培養(yǎng)和觀察青霉菌的簡便方法*

陳小瑩 肖小亮 黃勝琴**

（1 華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 廣東廣州 510631 2 廣東省東莞市東莞中學(xué)初中部 廣東東莞 523015）

“觀察酵母菌和霉菌”是人教版生物學(xué)8 年級上冊第5 單元第4 章第3 節(jié)中的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。教材中建議選用橘子皮作為天然培養(yǎng)基培養(yǎng)青霉，觀察方法是用解剖針挑取少許長有孢子的菌絲制成臨時裝片。但在教學(xué)中發(fā)現(xiàn)，以上實(shí)驗(yàn)操作對學(xué)生動手能力要求高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想。一方面，利用橘子皮培養(yǎng)青霉的時間難以控制，時間過長會導(dǎo)致橘子皮表面布滿青綠色孢子，難以觀察到完整的孢子和菌絲。用PDA 培養(yǎng)基的方法雖然能解決以上問題，但卻需要嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)條件和豐富的實(shí)驗(yàn)材料，不利于邊遠(yuǎn)或貧困地區(qū)學(xué)校開展此實(shí)驗(yàn)。另一方面，用解剖針挑取少許菌絲放在水滴中制作臨時裝片的實(shí)驗(yàn)操作要求高，學(xué)生難以完成，取樣過程中孢子易散落，學(xué)生也容易因取樣量過多而“錯失”較好的觀察結(jié)果。

針對上述問題，本實(shí)驗(yàn)主要對青霉的培養(yǎng)方法進(jìn)行了改進(jìn)，方便后續(xù)的觀察操作。首先，青霉廣泛存在于空氣中，是空氣中的優(yōu)勢真菌。歐陽志云等[1]分離空氣中真菌發(fā)現(xiàn)青霉屬出現(xiàn)的次數(shù)占分離菌株總數(shù)的36%，居家環(huán)境空氣中青霉屬的出現(xiàn)頻率在90%以上，因此，可利用空氣中的青霉菌接種菌種開展實(shí)驗(yàn)。其次，青霉?fàn)I腐生生活，其營養(yǎng)來源極為廣泛，是一類雜食性真菌，可生長在多數(shù)含有有機(jī)物的基質(zhì)上。生活中常用到的雞精營養(yǎng)物質(zhì)豐富，主要是由雞肉、雞骨粉或其濃縮抽提物和味精（即谷氨酸鈉，構(gòu)成蛋白質(zhì)的組成成分）、糖、香辛料、肌苷酸、鳥苷酸、淀粉等物質(zhì)做成的復(fù)合調(diào)味品[2]。雞精內(nèi)含足量的蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物和鈉鹽等，能為微生物提供碳源、氮源、無機(jī)鹽等。筆者在進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)后，探索了雞精液體培養(yǎng)基培養(yǎng)青霉菌的最佳條件。最后，雞精培養(yǎng)基材料經(jīng)濟(jì)易得，操作簡便，觀察效果良好，能減低實(shí)驗(yàn)難度，有利于提升教學(xué)效率。

1 實(shí)驗(yàn)材料

雞精、水、鑷子、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、量筒、小燒杯、培養(yǎng)皿蓋或保鮮膜等。

2 青霉菌的培養(yǎng)

稱取市售的雞精顆粒約2 g，加入50 mL 水，于燒杯中煮沸（或直接加入沸水，攪拌均勻），撇去浮沫，于室內(nèi)溫暖處放置約10 d。青霉是好氧型真菌，在液體培養(yǎng)基表面將形成白色菌膜，隨著培養(yǎng)時間的增加，逐漸長成綠色菌落。若環(huán)境溫度條件過低，可在室內(nèi)放置2 d 后，移入28℃恒溫箱培養(yǎng)30 h，具體培養(yǎng)時間以青霉的生長情況為準(zhǔn)。最佳取樣時間為白色菌落上剛剛出現(xiàn)綠點(diǎn)，此時可轉(zhuǎn)入冰箱冷藏備用。

3 青霉菌的顯微觀察

3.1 臨時裝片的制作 用鑷子直接夾取1 片白色上帶綠點(diǎn)的菌膜，撕成約1 cm×1 cm 的小塊，菌膜表面朝上置于干凈的載玻片上，無需滴入蒸餾水，直接蓋上蓋玻片，輕壓蓋玻片使樣品變得平整。取樣后迅速用保鮮膜或培養(yǎng)皿蓋蓋好燒杯，避免吸入大量孢子。

3.2 觀察青霉菌 將臨時裝片置于載物臺上，先在4 倍物鏡下找到大致物象，轉(zhuǎn)到10 倍鏡找到目標(biāo)對象后，將其調(diào)到視野中央，換到40 倍觀察。

3.3 觀察結(jié)果 圖1 為培養(yǎng)10 d 的雞精液體培養(yǎng)基（所用雞精營養(yǎng)成分見表1），肉眼可見0.04 g/mL 濃度雞精液體比稍低濃度的培養(yǎng)基上菌落數(shù)較多，與較高濃度培養(yǎng)基的相差不大，因此，該實(shí)驗(yàn)選用0.04 g/mL 雞精液體培養(yǎng)基較為合適。仔細(xì)分辨培養(yǎng)基表面，其上分布著白色上有綠色的和暗綠色的2 種青霉菌落，實(shí)驗(yàn)時取樣選擇前一種。若取樣為燒杯中的黑色菌膜，則只能觀察到菌絲和散落的分生孢子，因?yàn)檫@時青霉菌處于生長的第3 個階段，孢子大量繁殖，密集地覆蓋在氣生菌絲上，此時在第2 階段形成的分生孢子梗頂端的成串孢子已掉落[3]。

圖1 培養(yǎng)10 d 的各濃度梯度雞精液體培養(yǎng)基

表1 實(shí)驗(yàn)所用雞精營養(yǎng)成分表

圖2 為10×40 倍顯微鏡下青霉菌的圖像，可觀察到典型的青霉菌結(jié)構(gòu)，包括菌絲及由分生孢子梗、小梗、分生孢子組成的“掃帚”狀分生孢子穗。清晰可見青霉的菌絲有橫隔，分生孢子梗頂端不膨大，經(jīng)多次分枝產(chǎn)生幾輪對稱或不對稱小梗，小梗頂端產(chǎn)生成串的青綠色分生孢子和散落的分生孢子。

圖2 青霉菌顯微圖像（10×40 倍）

4 教學(xué)效果及反思

筆者在廣州和東莞兩地不同環(huán)境下使用不同品牌雞精顆粒進(jìn)行了多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該實(shí)驗(yàn)方法能有效解決原實(shí)驗(yàn)存在的培養(yǎng)條件要求高、取樣操作不便等問題，只需用雞精配制培養(yǎng)基便可觀察到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，材料易得便宜，不需要滅菌操作，簡單易行。培養(yǎng)方法簡單，無需保存菌種，若有需要提前10 天開始培養(yǎng)即可。通常只需室溫培養(yǎng)青霉菌，不需恒溫箱，在不具備相關(guān)專業(yè)條件的實(shí)驗(yàn)室也可開展該實(shí)驗(yàn)。學(xué)生用鑷子挑取液面上的菌膜置于載玻片上，直接蓋上蓋玻片即可觀察，操作簡便，節(jié)約時間；同時學(xué)生在顯微鏡下也能快速找到清晰的“掃帚”狀分生孢子穗及直立的分生孢子梗，教學(xué)效果良好。

本實(shí)驗(yàn)改進(jìn)了青霉菌的培養(yǎng)方法，利用生活中常見的雞精配制培養(yǎng)基，易于獲得青霉菌，降低了學(xué)生實(shí)驗(yàn)難度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為理想，能很好完成教學(xué)目標(biāo)。但該實(shí)驗(yàn)在培養(yǎng)青霉菌時，需要讓真菌在開放的環(huán)境中生長一段時間，因此，要特別注意培養(yǎng)基應(yīng)遠(yuǎn)離人群，防止吸入大量孢子，危害人體健康。