細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物對(duì)利血平誘導(dǎo)抑郁模型大鼠的影響

王曉丹 郭星漢 崔瑛

摘要 目的：觀察細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物對(duì)利血平誘導(dǎo)抑郁模型大鼠的抗抑郁作用并探討其作用機(jī)制。方法：除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠每天給予利血平腹腔注射，造模第4天各組大鼠開(kāi)始灌胃給藥，連續(xù)給藥12 d。記錄大鼠的體質(zhì)量、肛溫及敞箱實(shí)驗(yàn)大鼠運(yùn)動(dòng)距離、站立次數(shù)變化。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）測(cè)定單胺類遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的含量。結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠體質(zhì)量、肛溫、敞箱運(yùn)動(dòng)距離與站立次數(shù)均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），腦組織中5-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、去甲腎上腺素（NE）含量顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中、低劑量組均能夠不同程度的糾正利血平所致大鼠體質(zhì)量、肛溫、敞箱運(yùn)動(dòng)距離與站立次數(shù)降低的趨勢(shì)，增加大鼠腦組織中5-HT、DA、NE的含量，降低大鼠腦組織中5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）、3，4-二羥基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）的含量。結(jié)論：細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物在利血平誘導(dǎo)抑郁大鼠模型上表現(xiàn)出較好的抗抑郁作用，其抗抑郁作用的發(fā)揮可能與增強(qiáng)單胺類遞質(zhì)的合成，同時(shí)抑制單胺類遞質(zhì)的代謝密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞 細(xì)辛;抑郁;機(jī)制;單胺類遞質(zhì)

Effects of Mixture of Xixin Decoction and Volatile Oil on Reserpine-induced Depression in Rats

WANG Xiaodan，GUO Xinghan，CUI Ying

（Henan University of Chinese medicine，Henan，Zhengzhou 450046，China）

Abstract Objective：To observe the antidepressant effect of Xixin Decoction and volatile oil mixture on reserpine-induced depression in rats and explore its mechanism.Methods：Except the normal control group，intraperitoneal injections of reserpine was given 0.3 mg/kg abdominal cavity injection every day.The rats in each group were given orally for 12 consecutive days after the 4th day of intraperitoneal injection.The changes of body weight and rectal temperature of rats，the distance of movement and the number of times of standing were observed.The contents of monoamine transmitters and their metabolites were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.Results：Compared with the control group，body weight，the rectal temperature，the distance of behavioral movement and standing times in the model group were significantly reduced （P<0.01），the contents of serotonin （5-HT），dopamine （DA） and adenaline （NE） in the brain tissue of the model group were significantly decreased （P<0.01）.com

pared with the model group，the high，medium and low doses of Xixin decoction and volatile oil mixture can correct the decreasing trend of of body weight，rectal temperature，behavioral distance and standing times induced by reserpine to different degrees，and increase the content of 5-HT，DA and NE in the rat brain tissue，and decrease the content of 5-hyroxyindole acetic （5-HIAA），4-dihydroxyphenylacetic （DOPAC），homovanillic （HVA） in the rat brain tissue.Conclusion：Xixin Decoction and volatile oil mixture showed a good antidepressant effect on reserpine-induced depression in rats，and the antidepressant effect may be related to its ability to enhance the synthesis of monoamine transmitters and inhibit the metabolism of monoamine transmitters.Quality metabolism is closely related.

Keywords Herba Asari; Depression; Mechanism; Monoamine transmitters

中圖分類號(hào)：R242;R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.01.013

抑郁癥是一種復(fù)雜的心理障礙性疾病，其病情嚴(yán)重，發(fā)病率逐年增加、發(fā)病人群廣[1-3]。當(dāng)前治療抑郁癥多采用的是西藥，主要有鹽酸氟西汀、鹽酸文拉法辛、丙咪嗪等代表性藥物[4]。上述藥物對(duì)抑郁癥有一定的治療作用，但在使用過(guò)程中也出現(xiàn)了非常多的不良反應(yīng)。中醫(yī)藥雖沒(méi)有抑郁癥病名，但通過(guò)辨證施治有較好的的療效和較大的安全優(yōu)勢(shì)。因此，有必要從中藥中發(fā)掘有效藥物，為防治抑郁癥服務(wù)。

細(xì)辛是馬兜鈴科細(xì)辛屬植物北細(xì)辛Asarum heterotropoides Fr.Schmldt var.mandshuricum（Maxim）Kitag.、漢城細(xì)辛Asarum sieboldii Miq.Asarumsieboldii Miq.var.seoulense Nakai與華細(xì)辛Asarum sieboldii Miq.的干燥根和根莖，味辛、性溫，具有祛風(fēng)散寒、通竅止痛、溫肺化飲的功效，用于風(fēng)寒感冒、頭痛、牙痛、鼻塞鼻淵、風(fēng)濕痹痛、痰飲咳喘等[5-7]。細(xì)辛揮發(fā)油中含黃樟腦、3-蒈烯、3，5-二甲氧基甲苯、丁香酚甲醚苯等[8]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明細(xì)辛具有強(qiáng)心、解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、局部麻醉、抗炎等多種藥理作用[9]。

我們前期開(kāi)展了細(xì)辛抗抑郁作用研究，研究表明細(xì)辛水煎液及揮發(fā)油都具有抗抑郁作用，其作用機(jī)制可能與提高腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺（5-HT）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量有關(guān)[10]。本實(shí)驗(yàn)在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用利血平誘導(dǎo)抑郁大鼠模型來(lái)考察細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物的抗抑郁功效，并初步探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性SD大鼠SPF級(jí)，體質(zhì)量（180±10）g。購(gòu)自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，批號(hào)：41003100005615，許可證號(hào)碼：SCXK（豫）2017-0001。飼養(yǎng)于大鼠IVC獨(dú)立送風(fēng)隔離籠具內(nèi)，溫度（25±2）℃，并由專人負(fù)責(zé)。

1.1.2 藥物

細(xì)辛購(gòu)于鄭州張仲景大藥房，藥材原產(chǎn)地：遼寧，批號(hào)：170801。鹽酸氯米帕明片（湖南洞庭藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H10900027）。利血平注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：1705091）。

1.1.3 試劑與儀器 大鼠5-HT、NE、DA、5-HIAA、HVA、DOPAC試劑盒（上海艾萊薩生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：201803）;揮發(fā)油提取裝置（鄭州凱鵬實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，型號(hào)：ZNHW-III0000ML）;大小鼠自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司，型號(hào)：OFT-100）;大鼠獨(dú)立送風(fēng)隔離籠具（蘇州馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司，型號(hào)：IVC-II）;快速電子體溫計(jì)（鄭州邁斯通醫(yī)療科技有限公司，型號(hào)：TS0-A）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，稱重后隨機(jī)分成6組，每組10只，包括正常對(duì)照組、模型組、鹽酸氯米帕明（0.05 g/kg）組，細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高（20 g/kg）、中（10 g/kg）、低（5 g/kg）劑量組。除正常對(duì)照組之外，其余各組大鼠每天給予利血平0.3 mg/kg腹腔注射制備模型。

1.2.2 給藥方法

造模第4天各組大鼠開(kāi)始灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥12 d。鹽酸氯米帕明組劑量0.05 g/kg，細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中、低組劑量分別為20、10、5 g/kg，模型組和正常對(duì)照組給予同等體積的蒸餾水。

細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物的制備：取適量細(xì)辛粗粉，加入10倍量的蒸餾水浸泡1 h，采用水蒸氣蒸餾法提取細(xì)辛揮發(fā)油，提取4 h，將提取出來(lái)的揮發(fā)油密封避光并冷藏保存，同時(shí)將水煎液過(guò)濾濃縮至含生藥濃度為2 g/mL，將細(xì)辛揮發(fā)油全部加入到濃縮后的水煎液中，并加入0.5%羧甲基纖維素鈉助溶，即得細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物[11-12]。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

實(shí)驗(yàn)期間稱量并記錄大鼠體質(zhì)量（g），末次給藥1 h后，采用電子體溫計(jì)測(cè)量大鼠的肛溫（℃），然后使用OFT-100大小鼠自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)對(duì)大鼠進(jìn)行敞箱實(shí)驗(yàn)，記錄5 min內(nèi)大鼠在敞箱中的運(yùn)動(dòng)距離以及站立次數(shù)。敞箱實(shí)驗(yàn)完成之后，立即將大鼠處死，在冰臺(tái)上剝離全腦，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)采用ELISA法檢測(cè)腦組織中5-羥色胺（5-HT）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）、多巴胺（DA）、3，4-二羥基苯乙酸（DOPAC）、去甲腎上腺素（NE）和高香草酸（HVA）的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用F檢驗(yàn)，以P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物對(duì)利血平誘導(dǎo)抑郁模型大鼠體質(zhì)量的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠的體質(zhì)量顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與模型組比較，鹽酸氯米帕明組及細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、低劑量組大鼠體質(zhì)量顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物中劑量組大鼠體質(zhì)量有增加的趨勢(shì)。見(jiàn)表1。

2.2 細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物對(duì)利血平誘導(dǎo)抑郁模型大鼠肛溫的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠的肛溫顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，鹽酸氯米帕明組及細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中、低劑量組大鼠肛溫均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物對(duì)利血平誘導(dǎo)抑郁模型大鼠行為學(xué)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠的敞箱實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)距離、站立次數(shù)均顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，鹽酸氯米帕明組及細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中、低劑量組均可以顯著增加敞箱實(shí)驗(yàn)大鼠運(yùn)動(dòng)距離與站立次數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物對(duì)利血平誘導(dǎo)抑郁模型大鼠腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠腦組織中5-HT的含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;5-HIAA的含量無(wú)顯著變化。與模型組比較，鹽酸氯米帕明組及細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中、低劑量組大鼠腦組織中5-HT的含量顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;鹽酸氯米帕明組及細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中劑量組大鼠腦組織中5-HIAA的含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物低劑量組大鼠腦組織中5-HIAA的含量無(wú)顯著變化。與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠腦組織中的DA含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;DOPAC、HVA含量無(wú)顯著變化。與模型組比較，細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物中、低劑量組大鼠腦組織中DA的含量顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;鹽酸氯米帕明組及細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高劑量組大鼠腦組織中DA含量有增加的趨勢(shì);鹽酸氯米帕明組及細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物中、低劑量組大鼠腦組織中DOPAC含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高劑量組大鼠腦組織中DOPAC含量無(wú)顯著變化;鹽酸氯米帕明組及細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、中劑量組大鼠腦組織中HVA含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物低劑量大鼠腦組織中HVA含量無(wú)顯著變化。與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠腦組織中NE的含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，鹽酸氯米帕明組及細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物高、低劑量組大鼠腦組織中NE的含量顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物中劑量組大鼠腦組織中NE的含量有增加的趨勢(shì)。見(jiàn)表4～6。

3 討論

現(xiàn)代藥理研究表明，細(xì)辛具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗驚厥的作用[13]。本實(shí)驗(yàn)室前期進(jìn)行了細(xì)辛抗抑郁作用研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，細(xì)辛水煎液及揮發(fā)油均表現(xiàn)出抗抑郁作用[10]，本實(shí)驗(yàn)將細(xì)辛水煎液與揮發(fā)油混合，此方法避免了對(duì)細(xì)辛有效成分利用不完全的缺點(diǎn)，以期得到更好的抗抑郁作用。

利血平是一種降壓藥，具有倦怠、注意力不集中、性欲減退等精神抑郁不良反應(yīng)。利血平抑郁模型可以在一定程度上模擬抑郁癥患者的臨床表現(xiàn)，其造模方法簡(jiǎn)便易行，因此在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中被廣泛應(yīng)用[14]。利血平通過(guò)耗竭腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)從而誘發(fā)動(dòng)物食欲不振、體溫下降、自發(fā)活動(dòng)減少、體質(zhì)量降低等現(xiàn)象[15-16]。這類似中醫(yī)寒癥表現(xiàn)，細(xì)辛性溫，有祛寒作用，選擇利血平模型也符合中醫(yī)對(duì)癥用藥思維。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠出現(xiàn)自主活動(dòng)能力減退的現(xiàn)象，表明利血平誘導(dǎo)的抑郁模型造模成功;同時(shí)，模型組大鼠出現(xiàn)體質(zhì)量增加緩慢、肛溫下降的現(xiàn)象，給予細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物后，各劑量組大鼠體質(zhì)量顯著增加，肛溫顯著上升。在敞箱實(shí)驗(yàn)中，給藥組大鼠的行為學(xué)運(yùn)動(dòng)距離、站立次數(shù)，較之模型組大鼠均有不同程度的提升，表明細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物具有抗抑郁作用，其中以高劑量組和中劑量組作用效果最明顯。

抑郁癥的發(fā)病機(jī)制假說(shuō)眾多，其中最主流的的假說(shuō)為單胺類神經(jīng)遞質(zhì)假說(shuō)。該假說(shuō)認(rèn)為單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量或功能的改變很大程度上是由于其合成或儲(chǔ)存發(fā)生障礙，降低或增加受體功能改變?cè)斐傻?。影響單胺類遞質(zhì)含量的主要因素是其合成及代謝，如果增加其合成功能，降低其代謝功能，則單胺類遞質(zhì)含量會(huì)增加，而其代謝產(chǎn)物水平會(huì)下降。5-HIAA是5-HT的代謝終產(chǎn)物，DOPAC和HVA是DA的代謝產(chǎn)物，其代謝產(chǎn)物的變化可間接反映5-HT和DA的情況。本實(shí)驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法對(duì)大鼠腦組織內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠腦內(nèi)5-HT、DA、NE含量下降明顯。與模型組比較，細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物能夠?qū)估揭钟裟Ｐ痛笫竽X組織中5-HT、DA、NE水平減少，并且能夠降低5-HIAA、DOPAC、HVA的水平。

因此，細(xì)辛水煎液和揮發(fā)油混合物在利血平誘導(dǎo)抑郁大鼠模型上表現(xiàn)出較好的抗抑郁作用，并且抗抑郁作用的發(fā)揮可能與其能夠增強(qiáng)單胺類遞質(zhì)的合成，同時(shí)抑制單胺類遞質(zhì)的代謝有很大關(guān)系。

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（2020-02-05收稿 責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄）

基金項(xiàng)目：河南省科技攻關(guān)項(xiàng)目（182102310317）

作者簡(jiǎn)介：王曉丹（1992.02—），女，碩士研究生，研究方向：中藥藥性及抗焦慮作用研究，E-mail：15136231165@163.com

通信作者：崔瑛（1961.05—），男，博士，教授，研究方向：中藥藥性及抗焦慮作用研究，E-mail：cyexin@126.com