復方寧神精油對失眠大鼠行為學及下丘腦GABA、GLU含量的影響＊

于佳慧，鄭驍洋，譚麗博，劉 燕，陳麗琴，胡文瀟，何青鋆，王若沖，仁青加，李 峰＊＊

(1.北京中醫(yī)藥大學中醫(yī)學院 北京 102488；2.西藏藏醫(yī)學院藏醫(yī)藥研究所 西藏自治區(qū) 850000)

失眠是由于身體或心理等多種因素導致，臨床主要表現(xiàn)為入睡困難、睡后易醒、醒后無法再睡或時睡時醒、日間困乏等，長此以往會導致患者出現(xiàn)認知功能障礙，甚至會伴有焦慮和抑郁，造成患者生理性、病理性變化，嚴重影響日常生活[1]。有研究表明，失眠嚴重程度越高，自殺傾向越高[2]。隨著人們生活節(jié)奏的加速，失眠癥的發(fā)病率也愈發(fā)升高。有調(diào)查表明失眠發(fā)病率為4%-48%[3]。根據(jù)國外學者流行病學調(diào)查顯示10%-30%的人群遭受失眠的影響[4]。因此失眠作為世界范圍內(nèi)的常見疾病，對人們?nèi)粘Ｉ詈凸ぷ髟斐闪司薮罄_，對失眠的關注愈發(fā)成為當前社會亟待解決的健康問題[5]。

現(xiàn)代臨床通常采用鎮(zhèn)靜安眠藥物、抗抑郁藥等方法來改善患者睡眠，長期使用會出現(xiàn)藥物依賴、睡眠節(jié)律紊亂等諸多副作用，這在一定程度上限制了臨床治療的效果[6]。因此有不少研究者意識到非藥物治療睡眠障礙的重要意義[7]。關于失眠的非藥物治療方法多種多樣，芳香療法作為一種獨特的治療手段，歷史悠久，古人一直以來都有用芳香藥物辟穢除邪、強身健體、治療疾病的習慣[8]。早在公元前1300年，我國西藏自治區(qū)關于芳香療法應用也有記載，其中藏香的使用一直以來深受藏區(qū)人民青睞，藏香的主要藥物組成中的檀香能理氣寬胸，清心熱；丁香降逆下行，可引陽入于陰；肉蔻可行氣行血等，諸藥共奏可起到開郁降逆、振奮精神，改善睡眠，緩解疲勞的作用[9]。隨著現(xiàn)代技術的進步芳香療法的應用拓展了精油和香薰等多種劑型，使用更加安全便攜。有研究表明伊朗和韓國應用芳香療法多采用精油香薰治療失眠，試分析其原因，可能與給藥方式簡便易行安全性高有關[10]。精油香薰吸入法是通過嗅覺通路引起相關腦區(qū)的活化[11]。而且精油香薰與治療失眠的口服藥物相比安全性強，且能減少首過消除和對胃腸道刺激[12]?，F(xiàn)代研究表明γ-氨基丁酸(GABA)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中重要的抑制性遞質(zhì)，谷氨酸(Glu)是主要的興奮性遞質(zhì)，Glu/GABA穩(wěn)態(tài)發(fā)揮對中樞興奮性神經(jīng)元的抑制作用，產(chǎn)生鎮(zhèn)靜催眠作用[13]。且在失眠相關的腦區(qū)中，下丘腦等其特定結構以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)作用與失眠關系密切[14]。

綜上所述，本實驗采用藏香中治療失眠的主要藥物檀香、丁香、肉蔻，調(diào)配復方寧神精油為探究精油香薰療法治療失眠的療效，以香薰不同濃度復方寧神精油對失眠大鼠睡眠情況進行觀察，并通過行為學實驗觀察復方寧神精油對失眠大鼠的不良情緒作用，運用ELISA技術檢測下丘腦內(nèi)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量變化，進一步采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)對精油的化合物成分進行分析，從而研究復方寧神精油對大鼠睡眠和情緒調(diào)節(jié)的可能機制，為精油香薰治療失眠的臨床應用提供參考。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

健康雄性大鼠SD大鼠，50只，體質(zhì)量(180±20)g，SPF級由斯貝福(北京)生物技術有限公司提供，動物許可證號(SCXK(京)2019—0010)大鼠適應性飼養(yǎng)7天，室溫23(±1)℃；普通維持飼料喂養(yǎng)，自由飲水保持墊料干燥，環(huán)境安靜。

1.2 實驗藥品及試劑

復方寧神精油以單方檀香、丁香、肉蔻精油以一定比例組配，分別與蒸餾水配成1%、0.5%、0.25%的高、中、低3個濃度。檀香精油(北京茂思商茂有限公司，北京)，丁香和肉蔻精油(Aroma，法國)；對氯苯丙氨酸(D-4-Chlorophenylalanine，PCPA)(Sigma，美國)；戊巴比妥鈉(SPI，美國)；Glu、GABA酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)測定試劑盒(北京晶萊生物有限公司，北京)。

1.3 實驗儀器

香薰機(北京綠源恒泰醫(yī)療器械有限公司，北京)；ACS—ZEAS型電子秤(Satorius公司，德國)；曠場實驗箱(北京眾實迪創(chuàng)科技發(fā)展有限公司，北京)；高架十字迷宮(北京眾實迪創(chuàng)科技發(fā)展有限公司，北京)；Multiskan 352型MS酶標儀(LABSYSTEM，芬蘭)；高速離心機(eppenddorf，德國)；7890A/5975C型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(安捷倫科技有限公司，美國)。

2 實驗方法

2.1 失眠大鼠模型復制

SD大鼠適應性飼養(yǎng)7天后，稱重編號，隨機分為空白對照組(10只)和失眠模型組(40只)。模型組采用PCPA腹腔注射法復制失眠大鼠模型，以400 mg/10 ml/Kg的PCPA以弱堿性生理鹽水配置成混懸液，于每天上午7:00進行腹腔注射連續(xù)2天，空白對照組予等體積弱堿性生理鹽水腹腔注射連續(xù)2天。第2次腹腔注射結束后36 h以戊巴比妥鈉翻正實驗進行模型驗證。

2.2 實驗動物分組和給藥

將失眠模型成功的40只大鼠隨機分為以下4組：模型組、復方寧神精油高濃度組、復方寧神精油中濃度組、復方寧神精油低濃度組每組10只。每一組大鼠單獨放入相同規(guī)格的50×50×100 cm且相互隔絕的香薰室，每個香薰室設置相同通風口保持通風。各組大鼠提前適應5 min后將進行獨立香薰。其中空白組和模型組給予蒸餾水熏治，復方寧神精油組分別以高、中、低3個濃度分別進行香薰治療，以上5組每天上午10:00—11:00進行熏治連續(xù)7天。治療結束后各組大鼠進行曠場和高架十字迷宮行為學實驗。

2.3 實驗及指標的觀察

2.3.1 戊巴比妥鈉翻正實驗

大鼠造模結束12 h后進行戊巴比妥鈉翻正實驗，根據(jù)大鼠體重以40 mg·kg-1戊巴比妥鈉腹腔注射，統(tǒng)計各組大鼠睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時間。

2.3.2 給藥后各組一般狀況

觀察熏治7天后各組大鼠的毛色光澤，精神狀態(tài)及7天治療后大鼠體重的變化情況。

2.3.3 曠場實驗

第7天熏治結束60 min后進行曠場實驗，以曠場箱配置的錄像裝備進行錄制，并以行為學分析軟件分析各組大鼠5 min內(nèi)的總活動距離、總穿格子次數(shù)、中央格停留時間、直立次數(shù)、修飾次數(shù)。實驗過程中保持環(huán)境安靜，且每只大鼠測試結束后及時清理大鼠排泄物并以75%酒精擦拭曠場箱。

2.3.4 高架十字迷宮實驗

曠場實驗結束2 h后各組大鼠進行高架十字迷宮實驗，實驗全程以高架十字迷宮配置的錄像裝備進行錄制，并以行為學軟件分記錄各組大鼠5 min內(nèi)的總入臂次數(shù)、總入臂時間、開放臂次數(shù)、開放臂停留時間、閉合臂次數(shù)、閉合臂時間。實驗過程中保持環(huán)境安靜，每只大鼠測試結束后及時清理大鼠排泄物并以75%的酒精擦拭。

2.4 ELISA檢測GABA和GLU

給藥結束后第2天，各組大鼠麻醉后斷頭剝離下丘腦，每只獨立分裝在凍存管，-80℃冰箱貯存待檢。檢測前隨機每組選取6只大鼠下丘腦組織勻漿進行BCA蛋白定量，記錄數(shù)值，隨后根據(jù)ELISA說明書檢測GABA和GLU含量。

2.5 統(tǒng)計方法

應用SPSS23.0軟件進行統(tǒng)計分析處理。檢測各項指標均以均值±標準差(xˉ±s)進行描述，將各項指標的數(shù)值進行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，若服從正態(tài)且方差齊，則進行單因素方差分析，繼以LDS進行組件比較；若各組不符合正太則使用非參數(shù)檢驗。其中P＜0.05表明組間有顯著性差異，P＜0.01表示有極顯著性差異，且均具有統(tǒng)計學意義。

2.6 復方寧神精油化學成分的分析

GC-MS色譜條件：安捷倫石英彈性毛細管柱(HP-5MS，30 m×0.25 mm×0.25μm)；程序升溫：起始70℃，保留3 min；5℃/min升至80℃；2℃·min-1升至92.5℃；10℃·min-1升至130℃；2℃·min-1升至195℃；25℃·min-1升至300℃；300℃后運行3 min；柱流量：1.0 mL·min-1；進樣量：1.0μL(分流比為20∶1)；載氣：高純氦氣；前進樣口溫度：230℃。EI離子源，離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；電離能量70 eV；溶劑延遲3 min；質(zhì)量掃描范圍m/z 50-550；采用NIST11.L標準譜庫進行檢索(取相似度90%以上成分)。

3 實驗結果

3.1 戊巴比妥鈉翻正實驗

造模結束后，與空白組比較，模型組大鼠的睡眠潛伏期明顯延長(P＜0.01)，模型組大鼠的睡眠持續(xù)時間明顯縮短(P＜0.01)，由此證明失眠大鼠造模成功(表1)。

表1 失眠模型的驗證結果(xˉ±s)

7天熏治后的各組睡眠潛伏期的統(tǒng)計結果，與空白組相比，模型組大鼠的睡眠潛伏期明顯延長(P＜0.05)，與模型組相比，各復方安神精油高、中、低濃度組的睡眠潛伏期均有縮短(P＜0.01，P＜0.01，P＜0.05)；復方寧神精油高濃度組睡眠潛伏期高于中濃度組，而復方精油中濃度組又低于復方寧神精油低濃度組。各組睡眠持續(xù)時間的統(tǒng)計結果顯示：與空白組相比，模型組大鼠的睡眠持續(xù)時間極顯著性縮短(P＜0.01)；與模型組相比，復方寧神精油中濃度組睡眠持續(xù)時間顯著性延長(P＜0.05)；復方精油高濃度組睡眠持續(xù)時間極顯著性延長(P＜0.01)；雖然模型組與復方寧神精油低濃度組差異無統(tǒng)計學意義，但是低濃度組的睡眠持續(xù)時間有延長的趨勢(表2)。

表2 給藥后各組大鼠的睡眠統(tǒng)計結果(xˉ±s，n=10)

3.2 給藥后各組一般情況

連續(xù)7天香薰治療后，與空白組相比，模型組大鼠情緒易激，攻擊性強，且毛色失去光澤。與模型組相比各復方精油組的大鼠情緒相對穩(wěn)定，精神狀態(tài)尚佳，毛色相對潤澤。與空白組相比，模型組大鼠體重極顯著性降低(P＜0.01)，與模型組相比，復方寧神精油高、中、低濃度組大鼠體重均有極顯著性增高(P＜0.01)，其中高濃度組的體重增量最多(表3)。

表3 各組大鼠體重增量的變化(xˉ±s，n=10)

3.3 曠場實驗

與模型組相比，空白組和個給藥組的曠場實驗中，總活動距離、總穿格次數(shù)、中央格停留時間、直立次數(shù)、修飾次數(shù)的統(tǒng)計結果見表4。

表4 各組大鼠的曠場實驗結果(xˉ±s，n=10)

3.3.1 總活動距離

與空白組相比，模型組大鼠的總活動距離極顯著性降低(P＜0.01)，與模型組相比復方寧神精油高濃度組的總活動距離極顯著性升高(P＜0.01)，雖然復方寧神精油中和低濃度組的總活動距離與模型組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但均有增高模型組大鼠的總活動距離的趨勢，且中濃度組優(yōu)于低濃度組。

3.3.2 總穿格次數(shù)

與空白組相比，模型組大鼠的總穿格次數(shù)極顯著性增多(P＜0.01)；復方寧神精油高濃度組的總穿格次數(shù)與模型組相比極顯著性降低(P＜0.01)，復方精油中濃度組的總穿格與模型組相比顯著性降低(P＜0.05)；與模型組相比，復方寧神精油低濃度組雖無差異性差異，但是復方精油低濃度組有提升模型組大鼠的總穿格次數(shù)。

3.3.3 中央格停留時間

與空白組相比，模型組大鼠的中央格停留時間極顯著性延長(P＜0.01)；與模型組相比，復方寧神精油高和中濃度組大鼠的中央格停留時間均顯著性降低(P＜0.05)，模型組與復方寧神精油低濃度組的中央格停留時間無統(tǒng)計學差異，但有延長模型組大鼠的中央格停留時間。

3.3.4 直立次數(shù)

與空白組相比，模型組大鼠的直立次數(shù)極顯著性降低(P＜0.01)，與模型組相比，高、中、低3個濃度的大鼠直立次數(shù)均無顯著性差異(P＞0.05)，但均有提高失眠模型大鼠的直立次數(shù)，其中高濃度直立次數(shù)高于中濃度和低濃度，中濃度直立次數(shù)高于低濃度。

3.3.5 修飾次數(shù)

與空白組比較，模型組大鼠的修飾次數(shù)極顯著性降低(P＜0.01)；與模型組相比，高濃度組的修飾次數(shù)極顯著性降低(P＜0.01)，中濃度組和低濃度組的修飾次數(shù)與模型組相比未見顯著性差異，但中濃度增長趨勢優(yōu)于低濃度組。

3.4 高架十字迷宮實驗

與模型組相比，空白組和個給藥組的大鼠開放臂進入次數(shù)百分比和開放臂停留時間百分比的統(tǒng)計結果見表5。與空白組相比，模型組的開放臂進入次數(shù)百分比極顯著性減少(P＜0.01)，與模型組相比，高濃度組合中濃度組大鼠開放臂次數(shù)百分比增加，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；但高濃度組高于中濃度組；雖然與模型組相比低濃度組的開放臂進入次數(shù)百分比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)但也有增加的趨勢。與空白組相比，模型組大鼠的開放臂停留時間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，其開放臂停留時間百分比明顯減少；與模型組相比高濃度組的開放臂停留時間百分比有極顯著性差異(P＜0.01)，且明顯增高，與模型組相比中濃度組的開放臂停留時間百分比增高，且有顯著性差異(P＜0.05)；其中與模型組相比，低濃度組的開放臂停留時間百分比有減少的趨勢，但是差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

表5 各組大鼠高架十字迷宮實驗結果(xˉ±s，n=10)

表7 復方寧神精油的揮發(fā)性成分分析

3.5 復方寧神精油失眠大鼠下丘腦GABA和GLU含量及GLU/GABA比值的影響

各組GABA和GLU含量及比值的數(shù)據(jù)統(tǒng)計結果見表5。與空白組相比，模型組大鼠的GABA含量極顯著性降低(P＜0.01)，與模型組相比復方寧神精油高濃度組極顯著性增高(P＜0.01)，與模型組相比復方寧神精油中濃度和低濃度組差異雖然無統(tǒng)計學意義，但GABA的含量有上升的趨勢；與空白組相比，模型組大鼠的GLU含量顯著性升高(P＜0.05)與模型組相比各復方精油組的GLU含量差異無統(tǒng)計學意義，但各復方精油組均有下降，而復方寧神精油高濃度組GLU的含量下降最明顯；與空白組相比模型組大鼠的GLU/GABA的比值極顯著性升高(P＜0.01)，與模型組相比各復方精油組GLU/GABA均極顯著性降低(P＜0.01)，其中復方寧神精油高濃度組比值降低最明顯。

3.6 復方安神精油的揮發(fā)性成分分析結果

復方寧神精油的主要化學成分見表6，GC-MS分析復方寧神精油成分TIC圖見圖1。采用NIST11.L標準譜庫進行檢索鑒定出10個擬合度較高的化學成分，復方安神精油含量最高的是α—檀香醇(7.35%)、乙酸丁香酚酯(6.34%)、4—萜烯醇(4.16%)、β—檀香醇(3.11%)等。

表6 各組大鼠下丘腦GABA、GLU含量及GLU/GABA比值的統(tǒng)計(xˉ±s，n=6)

圖1 GC-MS分析精油的總離子(TIC)流圖

4 討論

精油香薰是芳香療法的一種，而“芳香療法”一詞雖源自歐洲，但中醫(yī)關于芳香療法的應用最早可追溯到殷商時期，甲骨文中有關于香藥熏燎、艾蒸和釀制香酒的記載[15]。有研究表明精油香薰療法起效快，能在短時間內(nèi)改善睡眠、調(diào)節(jié)情緒，主要是由于腦干網(wǎng)狀結構對嗅覺刺激能迅速做出反應，而精油的獨特香氣可刺激大腦網(wǎng)狀結構來調(diào)控中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活動水平，從而起到一定的治療效果[16]。

當前人們生活壓力的日漸增大，失眠患病人數(shù)愈發(fā)增多，而失眠伴發(fā)的焦慮和抑郁情緒也時刻危害著人們的健康。臨床治療失眠的方式有很多，但長期以來人們希望通過天然植物來達到更安全、更便捷的輔助或替代療法治療失眠。探尋相應的抗失眠新劑型勢在必行。

本研究中的復方寧神精油由檀香、丁香、肉蔻組配而成，以上幾味藥均是藏香的主要組成，藏香是藏族先民根據(jù)藏民族五大學說理論配制，其組方多種多樣[17]。有研究表明應用檀香、丁香、肉蔻等制作的藏香治療大學生失眠具有應用簡便、藥效直接等優(yōu)勢[18]。同時，有研究采用檀香、丁香、肉蔻等組成的復方治療失眠癥65例，有效率為93%。且有臨床研究發(fā)現(xiàn)檀香精油給癌癥患者進行芳香療法的按摩可起到鎮(zhèn)靜安神緩解焦慮情緒的作用[20]。丁香精油特殊的芳香氣味，有鎮(zhèn)靜安神的作用，對改善抑郁有較好的效果[21]。動物實驗研究表明本方中的藥物，可改善睡眠并有調(diào)節(jié)情緒的作用。其中Joshi[22]以檀香精油香薰，對大鼠運動行為進行觀察，發(fā)現(xiàn)檀香精油吸入可以產(chǎn)生鎮(zhèn)靜的作用。肉豆蔻揮發(fā)油可延長雛雞由乙醇1-4 g·kg-1腹腔注射引起的睡眠時間，特別是能延長其深睡眠時間[23]。且肉豆蔻揮發(fā)油對小鼠行為絕望模型具有明顯的抗抑郁作用[24]。林慧玥[25]等人實驗表明丁香精油霧化吸嗅能對小鼠起到調(diào)節(jié)情緒的作用。

精油芳香療法不良反應少，操作簡便、安全性可靠正逐漸被廣泛運用在醫(yī)療領域[26]。其中肉蔻精油和丁香精油現(xiàn)已廣泛應用于食品保鮮[27,28]，檀香精油在中藥、香精香料、化妝品及雕刻行業(yè)等應用居多[29]。其安全性有相關毒理學實驗研究表明，將檀香相關提取物對小鼠進行急性毒性和亞急性毒性研究，證明了檀香提取物的無毒性；小鼠對丁香提取物的亞慢性毒性作用，發(fā)現(xiàn)小鼠的一般情況、臟器指數(shù)、病理組織學研究，均無顯著影響且未見明顯病理變化；肉豆蔻50%乙醇提取物500 mg·kg-1的劑量下未見受試動物死亡，且未見其他行為學改變，由此可知本復方寧神精油藥物組成安全性較高。

本次研究中，大鼠腹腔注射PCPA后，正常的睡眠-覺醒周期遭到破壞，且大鼠出現(xiàn)焦慮，煩躁等不良情緒，其中模型組大鼠的睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時間與空白組均有極顯著性差異，這與以往實驗研究失眠大鼠建模結果一致[30]。不同濃度復方寧神精油熏治7天后，對各組大鼠睡眠情況統(tǒng)計，其中復方寧神精油高濃度組對失眠大鼠的整體睡眠情況改善最明顯，并明顯減少了失眠大鼠的睡眠潛伏期，延長睡眠持續(xù)時間；從實驗后各組的大鼠的一般情況來看，復方寧神精油高濃度組大鼠精神狀態(tài)尚佳，情緒穩(wěn)定，毛色潤澤，體重增量變化最明顯。

此外本實驗應用曠場實驗和高架十字實驗來驗證給藥后各組大鼠的情緒和自發(fā)活動情況。其中曠場實驗是動物焦慮抑郁情緒最常用的行為學評價方式[31]。曠場實驗觀察的水平運動中總活動距離和總穿格數(shù)可以反映大鼠的水平活動度的探究能力及興奮性，中央格停留時間反應大鼠的趨避性、焦慮或抑郁心理以及認知功能狀態(tài)[32]，垂直運動中的直立次數(shù)和修飾次數(shù)可以從一定程度上反應大鼠的空間認知和警覺性[33]。本研究與空白組相比失眠模型組大鼠的總活動距離、總穿格數(shù)和直立次數(shù)降低，中央格停留時間和修飾次數(shù)均增高，由此可以推斷出失眠模型大鼠探究活動減少，興奮性降低，自發(fā)活動明顯受到抑制，從而表現(xiàn)為情緒緊張，趨避性強，警覺性較高。與失眠模型組相比復方寧神精油高濃度組大鼠的水平和垂直運動情況表現(xiàn)明顯，其總活動距離和總穿格數(shù)增高，修飾次數(shù)和中央格停留時間降低。因此可推斷復方寧神精油高濃度組可以激發(fā)失眠大鼠自發(fā)活動能力和探究能力，緩解緊張不安情緒，降低警覺性。這與以往失眠藥物觀察大鼠行為學的報道相符[34]。

高架十字迷宮是評價大鼠心理和情緒狀態(tài)的最常用行為學測試方法，其中大鼠在開放臂時間、次數(shù)和時間比例可在一定程度上反映大鼠的焦慮情緒[35]。正常狀態(tài)的大鼠對新鮮事物和環(huán)境會表現(xiàn)出探索行為，其情緒穩(wěn)定，對開放臂的探索次數(shù)和時間會曾多，相反如果大鼠表現(xiàn)為焦慮狀態(tài)，對閉合臂的探索次數(shù)和停留時間會增多[36]。本次實驗，與空白組相比模型組大鼠的開放臂進入次數(shù)百分比和開放臂停留時間百分比均降低，說明失眠模型大鼠表現(xiàn)為焦慮狀態(tài)，對未知環(huán)境的探索性降低，這與文獻中報道評價睡眠剝奪大鼠不安情緒的研究結果一致[37]。本次實驗高濃度組開放臂進入次數(shù)百分比和開放臂停留時間百分比增高明顯，說明高濃度復方精油對失眠大鼠的焦慮情緒改善最顯著。

現(xiàn)代研究表明失眠與GABA和GLU兩條神經(jīng)通路的生物學機制有極大關系[38]。Glu/GABA能直接反映失眠的治療效果，其比值常用作評價中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能興奮和抑制狀態(tài)的客觀指標[39]。其中Glu是腦內(nèi)主要的興奮性氨基酸類遞質(zhì)，對大腦皮層、丘腦、海馬等組織有很強的興奮作用，參與學習記憶、自主運動神經(jīng)活動[40]。GABA是由Glu在谷氨酸脫羧酶(GAD)作用下脫羧形成，是抑制性遞質(zhì)，對中樞神經(jīng)元有普遍抑制和調(diào)節(jié)作用[41]。本次實驗中與空白組相比失眠模型大鼠的GABA含量降低，GLU的含量增高，GLU/GABA平衡紊亂，提示失眠大鼠腦內(nèi)GLU和GABA比例失衡。這與以往實驗研究報道結果相符[42]。有實驗表明百合地黃湯對失眠治療的研究結果顯示能有調(diào)節(jié)GABA和GLU含量，從而降低失眠模型大鼠的Glu/GABA比例的升高，改善大鼠失眠狀態(tài)[43]。本次實驗中復方寧神精油高濃度組與模型組相比GABA升高，GLU降低，GLU/GABA的降低最顯著，因此復方寧神精油高濃度熏治對大鼠腦內(nèi)神經(jīng)氨基酸類遞質(zhì)含量的調(diào)節(jié)作用最顯著，并可以改善失眠狀況。

本次研究通過GC-MS測定法分析復方安神精油的揮發(fā)性化學成分。研究表明GC-MS測定靈敏度高，對目標化合物和雜質(zhì)有良好的區(qū)分能力，定性定量一步完成，高效準確[44]。結果表明復方精油的主要化合物成分。為α—檀香醇、β—檀香醇、乙酸丁香酚酯、4—萜烯醇等，推測復方安神精油的調(diào)節(jié)睡眠緩解焦慮抑郁情緒的功效可能與其主要化學成分及活性相關。

5 結論

復方寧神精油高濃度組能夠縮短失眠大鼠的睡眠潛伏期延長睡眠持續(xù)時間，緩解失眠所致的緊張焦慮等不良情緒，增加大鼠自發(fā)活動和探索能力，通過探究復方寧神精油的主要化學成分可考慮其活性成分是通過調(diào)節(jié)失眠大鼠下丘腦GLU和GABA含量，平衡中樞興奮和抑制狀態(tài)，從而來改善大鼠睡眠情況的。