副乳癌和常規(guī)胸部乳腺癌HES1、HER2表達(dá)差異及臨床病理特征分析

宋天豹，王建軍，孫小虎，王保信，陳紹華，李國明，呂建男

副乳癌(accessory breast cancer，ABC)系指正常乳腺以外出現(xiàn)乳腺組織，占女性乳腺疾病的1%～2%，占副乳癥的1%～5%，是一種少見的乳腺疾病[1]，ABC病人以腋下腫塊(多為腋窩下或腋前無痛性腫物)為首發(fā)癥狀，由于腋窩處血液和淋巴結(jié)豐富易出現(xiàn)早期轉(zhuǎn)移，臨床發(fā)現(xiàn)時(shí)多已處于晚期，因此ABC生存率明顯低于常規(guī)胸部乳腺癌(mammary cancer，MC)[2]。與常規(guī)胸部乳腺一樣，副乳也受內(nèi)分泌影響，可出現(xiàn)與常規(guī)胸部乳腺同樣的良惡性腫瘤(如小葉增生、導(dǎo)管擴(kuò)張及纖維腺瘤等)，易與乳腺外腫瘤相混淆[3]。目前磁共振成像掃描在ABC診斷中價(jià)值尚不明確，但研究[4]證實(shí)超聲引導(dǎo)下細(xì)針吸取細(xì)胞學(xué)或粗針穿刺活檢有助于ABC的早期診斷，因此臨床中可從分子水平上探究ABC與常規(guī)胸部MC的有效診斷方案。轉(zhuǎn)錄因子發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子1(hairy and enhancer of split1，HES1)是細(xì)胞分化、細(xì)胞周期調(diào)控的重要因子，在腫瘤疾病中呈高表達(dá)[5]，其在ABC中表達(dá)情況國內(nèi)尚未見報(bào)道；人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)是決定MC分子分型的重要分子生物學(xué)標(biāo)志物，其在常規(guī)胸部MC組織中表達(dá)的研究[6]較多見，但有關(guān)其在ABC與常規(guī)胸部MC中表達(dá)差異的研究并不多見。本文旨在探討ABC和常規(guī)胸部MC HES1、HER2表達(dá)差異及其與臨床病理特征的關(guān)系，以期為ABC診治提供參考信息。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2016年1月我院確診的ABC病人(ABC組)和常規(guī)胸部MC病人(MC組)，各30例?；仡櫺苑治霾∪说呐R床診治及隨訪資料。其中ABC組女28例，男2例；年齡30～69歲；腋窩下或腋前ABC 29例、腹股溝處ABC 1例。MC組均為女性，年齡28～72歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合ABC或MC診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，術(shù)后病理證實(shí)有明確的ABC或常規(guī)胸部MC；(2)年齡≥18歲，癥狀可見有或無腫塊疼痛、腫脹、泌乳、溢液、破潰等；(3)接受手術(shù)治療；(4)臨床資料完善；(5)入組前未接受ABC、常規(guī)MC放化療藥物治療。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他臟器惡性腫瘤；(2)入選前已進(jìn)行過放射治療、化學(xué)治療或其他綜合治療；(3)入院時(shí)已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移而無法手術(shù)；(4)相關(guān)資料欠缺。

1.2 治療方法 ABC組行ABC擴(kuò)大區(qū)段切除加腋窩淋巴結(jié)清掃10例，乳腺癌改良根治術(shù)11例，乳腺癌根治術(shù)6例，ABC區(qū)段切除術(shù)3例；MC組行乳腺癌改良根治術(shù)20例，乳腺癌根治術(shù)6例，保乳術(shù)4例。術(shù)后均嚴(yán)格參照相關(guān)指南進(jìn)行術(shù)后化療、放療及內(nèi)分泌治療。2組術(shù)后病人的放化療和內(nèi)分泌治療均參照MC治療指南[7]進(jìn)行。術(shù)后隨訪2組病人復(fù)發(fā)情況。

1.3 HES1、HER2表達(dá)檢測 免疫組織化學(xué)法檢測：術(shù)前取ABC病人、MC病人癌組織標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋切片，免疫組織化學(xué)法檢測ABC、常規(guī)MC組織中HES1、HER2表達(dá)。步驟：脫蠟水化后，37 ℃ 3%H2O2溫箱孵育，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，PBS液重復(fù)洗滌3次后檸檬酸緩沖液(pH值6.0)微波修復(fù)，室溫冷卻30 min；非免疫動(dòng)物血清37 ℃溫箱封閉，PBS液重復(fù)洗滌3次，滴加一抗、二抗，辣根過氧化酶標(biāo)記鏈霉素親和復(fù)合物，37 ℃溫箱孵育后，DAB染色、蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片。由兩位病理科醫(yī)師采用雙盲法，依據(jù)染色強(qiáng)度(陰性、弱性、適中、強(qiáng)性對(duì)應(yīng)計(jì)0、1、2、3分)、陽性染色細(xì)胞百分比(0%、>0%～10%、>10%～25%、>25%～50%、>50%對(duì)應(yīng)計(jì)0、1、2、3、4分)評(píng)定免疫組織化學(xué)分析結(jié)果，染色強(qiáng)度+陽性染色細(xì)胞百分比總分4～8分提示HES1或HER2陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ2檢驗(yàn)和Fisher′s確切概率法。

2 結(jié)果

2.1 ABC和MC組織HES1、HER2陽性表達(dá)率比較 2組病人HES1和HER2陽性表達(dá)率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見圖1～4、表1)。

表1 HES1、HER2在不同組織中的表達(dá)情況[n;百分率(%)]

2.2 不同病理特征病人HES1陽性表達(dá)情況 ABC組和MC組病人HES1陽性表達(dá)率在不同病理類型、組織學(xué)分級(jí)、臨床分期和是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、三陰乳腺癌間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.01)，ABC組HES1陽性表達(dá)率在是否復(fù)發(fā)病人間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2組組間HES1陽性表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表2)。

2.3 不同病理特征病人HER2陽性表達(dá)情況 ABC病人HER2陽性表達(dá)率在不同病理類型、組織學(xué)分級(jí)、臨床分期和是否三陰乳腺癌及復(fù)發(fā)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.01)；MC病人HER2陽性表達(dá)率在不同病理類型、臨床分期和是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、三陰乳腺癌間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。2組組間HER2陽性表達(dá)在病理類型分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(見表3)。

表3 2組不同病理特征病人HES1陽性表達(dá)情況(n)

3 討論

雖ABC發(fā)病率較低，但與常規(guī)MC病人相比，早期ABC臨床癥狀缺乏特異性，且生化指標(biāo)無明顯變化，初步診斷易誤診為乳腺腋尾部癌、乳腺癌的腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、隱性乳腺癌等，此外ABC位置較為特殊，其在鉬靶上難以完全顯示，臨床當(dāng)中尚缺乏行之有效的ABC早期診斷手段。隨著分子生物學(xué)迅速發(fā)展，近年來分子生物學(xué)標(biāo)志物在乳腺癌診斷中的研究日益廣泛[8]。HES1屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋基因轉(zhuǎn)錄抑制因子之一，有抑制組織細(xì)胞特征性分化的作用，可直接影響細(xì)胞分化以及增殖、細(xì)胞凋亡。研究[9]表明，HES1可阻礙神經(jīng)干細(xì)胞以及小腸前體細(xì)胞分化，確保其保持未分化狀態(tài)。國內(nèi)外學(xué)者[10-11]研究證實(shí)HES1在卵巢癌、結(jié)腸癌、非小細(xì)胞肺癌等惡性腫瘤中呈高表達(dá)，且其表達(dá)水平與病人預(yù)后密切相關(guān)。HER2基因?qū)儆谝环N表皮生長因子受體家族成員，主要定位于染色體17q12-21.32，其可激活下游酪氨酸激酶使之磷酸化，有效調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖。研究[6]證實(shí)，HER2在乳腺癌組織中高表達(dá)往往預(yù)示著復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)高、預(yù)后差。鑒于此，分析ABC病人HES1、HER2表達(dá)與常規(guī)胸部MC病人的差異及其與病理特征的關(guān)系，將有望為ABC術(shù)前診斷及預(yù)后評(píng)估提供參考。

既往報(bào)道[12-13]顯示，HES1作為腫瘤細(xì)胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，其異常表達(dá)與腫瘤疾病發(fā)生、細(xì)胞分化、腫瘤惡性程度、腫瘤干細(xì)胞的成瘤性等生理及病理變化緊密相關(guān)；HER2表達(dá)與乳腺癌病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫塊大小、病理學(xué)分級(jí)間亦具有明顯的相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，ABC與MC組織中HES1、HER2陽性表達(dá)率無明顯差異，而ABC組/MC組組內(nèi)HES1陽性表達(dá)率在不同病理類型、組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、三陰乳腺癌病理特征間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中浸潤性導(dǎo)管癌、三陰乳腺癌具更高的陽性表達(dá)率，可能是由于浸潤性導(dǎo)管癌、三陰乳腺癌惡性程度更高，且隨臨床分期增高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移范圍也更大，故而浸潤性導(dǎo)管癌、三陰乳腺癌、臨床分期高、組織學(xué)分級(jí)越高，以及合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的ABC、常規(guī)胸部MC病人癌組織中HES1、HER2陽性表達(dá)率更高[14]。本研究結(jié)果顯示，ABC組、MC組組間HES1陽性表達(dá)率在是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異顯著，表明HES1陽性表達(dá)率與ABC和MC病理特征密切相關(guān)；ABC病人HES1陽性表達(dá)率越高，其組織學(xué)分級(jí)越高和臨床分期越晚，因HES1表達(dá)與ABC的侵襲能力有明顯相關(guān)性，其可通過異常調(diào)控ABC干細(xì)胞自我更新能力，從而有效促進(jìn)癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移，表現(xiàn)為組織學(xué)分級(jí)及臨床分期晚，與早期李曉瑛等[15]研究指出的在乳腺癌病人中HES1陽性表達(dá)與TNM分期顯著正相關(guān)的結(jié)論類似。本研究結(jié)果還顯示，ABC組內(nèi)HER2陽性表達(dá)率在不同病理類型、組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、三陰乳腺癌、復(fù)發(fā)病理特征間差異顯著，而MC組內(nèi)HER2陽性表達(dá)率在不同病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、三陰乳腺癌病理特征間差異顯著，提示ABC病人術(shù)前HER2陽性表達(dá)率越高，浸潤性導(dǎo)管癌、三陰乳腺癌及復(fù)發(fā)可能性越高，而MC病人HER2陽性表達(dá)率越高，三陰乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)越高，與早期學(xué)者[16]研究指出的乳腺癌病人中HER2表達(dá)與乳腺癌病理類型、三陰乳腺癌及復(fù)發(fā)密切相關(guān)的結(jié)論基本相符。2組組間HER2陽性表達(dá)率在病理類型分布上差異顯著，提示或可通過不同病理類型病人HER2陽性表達(dá)率對(duì)兩種乳腺癌進(jìn)行鑒別。HER2其受體蛋白可通過同源或異源二聚體方式發(fā)生偶聯(lián)，有效激活下游酪氨酸激酶使其磷酸化，促進(jìn)腫瘤增殖，在腫瘤病理類型、惡性程度及預(yù)后中有一定預(yù)測價(jià)值[17]。

綜上，術(shù)前ABC病人與MC病人HES1、HER2陽性表達(dá)率無明顯差異，但術(shù)前HES1、HER2陽性表達(dá)率在預(yù)測ABC病人、MC病人病理特征方面可能有一定積極作用，可為臨床合理治療方案的制定提供參考。