基于“腸-腎”途徑的健脾祛濕中藥抗痛風病研究

王雨 褚夢真 李文靜 林志健 張冰

摘要 目的：從“腸-腎”途徑探討健脾祛濕中藥防治痛風病作用。方法：10%果糖塑造大鼠高血尿酸模型，高鈣高嘌呤食餌并限水誘導(dǎo)鵪鶉尿酸鹽沉積模型，以菊苣、參苓白術(shù)散為示例藥。生化檢測大鼠血清尿酸（SUA）、糞便尿酸（FUA）水平，計算腎臟尿酸清除率（RCUA）;檢測鵪鶉糞尿中尿酸含量，計算尿酸排泄量。免疫組化分析大鼠腸道ABCG2、腎臟URAT1、OAT1，及鵪鶉腸道Occludin、腎臟p-p65表達。六胺銀染色分析尿酸鹽沉積。結(jié)果：1）菊苣可顯著降低模型大鼠SUA、增加FUA、RCUA，促進腸道ABCG2表達，減少腎臟URAT1表達。2）參苓白術(shù)散可顯著減少模型鵪鶉腎臟尿酸鹽沉積，增加尿酸排泄量，增加腸道Occludin表達，減少腎臟p-p65表達。結(jié)論：痛風病發(fā)生發(fā)展中存在“腸-腎”途徑的病理改變，健脾祛濕中藥通過調(diào)節(jié)“腸-腎”尿酸轉(zhuǎn)運促尿酸排泄、改善腸道屏障功能及腎臟炎癥狀態(tài)以祛除尿酸鹽沉積，共同發(fā)揮防治痛風病作用。

關(guān)鍵詞 “腸-腎”途徑;健脾祛濕中藥;痛風病;高血尿酸;尿酸鹽沉積

Study on Anti-gout Disease of Traditional Chinese Medicines for Invigorating Spleen and Removing Dampness Based on Intestine and Kidney Axis

WANG Yu，CHU Mengzhen，LI Wenjing，LIN Zhijian，ZHANG Bing

（School of Chinese Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 102488，China）

Abstract Objective：From the “intestine-kidney” axis to explore the anti-gout disease effect of traditional Chinese medicine for invigorating spleen and removing dampness.Methods：10% fructose created a rat model of high blood uric acid，a high-calcium，high-purine diet and water restriction induced quail urate deposition model，with Cichorium intybus L.and Shenlingbaizhu Powder as example drugs.Biochemical detection of rat serum uric acid（SUA）and fecal uric acid（FUA）levels were detected.The renal uric acid clearance（RCUA）was calculated; uric acid content in quail feces and urine were detected; uric acid excretion was calculated.Rat intestine ABCG2，kidney URAT1，OAT1，quail intestine Occludin，and kidney p-p65 expression were analyzed by Immunohistochemistry.Hexamine silver staining was used to analyze urate deposition.Results：1）Cichorium intybus L.could significantly reduce SUA level，increase FUA and RCUA levels of model rats，increase expression of intestinal ABCG2 and decrease expression of renal URAT1.2）Shenling Baizhu Powder could significantly reduce the renal urate deposition in quails，increase the excretion of uric acid，as well as raise expressions of intestinal Occludin and decrease expressions of renal p-p65.Conclusion：There are some pathological changes of ‘intestine-kidney axis in the development of gout disease.Traditional Chinese medicine for invigorating spleen and removing dampness could prevent and treat the gout disease by adjusting the urate transporters in the intestine and kidney to promote excretion of uric acid，and improving the intestinal barriers and renal inflammatory state to remove the urate deposition.

Keywords Intestine and kidney axis; Traditional Chinese medicine for invigorating spleen and removing dampness; Gout disease; Hyperuricemia; Urate deposition

中圖分類號：R242;R285.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.01.003

痛風病是指與高尿酸血癥、尿酸鹽沉積密切相關(guān)的進展性代謝性疾病，2020年《高尿酸血癥/痛風患者實踐指南》根據(jù)臨床疾病狀態(tài)，將痛風病理進展分為了3個階段、8個狀態(tài)[1]，其中高血尿酸是痛風病發(fā)生的重要生化基礎(chǔ)，尿酸鹽沉積是誘發(fā)痛風病急性炎性反應(yīng)的重要因素。由此提示，降低高血尿酸、減少尿酸鹽沉積將有助于抑制痛風病的發(fā)生發(fā)展。中醫(yī)學(xué)理論認為尿酸代謝異常引起的高血尿酸及其沉積屬于“濕邪”“濁滯”范疇，臨床常切入脾胃腸腎等器官以健脾化濕泄?jié)?，取得了較好的療效[2]，本組前期也發(fā)現(xiàn)健脾祛濕藥物對實驗性高血尿酸亦有顯著的降低作用[3-4]?，F(xiàn)代研究顯示，腸道與腎臟是參與尿酸排泄的關(guān)鍵器官，主要通過組織中分布的尿酸轉(zhuǎn)運體介導(dǎo)了機體99%的尿酸外排[5]。同時，亦發(fā)現(xiàn)在痛風病的進展過程中均伴隨著腸道及腎臟的病理變化[6-7]，提示“腸-腎”可能是降低高血尿酸、減少尿酸鹽沉積的重要靶器官。因此，本研究擬分別從痛風病高血尿酸階段、尿酸鹽沉積階段著手，切入“腸-腎”途徑，以中藥菊苣及方藥參苓白術(shù)散為示例藥物，開展健脾祛濕中藥抗痛風病的系統(tǒng)觀察。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

SD大鼠50只，雄性，體質(zhì)量（240±10）g，購于斯貝福（北京）實驗動物科技有限公司，動物合格證號為SCXK（京）2011-0004。迪法克鵪鶉30只，雄性，體質(zhì)量（150±10）g，購于北京市種禽公司德嶺鵪鶉廠，動物檢疫合格證明號為1100375960。均于室溫（23±1）℃，濕度（45±5）%，12 h光照條件下飼養(yǎng)5 d后開始實驗。實驗動物倫理審批號：BUCM-4-2019090302-3033。

1.1.2 藥物

菊苣藥材購于新疆市場，由本課題組分別以10倍、8倍水各回流提取1 h后收集濾液、濃縮，獲得菊苣提取物。苯溴馬隆片（德國赫曼大藥廠，批號：1208106）。參苓白術(shù)散（山西華康藥業(yè)股份有限公司，批號：Z14020346）。

1.1.3 試劑與儀器

果糖（AMRESCO公司，美國，批號：3573C350）;酵母粉（Oxoid公司，英國，批號：1424987）;骨粉（衡水愛寵商貿(mào)有限公司，批號：20180715）;尿酸檢測試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號：151221）;ABCG2 Polyclonal Antibody（Santa Cruz公司，美國，批號：13041）;URAT1 Polyclonal Antibody（ABBIOTEC公司，美國，批號：250521）;OAT1 Polyclonal Antibody，Occludin Polyclonal Antibody，p-p65 Polyclonal Antibody（ABCAM公司，英國，批號：ab131087，ab168986，ab86299）;兔超敏二步免疫組化檢測試劑，DAB顯色試劑盒，山羊血清（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號：K162714G，16175A01，WK153622）;尿酸鹽染色試劑盒（六胺銀染色法，北京索萊寶科技有限公司，批號：20180604）。

酶標儀（Teacan公司，瑞士，型號：Sunrise型）;低溫高速離心機（Sigma公司，德國，型號：3K15型）;恒溫水浴箱（北京醫(yī)療設(shè)備廠，型號：HH-600型）;電子天平（島津公司，日本，型號：B1-220H）;石蠟組織切片機（AO公司，美國，型號：820型）;Olmpus顯微鏡，CCD相機（奧林巴斯公司，日本，型號：BX53型，DP72型）;生化培養(yǎng)箱（寧波江南儀器廠，型號：SPX型）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

以大鼠為實驗動物開展健脾祛濕示例中藥菊苣降尿酸的作用研究，采用10%高果糖飲水塑造高尿酸血癥大鼠模型[8]。以鵪鶉為實驗動物開展健脾祛濕示例方藥參苓白術(shù)散祛尿酸鹽沉積的作用研究，在本實驗室前期基礎(chǔ)上[9]，以常規(guī)飼料：酵母粉：骨粉=5∶2∶3制備造模食餌，結(jié)合控制日飲水量為15 mL/（只·d），連續(xù)40 d，誘導(dǎo)尿酸鹽沉積鵪鶉模型。

1.2.2 給藥方法

動物分組與給藥如下：

根據(jù)體質(zhì)量將SD大鼠隨機分為正常組，高血尿酸模型組，苯溴馬隆組，菊苣提取物大、小劑量組，每組10只。以預(yù)防性方式進行給藥，正常組、高血尿酸模型組大鼠每日給予清水灌胃，苯溴馬隆組給予20 mg/kg苯溴馬隆，菊苣提取物大、小劑量組分別給予相應(yīng)劑量的菊苣提取物灌胃（分別相當于生藥量10 g/kg、7.5 g/kg）。

根據(jù)體質(zhì)量將迪法克鵪鶉隨機分為正常組、尿酸鹽沉積模型組、參苓白術(shù)散組，每組10只。以治療性方式進行給藥，正常組、尿酸鹽沉積模型組鵪鶉每日給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃，參苓白術(shù)散組給予含2.1 g/kg參苓白術(shù)散的0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃。

1.2.3 檢測指標與方法

1）生化指標檢測：分別于實驗第20、40天對實驗大鼠進行尾尖取血，取血前12 h禁食不禁水，以3 000 r/min離心10 min，離心半徑8 cm，分離血清，根據(jù)尿酸檢測試劑盒說明書檢測血清尿酸水平（Serum Uric Acid，SUA）。取血前接取大鼠糞便，根據(jù)文獻進行前處理[10-11]，加入適當體積PBS混勻糞便，以4 000 r/min，離心10 min，離心半徑13.5 cm，取上清，加入1/4體積的含碳酸鋰的PBS，超聲混勻后分別于100 ℃、37 ℃孵育30 min、2 h，以10 000 r/min在4 ℃條件下離心10 min，離心半徑8 cm，取上清，生化檢測糞便中尿酸水平，并根據(jù)公式（a）計算糞便尿酸含量（Fecal Uric Acid，F(xiàn)UA）。取血后采用代謝籠法收集24 h尿液，以4 000 r/min，離心半徑8 cm，在4 ℃條件下離心10 min取上清，生化檢測尿液中尿酸水平，根據(jù)公式（b）計算腎臟尿酸清除率（Renal Clearance Rate of Uric Acid，RCUA）。模擬大鼠代謝籠法收集尿液，對實驗鵪鶉的6 h糞尿混合物進行收集，加入適量PBS混勻后，以4 000 r/min，離心10 min，離心半徑13.5 cm，取上清，生化檢測糞尿混合物中尿酸水平，并以血清尿酸水平進行校正，根據(jù)公式（c）計算尿酸清除量。

糞便尿酸含量（FUA，μmol/g）=尿酸水平×（PBS稀釋倍數(shù)/糞便重量）×1.25。（a）

腎臟尿酸清除率（RCUA，mL/min）=尿液尿酸/血清尿酸×每分鐘尿量。（b）

尿酸清除量=糞尿尿酸/血清尿酸。（c）

2）免疫組化染色與圖片分析：實驗結(jié)束后，斷頭處死實驗動物（大鼠、鵪鶉），取小腸組織及腎臟組織，置于4%多聚甲醛溶液固定，用于制備組織石蠟切片。將組織石蠟切片于60 ℃烤片1 h，常規(guī)脫蠟復(fù)水，依次以0.01 mol/L檸檬酸鈉緩沖溶液熱修復(fù)30 min，3%H2O2避光孵育15 min，山羊血清封閉孵育10 min后滴加一抗（ABCG2：1∶200;URAT1：1∶100;OAT1：1∶1 000;Occludin：1∶1 000;p-p65：1∶1 000），置于濕盒內(nèi)4 ℃孵育過夜。而后依次置于37 ℃復(fù)溫孵育1 h，滴加聚合物輔助劑37 ℃濕溫孵育1 h，滴加辣根酶標記抗兔IgG聚合物37 ℃濕溫孵育1 h，DAB顯色至染上棕色顆粒后終止，每步操作間均以PBS清洗3次×5 min。常規(guī)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。

以O(shè)lmpus顯微鏡圖像采集系統(tǒng)對每個組織3個不重疊的視野進行拍攝，Image J圖像分析系統(tǒng)進行免疫組化染色結(jié)果分析，以陽性顆粒積分光密度IOD（Inergral Optical density）進行統(tǒng)計分析。

3）六胺銀染色與與圖片分析：實驗結(jié)束后，斷頭處死實驗鵪鶉，取腎臟組織置于無水乙醇固定，用于制備組織石蠟切片，采用六胺銀特殊染色法對組織切片中的尿酸鹽沉積進行染色。將組織切片依次用二甲苯、無水乙醇脫蠟后，浸入62 ℃預(yù)熱的六胺銀溶液中，以62 ℃恒溫避光孵育50 min，純水沖洗懸浮黑色物質(zhì)，依次入氯化金溶液、海波溶液浸泡2 min、5 min，純水沖洗后以伊紅淡染，無水乙醇脫水2次×5 min，二甲苯透明2次×10 min，中性樹膠封片。

以O(shè)lmpus顯微鏡圖像采集系統(tǒng)對每個組織3個不重疊的視野進行拍攝，Image J圖像分析系統(tǒng)進行尿酸鹽染色結(jié)果分析，以陽性面積Area進行統(tǒng)計分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SAS 9.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差（±s）表示，多組間數(shù)據(jù)比較根據(jù)各組正態(tài)及方差齊與否選擇單因素方差分析或是Kruskal-Wallis軼和檢驗，組間兩兩比較根據(jù)方差齊與否選擇采用Dunnett-t檢驗或Dunnett′s T3檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健脾祛濕示例中藥調(diào)控“腸-腎”途徑降尿酸作用觀察

2.1.1 菊苣提取物對血清尿酸水平的影響

與正常組比較，實驗第20、40天，高血尿酸模型組大鼠的SUA水平均顯著升高（P<0.01）。與高血尿酸模型組比較，實驗第20、40天，菊苣提取物大、小劑量組大鼠及本溴馬隆組大鼠的SUA水平均顯著降低（P<0.01或P<0.05）。見表1。

2.1.2 菊苣提取物對“腸-腎”尿酸排泄水平的影響? 與正常組比較，高血尿酸模型組大鼠的FUA、RCUA水平均顯著降低（P<0.01或P<0.05）。與高血尿酸模型組比較，菊苣提取物大劑量組大鼠的FUA、RCUA水平均顯著升高（P<0.05）;菊苣提取物小劑量組大鼠的FUA水平顯著升高（P<0.05），RCUA水平有升高趨勢（P=0.07）;苯溴馬隆組大鼠的FUA水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義，RCUA水平有升高趨勢（P<0.05）。見表2。

2.1.3 菊苣提取物對“腸-腎”尿酸轉(zhuǎn)運體表達的影響

“腸-腎”尿酸轉(zhuǎn)運體的免疫組化染色結(jié)果如圖1所示，半定量分析結(jié)果顯示：與正常組比較，高血尿酸模型組大鼠的腸道ABCG2表達顯著減少（P<0.01），腎臟URAT1表達顯著增加（P<0.01），腎臟OAT1表達有增加趨勢（P=0.059）。與高血尿酸模型組比較，菊苣提取物大、小劑量組大鼠的腸道ABCG2表達顯著增加（P<0.01）、腎臟URAT1表達均顯著減少（P<0.01或P<0.05）、腎臟OAT1表達均有增加趨勢（P=0.059或P=0.056）;苯溴馬隆組大鼠的腸道ABCG2表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義，腎臟URAT1表達顯著減少（P<0.01），腎臟OAT1表達顯著增加（P<0.01）。見表3。

2.2 健脾祛濕示例方藥調(diào)控“腸-腎”途徑祛尿酸鹽沉積作用觀察

2.2.1 參苓白術(shù)散對尿酸鹽沉積水平的影響

尿酸鹽沉積的六胺銀染色結(jié)果如圖2所示，正常組鵪鶉腎臟中未見明顯的黑色尿酸鹽沉積，尿酸鹽沉積模型組及參苓白術(shù)散組鵪鶉腎臟中可見明顯的黑色尿酸鹽沉積。半定量分析結(jié)果顯示，與尿酸鹽沉積模型組比較，參苓白術(shù)散組鵪鶉腎臟中尿酸鹽沉積水平顯著減少（P<0.01）。見表4。

2.2.2 參苓白術(shù)散對“腸-腎”尿酸清除量的影響

與正常組比較，尿酸鹽沉積模型組鵪鶉的腸-腎尿酸清除率顯著降低（P<0.01）。與尿酸鹽沉積模型組比較，參苓白術(shù)散組鵪鶉的腸-腎尿酸清除率有升高趨勢（P=0.064）。見表5。

2.2.3 參苓白術(shù)散對腸道屏障功能及腎臟炎性反應(yīng)的影響

腸道屏障緊密結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵蛋白Occludin及腎臟炎性反應(yīng)關(guān)鍵蛋白p-p65的免疫組化染色結(jié)果如圖3所示，半定量分析結(jié)果顯示：與正常組比較，尿酸鹽沉積模型組鵪鶉的腸道Occludin表達顯著減少（P<0.01），腎臟p-p65表達顯著增加（P<0.01）。與尿酸鹽沉積模型組比較，參苓白術(shù)散組鵪鶉腸道Occludin表達顯著增加（P<0.05），腎臟p-p65表達顯著減少（P<0.01）。見表6。

3 討論

3.1 “腸-腎”途徑在痛風病疾病進展中的作用

痛風病是指與高尿酸血癥、尿酸鹽沉積密切相關(guān)的進展性代謝性疾病。2020年《高尿酸血癥/痛風患者實踐指南》突破對關(guān)節(jié)痛風的局限認識，提出高血尿酸和痛風性關(guān)節(jié)炎是同一疾病的不同狀態(tài)，并進一步根據(jù)其臨床表現(xiàn)，將其分為了臨床前階段、臨床階段及病程階段，3個階段依次包括了無癥狀高尿酸血癥、無癥狀尿酸鹽沉積、無癥狀高尿酸血癥伴尿酸鹽沉積、痛風、痛風石性痛風、侵蝕性痛風、初次痛風發(fā)作、復(fù)發(fā)型痛風發(fā)作8個狀態(tài)，且上述不同疾病狀態(tài)可同時出現(xiàn)[1]，充分體現(xiàn)了痛風病的進展性、反復(fù)性的臨床特點。其中，高血尿酸及尿酸鹽沉積貫穿了痛風病發(fā)生發(fā)展發(fā)作的始終，且二者在疾病進程中存在相互轉(zhuǎn)化、促進，血尿酸的持續(xù)升高可促進尿酸鹽飽和析出，尿酸鹽結(jié)晶的聚集沉積可誘發(fā)組織損傷，使得血尿酸水平進一步升高。由此可見，高血尿酸及尿酸鹽沉積的共性病理環(huán)節(jié)探討將是痛風病防治的重要方向。

機體內(nèi)的尿酸穩(wěn)態(tài)取決于尿酸生成與排泄的動態(tài)平衡，尿酸生成增多和/或排泄減少均會引起血尿酸水平的異常升高。流行病學(xué)研究顯示，90%的原發(fā)性血尿酸水平的升高與尿酸排泄障礙密切相關(guān)[11]。腸道與腎臟是尿酸排泄的主要器官，其中腎臟尿酸排泄量占機體尿酸排泄總量的66%，腸道尿酸排泄量占機體尿酸排泄總量的33%[12]。本研究在10%高果糖誘導(dǎo)的大鼠高血尿酸模型中觀察到了糞便尿酸含量、腎臟尿酸清除率的顯著降低，這與本組前期結(jié)果趨勢一致[13-14]，再次明確了“腸-腎”排泄途徑對維持機體內(nèi)尿酸穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵作用。“腸-腎”尿酸的外排功能主要依賴于尿酸轉(zhuǎn)運體來實現(xiàn)，主要包括介導(dǎo)腸道尿酸外排轉(zhuǎn)運的腺苷三磷酸結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白ABCG2（ATP-binding Cassette of Half-transporter Protein），介導(dǎo)腎臟尿酸重吸收轉(zhuǎn)運的葡萄糖轉(zhuǎn)運體9（Glucose Transporter 9，Glut9）、尿酸鹽陰離子轉(zhuǎn)運體1（Urate Anion Transporter，1URAT1）、有機陰離子轉(zhuǎn)運體4（Organic Anion Transporter，4OAT4），介導(dǎo)腎臟尿酸分泌的有機陰離子轉(zhuǎn)運體家族成員1（Organic Anion Transporter 1，OAT1）、成員3（Organic Anion Transporter 3，OAT3）、尿酸鹽轉(zhuǎn)運體（Urate Transporter，UAT）[15]。本研究分別選取“腸-腎”尿酸排泄途徑中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)運蛋白，對高果糖誘導(dǎo)的高血尿酸大鼠腸、腎尿酸排泄的異常進行觀察。結(jié)果顯示，高血尿酸模型組大鼠的腸道ABCG2蛋白表達顯著降低，腎臟URAT1蛋白表達顯著增加，腎臟OAT1蛋白表達有降低趨勢，這與現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)具有一致性，同時提示高果糖誘導(dǎo)的高血尿酸大鼠模型可為作用于“腸-腎”途徑的降尿酸藥物研究提供動物模型載體。

尿酸鹽沉積是血尿酸過飽和析出的直接結(jié)果，亦是誘發(fā)痛風病急性炎性反應(yīng)的必要因素。由于關(guān)節(jié)痛風紅腫熱痛的顯著臨床表現(xiàn)，尿酸鹽在關(guān)節(jié)腔及其周圍組織的沉積受到學(xué)者的廣泛研究，而對于其在腎臟組織中的沉積往往是進展到痛風石形成后才受到關(guān)注，這可能與內(nèi)臟組織痛覺神經(jīng)不敏感，以及尿酸鹽內(nèi)臟沉積臨床診療手段不足有關(guān)。目前尿酸鹽沉積研究亦受到動物模型的局限，由于常用于實驗研究的嚙齒類動物存在可迅速分解尿酸的尿酸酶，與人類尿酸代謝途徑存在較大差異，其尿酸水平的升高往往難以實現(xiàn)內(nèi)源性尿酸鹽沉積。鑒于此，本研究選取與人類尿酸代謝途徑相似的禽類動物鵪鶉，在前期高嘌呤飲食誘導(dǎo)高尿酸血癥鵪鶉模型的基礎(chǔ)上，結(jié)合高鈣及限水飲食進一步促進血尿酸水平的升高，觀察到了尿酸鹽在鵪鶉腎臟組織中的首要沉積。結(jié)合尿酸鹽的致炎作用[16]，本研究對痛風病相關(guān)的NF-κB炎癥信號通路中的關(guān)鍵蛋白即p65的磷酸化水平進行了檢測，免疫組化染色結(jié)果顯示，尿酸鹽沉積模型組鵪鶉的腎臟組織中p-p65蛋白表達顯著增加。此外，我們亦對腸道組織中尿酸鹽沉積進行了考察，然而并未發(fā)現(xiàn)尿酸鹽的沉積，這可能與腸道管腔性結(jié)構(gòu)及腸道菌群對尿酸的分解作用有關(guān)[17]，但顯著觀察到了腸道組織中Occludin蛋白表達的降低。Occludin蛋白是組成腸道屏障緊密連接結(jié)構(gòu)的代表性咬合蛋白之一，腸道屏障緊密連接結(jié)構(gòu)的完整是實現(xiàn)腸道正常生理功能的重要基礎(chǔ)，其結(jié)構(gòu)的異常會導(dǎo)致腸上皮細胞通透性的增加，使得細菌、內(nèi)毒素及大分子有害物質(zhì)進入血液循環(huán)，誘發(fā)疾病[18]。有研究發(fā)現(xiàn)高血尿酸狀態(tài)下，腸道菌群及腸道機械屏障發(fā)生病理改變，革蘭氏陰性菌細的代謝產(chǎn)物內(nèi)毒素入血增加[19]，而內(nèi)毒素水平的升高正是腎臟損傷的重要誘導(dǎo)因素[20]。由此提示，痛風病尿酸鹽沉積階段存在獨立于血尿酸之外的“腸-腎”途徑病理改變，這可能與腸道通透性增加，腸源性毒素入血增加，干擾腎臟生理功能，誘導(dǎo)組織炎性反應(yīng)有關(guān)，其具體機制有待于深入研究。

3.2 健脾祛濕中藥干預(yù)“腸-腎”途徑防治痛風病作用

中醫(yī)認為血尿酸的升高及其沉積多由飲食不節(jié)，過食肥甘，阻礙脾運化功能，釀生濕濁痰飲而致[21]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對腸道的功能認識，與中醫(yī)理論中“脾”的功能類似，并且腸道不僅有消化、吸收功能，還具排泄功能，這與中醫(yī)理論中的小腸“泌別清濁”、大腸“主津”理論相一致。同時，腎主調(diào)節(jié)一身水液之代謝，脾主運化功能又有賴于腎陽的溫煦和氣化，腎不主水亦是濕濁為患的重要因素。因此，本研究結(jié)合健脾祛濕藥物在臨床及實驗中降尿酸的優(yōu)勢作用，切入“腸-腎”途徑，分別以健脾祛濕藥菊苣、參苓白術(shù)散為示例藥物，對其降尿酸、祛沉積的防治痛風病作用進行系統(tǒng)觀察。

菊苣是菊科植物毛菊苣或菊苣的干燥地上部分或根，功效清肝利膽、健胃消食、利尿消腫，歸肝、膽、胃經(jīng)。以菊苣提取物干預(yù)高血尿酸大鼠模型，結(jié)果顯示，菊苣提取物可顯著降低模型大鼠的血尿酸水平，并增加其糞便尿酸含量及促進腎臟尿酸清除，提示菊苣提取物對腸、腎尿酸排泄均有促進作用。同時，本研究亦觀察到菊苣提取物可顯著增加腸道ABCG2表達，減少腎臟URAT1表達，對腎臟OAT1亦有增加趨勢，結(jié)合上述蛋白的生理功能，提示菊苣提取物可通過調(diào)控“腸-腎”尿酸轉(zhuǎn)運體促進“腸-腎”尿酸排泄，發(fā)揮降尿酸作用。參苓白術(shù)散首載于《太平惠民和劑局方》[22]，由人參、茯苓、白術(shù)、白扁豆等10味中藥組成，具健脾益氣、滲濕止瀉之效用。以參苓白術(shù)散干預(yù)尿酸鹽沉積鵪鶉模型，結(jié)果顯示，參苓白術(shù)散可顯著減少模型鵪鶉腎臟組織中的尿酸鹽沉積，對糞尿尿酸排泄量的增加亦有促進趨勢。同時，本研究亦觀察到參苓白術(shù)散可顯著增加腸道Occludin表達，并減少腎臟組織中p-p65表達，結(jié)合腸、腎組織在痛風病進展中的重要作用，提示參苓白術(shù)散可通過改善腸道屏障，減少有害物質(zhì)進入血循環(huán)，并抑制腎臟炎性反應(yīng)，從而發(fā)揮祛除尿酸鹽沉積的作用。

綜上所述，本研究分別從痛風病高血尿酸階段、痛風病尿酸鹽沉積階段著手，明確了在痛風病發(fā)生發(fā)展中存在“腸-腎”途徑的病理改變，并進一步以健脾祛濕示例藥物進行干預(yù)，切入“腸-腎”途徑，明確了健脾祛濕中藥通過調(diào)節(jié)“腸-腎”尿酸轉(zhuǎn)運促尿酸排泄、改善腸道屏障功能及腎臟炎癥狀態(tài)祛除尿酸鹽沉積，從而實現(xiàn)防治痛風病的作用。

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（2020-12-10收稿 責任編輯：徐穎）

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目（81673618）;北京市自然科學(xué)基金項目（7162117）

作者簡介：王雨（1991.06—），女，博士，研究方向：中藥防治代謝性疾病研究，E-mail：wangyuxh@163.com

通信作者：張冰（1959.08—），女，博士，教授，主任醫(yī)師，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：中藥防治代謝性疾病研究，E-mail：zhangbing6@263.net