結(jié)構(gòu)信息的化合物，71個(gè)無(wú)結(jié)構(gòu)信息。通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)雌激素受體1(ESR1)、大麻素受體1型(CNR1)、糖皮質(zhì)激素受體基因(NR3C1)、環(huán)氧合酶2(PTGS2/COX2)等可作為藥組的核心潛在靶點(diǎn)調(diào)控人體血脂水平。三藥潛在靶點(diǎn)所涉及的疾病共21種，主要包括高血壓、腦損傷、心力衰竭、疼痛、心律失常、藥物依賴(lài)等。三藥所含化合物及其對(duì)應(yīng)潛在靶點(diǎn)、信號(hào)通路與疾病的網(wǎng)絡(luò)圖展示(圖9)。

圖9 潛在靶點(diǎn)、信號(hào)通路與疾病網(wǎng)路圖

進(jìn)一步KEGG通路分析顯示，“山楂、澤瀉和決明子”對(duì)應(yīng)潛在靶點(diǎn)富集的生物通路46條，其中對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)數(shù)在20以上的有17條。該高頻藥組涉及三羧酸(TCA)循環(huán)、脂質(zhì)代謝、脂肪酸降解等調(diào)節(jié)血脂相關(guān)的關(guān)鍵信號(hào)通路，從而揭示了調(diào)節(jié)血脂功能的作用機(jī)制(圖10)。此外，神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、和氨基酸代謝(如組氨酸、絡(luò)氨酸等)作為靶點(diǎn)數(shù)量較多的信號(hào)通路也參與其中。

圖10 KEGG關(guān)鍵通路分析圖

通過(guò)GO功能分析，“山楂、澤瀉和決明子”所涉及的生物過(guò)程和分子功能如圖11所示，三藥除共同參與一些基礎(chǔ)代謝過(guò)程外，還可直接參與脂質(zhì)合成與代謝、免疫和循環(huán)系統(tǒng)進(jìn)程、細(xì)胞間信號(hào)傳遞過(guò)程等，可見(jiàn)該藥組通過(guò)介導(dǎo)多個(gè)生物過(guò)程維持機(jī)體血脂正常代謝。

圖11 GO功能分析圖

3 討論

血脂異常屬現(xiàn)代醫(yī)學(xué)之病名，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與糖脂代謝異常、胰島素抵抗、血小板聚集等多種因素有關(guān)。中醫(yī)文獻(xiàn)將其歸納到“痰濁”“血瘀”“膏梁之疾”等范疇。中醫(yī)學(xué)者多認(rèn)為[28-32]，血脂異常多因嗜食肥甘、脾胃受損，中焦失運(yùn)、聚濕為痰，脈絡(luò)瘀滯、痰瘀互結(jié)為病，或七情太過(guò)、肝腎虧虛，肝郁犯脾、脾失運(yùn)化，導(dǎo)致痰瘀內(nèi)生。因此本病多為本虛標(biāo)實(shí)之證，與肝、脾、腎三臟關(guān)系密切，脾虛、腎虛為其本，痰凝、血瘀為其標(biāo)，治療多用健脾補(bǔ)腎、活血化瘀、祛濕化痰之法。

本研究從宏觀角度看，通過(guò)中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)對(duì)血脂異常方藥組成規(guī)律進(jìn)行研究，收集了近40年的相關(guān)文獻(xiàn)，在786首方劑組成中，使用頻次排名靠前的有山楂、澤瀉、丹參、決明子、茯苓、何首烏等27味中藥，根據(jù)功效分類(lèi)，這些高頻次的藥物以活血化瘀、健脾補(bǔ)腎、利水滲濕和消食化積功效為主，這與中醫(yī)對(duì)血脂異?；颊哐觥⑵⑻摵吞禎岵C(jī)的認(rèn)識(shí)相一致[28-32]。使用頻次排列居首的藥物為山楂，其功效以消食化積、活血散瘀為主?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，山楂黃酮[33]作為山楂提取物，可通過(guò)調(diào)節(jié)血脂代謝及相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)，顯著降低血脂異常小鼠的血清總膽固醇和甘油三酯。利水滲濕藥中澤瀉是出現(xiàn)頻次最高的，侯少偉等[34]研究證實(shí)，澤瀉所含皂苷類(lèi)成分可明顯降低大鼠血清TC和LDL-C的水平，并可改善大鼠肝臟脂肪變性程度。決明子是使用頻次最高的清熱藥，既善清肝熱，又兼益腎陰，鄧楠等[35]研究了決明子水提物治療高脂血癥大鼠血漿中9種明顯生物標(biāo)志物含量的變化，證明決明子水提物不僅能作用于氨基酸及脂肪酸的代謝通路，而且還有很好的調(diào)脂作用。由此可見(jiàn)，采用數(shù)據(jù)挖掘方法得出的高頻中藥，其防治血脂異常亦有現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)。從性味歸經(jīng)看，性溫，味苦甘，歸肝、脾、胃三經(jīng)的藥物最多。脾氣主升，其升清全賴(lài)于陽(yáng)氣的蒸騰，溫性藥物的大量應(yīng)用，正是國(guó)醫(yī)大師路志正調(diào)理脾胃思想“脾病治宜溫補(bǔ)升陽(yáng)燥濕”的重要體現(xiàn)[36]?？嗄苄埂⒛茉?、能堅(jiān)，《儒門(mén)事親·水腫黃膽第十五》提出“濕氣在上，以苦吐之，濕氣在下，以苦瀉之”，苦味藥物的大量應(yīng)用表明血脂異常的臨床治療應(yīng)重視濕邪。甘味可以補(bǔ)益，健脾益腎中藥是治療血脂異常的常用藥物，在臨床診療中運(yùn)用健脾益氣、補(bǔ)腎填精法可起到顯著療效。藥物歸經(jīng)顯示，脾主運(yùn)化，說(shuō)明血脂異常的病機(jī)以脾虛胃弱、運(yùn)化失常為主，肝主疏泄，可助脾運(yùn)化，若肝氣條達(dá)，則脾氣健運(yùn)，水谷津液輸布正常，痰濕自消。郭姣及其團(tuán)隊(duì)[37]認(rèn)為血脂異常等糖脂代謝病臨床多表現(xiàn)與“肝”相關(guān)的證候，治療中加入“調(diào)肝”中藥可使療效顯著提高，本研究結(jié)果與其認(rèn)識(shí)相一致。在基于關(guān)聯(lián)規(guī)則的組方用藥規(guī)律研究中，綜合支持度和置信度排名發(fā)現(xiàn)高頻藥組是“山楂、澤瀉和決明子”。山楂歸脾經(jīng)和肝經(jīng)，以消食化積，活血祛瘀見(jiàn)長(zhǎng)；澤瀉歸腎經(jīng)，以利水滲濕，泄熱化飲見(jiàn)長(zhǎng)；決明子歸肝經(jīng)，以清肝明目，利水通便見(jiàn)長(zhǎng)；三藥配伍可對(duì)水濕、痰飲、瘀血同治，尤以治標(biāo)見(jiàn)長(zhǎng)。楊靜云等[38,39]發(fā)現(xiàn)中藥組合“山楂、澤瀉和決明子”經(jīng)紅曲霉發(fā)酵后，能顯著提高中藥有效成分的含量，且發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)高脂血癥大鼠血脂水平具有良好的調(diào)節(jié)作用和安全性。在熵聚類(lèi)的組方規(guī)律分析中，生成新處方11個(gè)。其中也包含“山楂、澤瀉和決明子”藥組的新處方(處方8)，該組合中何首烏屬于補(bǔ)益藥，可補(bǔ)精血、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨，干姜性溫、入脾經(jīng)，起到溫陽(yáng)健脾功效，同時(shí)與“山楂、澤瀉和決明子”合用，共奏疏肝活血、除濕化痰之功。此外，處方1和處方2均是以滋補(bǔ)肝腎為主方劑，所治病位在肝腎下焦，處方1由淫羊藿、肉桂、黑大豆、五加皮組成，側(cè)重于溫補(bǔ)腎陽(yáng)，壯火益氣，治療命門(mén)火衰，下焦虛寒之證；處方2由鉤藤、杜仲、桑寄生、酸棗仁、首烏藤組成，側(cè)重于滋補(bǔ)肝腎，養(yǎng)血安神，治療肝腎不足，肝陽(yáng)上亢，擾動(dòng)心神之證。處方3至處方10均是化痰利濕為主的方劑，處方3和處方5所治病位都在肝，其中處方3由桔梗、枳實(shí)、柴胡、竹茹、膽南星組成，以疏肝理氣，化痰祛濕為主，適合痰濕壅盛，肝氣疏泄不利之證；處方5，由虎杖、郁金、茵陳、金櫻子組成，以疏肝解郁，利濕退黃為主，適合肝膽濕熱之證。處方3和處方6，所治病在心，都具有開(kāi)竅醒神作用，其中處方6，由天竺黃、石菖蒲、僵蠶、竹茹、膽南星組成，以祛濕化痰，開(kāi)竅醒神為主，適合痰濕閉阻心竅，心神不寧之證；處方四，由澤蘭、雞內(nèi)金、白茅根、大腹皮、苦丁茶組成，以清熱利濕，行氣消食為主，所治在下焦，適合痰濕阻滯下焦，腑氣不通，小便不利之證。處方7，由槐花、酸棗仁、黃柏、毛冬青、冰片組成，以清熱涼血，開(kāi)竅醒神為主，適用于血熱擾動(dòng)，蒙蔽心神之證。處方9和處方10均為理氣化痰之劑，所治病位均在中焦，其中處方9，由砂仁、檀香、黃連、木香、白豆蔻組成，以清熱燥濕，理氣化痰為主，適合濕熱阻滯脾胃，中焦運(yùn)化不利之證。處方10，由白術(shù)、茯苓、陳皮、半夏組成，是二陳湯加白術(shù)而成，以健脾益氣，燥濕化痰為主，適合脾虛生濕之證。處方11是桃紅四物湯加上地龍而成，重在涼血活血，化瘀通絡(luò)，適合血熱兼血瘀之證。綜合分析，新處方的藥物組成反映了血脂異常的生成與肝氣郁滯、脾腎兩虛、痰濕阻滯、血熱成瘀等病理因素相關(guān)。

本研究從微觀角度看，采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)高頻藥組的作用機(jī)制進(jìn)行分析。由于新處方8中的“山楂、澤瀉和決明子”藥物組合，是關(guān)聯(lián)規(guī)則分析中的高頻藥物配伍，故將此藥組作為研究對(duì)象。BATMANTCM平臺(tái)是第1個(gè)專(zhuān)門(mén)研究中藥分子機(jī)制的在線生物信息學(xué)分析工具，其可展示中藥成分、中藥作用靶點(diǎn)和疾病的關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，體現(xiàn)了中藥多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的作用機(jī)制，可為進(jìn)一步通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證作用機(jī)制指明方向[23]。Zhang等[40]使用BATMAN-TCM平臺(tái)分析表明乳炎內(nèi)消膏的潛在靶點(diǎn)可能為ESR1、PGR、PTGS2、EGFR、Src，隨后通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了乳炎內(nèi)消膏可以下調(diào)MCF-10AT細(xì)胞中ESR1、PGR、PTGS2、EGFR和Src基因和蛋白的表達(dá)水平，與平臺(tái)預(yù)測(cè)結(jié)果一致。Gong等[41]使用BATMAN-TCM平臺(tái)分析出IL-10、TNF-α等細(xì)胞因子是藏藥青鵬軟膏主要成分的效應(yīng)分子，同時(shí)也分析了青鵬軟膏相關(guān)的慢性皮炎相關(guān)分子和細(xì)胞信號(hào)通路信息，后通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了青鵬軟膏在降低IL-10、TNF-α水平方面顯示出良好的抑制作用，間接證明了該平臺(tái)分析的相對(duì)準(zhǔn)確性。因此，本研究采用該工具對(duì)“山楂、澤瀉和決明子”藥組防治血脂異常作用機(jī)制進(jìn)行預(yù)測(cè)和分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在其所富集的疾病中，高血壓、腦損傷、心力衰竭、疼痛與本病的關(guān)系最大。高脂血癥可通過(guò)信息傳導(dǎo)和代謝調(diào)節(jié)，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)尤其是腦部造成損害[42]。研究表明如果采用同時(shí)控制血脂、血糖和血壓的多因素干預(yù)策略，可最大程度降低冠心病、心力衰竭等心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)[43]。在該藥組富集的生物學(xué)通路中，TCA循環(huán)、脂質(zhì)代謝和脂肪酸降解通路與血脂調(diào)節(jié)密切相關(guān)。李玉晶等[44]研究表明決明子蒽醌苷可通過(guò)脂質(zhì)代謝通路中固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1C(SREBP-1c)和過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體ɑ(PPARα)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)而達(dá)到改善肝功能、調(diào)節(jié)血脂的作用。該藥組調(diào)治血脂異常的潛在作用靶點(diǎn)，主要包括與調(diào)節(jié)激素有關(guān)的ESR1、NR3C1，與調(diào)節(jié)脂肪分布和代謝有關(guān)的CNR1，以及與炎癥和疼痛相關(guān)的PTGS2/COX2等。Zhao等[45]研究表明絕經(jīng)后中國(guó)漢族女性中ESR1和ESR2的多態(tài)性，與代謝綜合征及相關(guān)因素(如肥胖、脂質(zhì)和葡萄糖代謝)密切相關(guān)。Kaya等[46]評(píng)價(jià)了NR3C1的多態(tài)性對(duì)代謝綜合征患者的影響，研究發(fā)現(xiàn)NR3C1受體活性受損是誘發(fā)代謝綜合征的重要病因。Numakura等[47]通過(guò)對(duì)腎移植后血脂異常患者進(jìn)行特征分析，發(fā)現(xiàn)NR3C1 Bcl1 G等位基因可作為血脂異常的重要危險(xiǎn)因素。CNR1可參與糖皮質(zhì)激素對(duì)脂肪分解的調(diào)節(jié)，在2型糖尿病和胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下表達(dá)上調(diào)，有研究報(bào)道[48]外周CNR1可作為2型糖尿病和血脂異常的1個(gè)關(guān)鍵藥物靶點(diǎn)。李曉東等[49]研究則發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用高、低劑量的山楂活性成分(山楂葉總黃酮)干預(yù)非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠，其肝組織炎癥程度明顯降低，COX2 mRNA和蛋白表達(dá)較模型組水平下降。NASH的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有COX-2/Nrf2通路的參與，而山楂葉總黃酮能通過(guò)促進(jìn)Nrf2/HO-1表達(dá)，負(fù)向調(diào)節(jié)COX-2，從而減輕氧化反應(yīng)所導(dǎo)致的細(xì)胞損傷和肝組織炎癥，抑制了NASH的進(jìn)展。另外，血脂異常容易誘發(fā)心絞痛、冠心病等心血管疾病，也有研究表明[50]編碼COX2的PTGS2基因變異(rs20417)與心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)降低有關(guān)。

綜上所述，本文采用了數(shù)據(jù)挖掘結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法，總結(jié)了中醫(yī)臨床防治血脂異常的用藥規(guī)律，挖掘出了部分常用藥對(duì)及新方組合，分析了“山楂、澤瀉和決明子”藥物組合可能作用的潛在靶點(diǎn)、涉及的關(guān)鍵信號(hào)通路，對(duì)理解和傳承中醫(yī)醫(yī)家治療血脂異常的經(jīng)驗(yàn)與思想，及完善該病的中醫(yī)辨證論治體系具有一定借鑒意義。但本文所采用的中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)和BATMAN-TCM分析軟件也存在局限性，主要是所依賴(lài)的現(xiàn)有數(shù)據(jù)中仍存在許多不確定性，缺乏大樣本、多中心研究，在線相關(guān)的數(shù)據(jù)庫(kù)需要及時(shí)更新和完善。另外，納入文獻(xiàn)質(zhì)量也有待進(jìn)一步提高，具體表現(xiàn)在各配方中有效成分的定義不完整，各配方中各成分的定量信息缺失等，尤其是中藥有效成分和靶點(diǎn)之間關(guān)系的機(jī)制研究還需進(jìn)一步結(jié)合實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。在臨床診療中，需要重視各處方中的藥物用量以及君臣佐使的構(gòu)成情況，同時(shí)還需明確處方所治血脂異常的主癥、兼癥，做到選方遣藥明辨病機(jī)，隨癥化裁。