LncRNA H19基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性關聯(lián)的Meta分析

李曉波，李 婷，白素琴，張清雯

西安交通大學醫(yī)學院附屬3201醫(yī)院：1.微生物免疫檢驗科分子診斷實驗室；2.臨床醫(yī)學檢驗科，陜西漢中 723000

乳腺癌是發(fā)生在乳腺上皮組織的惡性腫瘤，約占女性侵襲性腫瘤的22.9%[1]。國際癌癥研究機構(IARC)預測，預計到2040年，全球乳腺癌診斷病例將達300萬左右[2]。近年來，我國乳腺癌患病率增長迅速，其中年輕人患病率比老年人患病率增長速度更快[3-4]。GAGE等[5]研究發(fā)現，5%～10%的乳腺癌患者發(fā)病與遺傳因素相關。隨著乳腺癌家族中患者數量的增加，其家族新生兒的乳腺癌患病風險隨之增加，并且病死率與家族中患病人數呈正相關[6]。乳腺癌發(fā)病機制復雜，具體尚不明確，目前普遍認為其發(fā)病是基因突變和環(huán)境風險因素共同決定的[7-8]。長鏈非編碼RNA(LncRNA)是一組長度超過200個堿基，不能翻譯成蛋白質的非編碼RNA，其在細胞增殖、細胞周期調控、細胞分化調控、應激反應等多種生物學過程中發(fā)揮著重要作用，與腫瘤的發(fā)生密切相關[9-11]。LncRNA H19基因位于11號染色體短臂上(11p15.5)，長度為2.3 kb，其基因過表達與多種腫瘤的進展有關[12-13]。單核苷酸多態(tài)性(SNP)作為最常見的遺傳變異，在腫瘤研究中越來越受到重視[14]。SNP被發(fā)現能夠預測腫瘤的發(fā)生風險和預后[15-16]。近期研究發(fā)現，LncRNA H19基因rs217727和rs2839698 SNP位點是乳腺癌的易感基因位點[17-21]，但上述位點與乳腺癌的相關性在不同人種、不同地區(qū)間存在較大差異。因此，本文對LncRNA H19基因rs217727和rs2839698 SNP位點與乳腺癌遺傳易感性之間的關系進行了Meta分析。

1 資料與方法

1.1文獻檢索策略 在英文數據庫PubMed、Embase、Elsevier中檢索關鍵詞“breast cancer or carcinoma or tumor”“H19 or LncRNA H19 or Long noncoding RNA H19”“Polymorphism or SNP”“rs217727”“rs2839698”；在中文數據庫維普(VIP)、中國知網(CNKI)、萬方數據庫中檢索關鍵詞“乳腺癌”“單核苷酸多態(tài)性”“H19或LncRNA H19或Long noncoding RNA H19” “rs217727”“rs2839698”。數據庫檢索時間截至2020年4月，語種包括英文和中文。

1.2文獻納入和排除標準 納入標準：(1)研究類型為病例對照研究，且病例組為乳腺癌患者，對照組為健康對照者；(2)研究中包括了rs217727 C>T和rs2839698 C>T SNP位點，并且有基因型分類數據。排除標準：(1)重復發(fā)表或者數據不完整；(2)研究未設立對照組；(3)會議討論、綜述及 Meta分析類文獻；(4)基因型頻率不符合哈迪-溫伯格平衡定律。

1.3納入研究數據的提取 所有數據由2名研究人員獨立提取，提取數據包括第一作者、文獻發(fā)表時間、研究人群、對照組來源、基因分型方法、病例組與對照組的年齡與例數，以及rs217727和rs2839698 SNP位點基因型分布情況。如研究包含多種人群，應對不同人群數據分別抽提分類后再進行分析。

1.4文獻質量評價 根據Cochrane協(xié)作網推薦的紐卡斯爾-渥太華量表(NOS)對所有文獻進行質量評價。NOS評分標準由人群選擇、病例組和對照組的可比性、暴露因素的測量3部分組成，包括8個項目，總分為9分。NOS評分在0～4分為低質量研究文獻，將5～9分的高質量研究文獻納入本研究。

1.5統(tǒng)計學處理 Meta分析使用STATA12.0軟件Meta-analysis模塊。分析LncRNA H19基因rs217727和rs2839698 SNP位點與乳腺癌發(fā)生風險的關系，統(tǒng)計比值比(OR)和95%置信區(qū)間(95%CI)，OR值采用Z檢驗計算。樣本異質性分析采用Q檢驗，以P≤0.10為存在顯著異質性，分析選擇隨機效應模型；以P>0.10為效應量分布異質性不顯著，分析選擇固定效應模型。發(fā)表偏倚分析采用Begg′s檢驗。采用SPSS20.0軟件中的χ2檢驗進行哈迪-溫伯格平衡定律驗證。

2 結 果

2.1文獻檢索流程及納入文獻的基本特征 初步檢索獲得LncRNA H19基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的相關文獻141篇，通過剔除無關文獻、Meta分析、綜述及會議討論130篇，篩選出11篇文獻；進一步閱讀全文剔除無對照組和數據不全的文獻6篇，最終保留5篇病例對照研究。關于rs217727 SNP位點的有5篇，共納入研究對象6 570例，其中乳腺癌患者3 178例，健康對照者3 392例；關于rs2839698 SNP位點的有3篇，共納入研究對象5 434例，其中乳腺癌患者2 607例，健康對照者2 827例。納入研究文獻中rs2839698、rs217727 SNP位點的基因型頻率均符合哈迪-溫伯格平衡定律(P>0.05)。納入研究文獻的基本特征及LncRNA H19基因rs217727、rs2839698 SNP位點基因型分布分別見表1、2。納入研究的5篇文獻使用NOS進行質量評價，評分均≥5分，屬于高質量文獻，見表3。

表1 納入研究文獻的基本特征

表2 LncRNA H19基因rs217727、rs2839698 SNP位點基因型分布

表3 納入研究文獻的質量評價(分)

2.2Meta分析結果

2.2.1rs217727 SNP位點與乳腺癌遺傳易感性的關聯(lián) 納入Meta分析的5篇關于rs217727 SNP位點的文獻中，等位基因(Tvs.C)異質性檢驗顯示，I2=84.0%，P<0.001,存在顯著異質性，采用隨機效應模型分析，病例組與對照組等位基因T、C比較，差異無統(tǒng)計學意義(Z<0.01,OR=1.000,95%CI：0.799～1.251,P=0.999)。加性模式(TTvs.CC)異質性檢驗顯示，I2=71.1%,P=0.097，存在顯著異質性，采用隨機效應模型分析，病例組與對照組TT、CC基因型比較，差異無統(tǒng)計學意義(Z=0.30,OR=1.059,95%CI：0.728～1.541,P=0.765)。隱性模式(TTvs.CT+CC)異質性檢驗顯示，I2=82.6%,P=0.077,存在顯著異質性，采用隨機效應模型分析，病例組與對照組TT、CT+CC基因型比較，差異無統(tǒng)計學意義(Z=0.42,OR=0.939,95%CI：0.703～1.255,P=0.671)。顯性模式(TT+CTvs.CC)異質性檢驗顯示，I2=69.8%,P=0.076,存在顯著異質性，采用隨機效應模型分析，病例組與對照組TT+CT、CC基因型比較差異無統(tǒng)計學意義(Z=0.72,OR=1.131,95%CI：0.808～1.583,P=0.472)。人群分層研究顯示，中國漢族人群和伊朗人群rs217727 SNP位點4種遺傳學模式在病例組與對照組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的Meta分析結果

2.2.2rs2839698 SNP位點與乳腺癌遺傳易感性的關聯(lián) 納入Meta分析的3篇關于rs2839698 SNP位點的文獻中，等位基因(Tvs.C)異質性檢驗顯示，I2=91.6%，P<0.001,存在顯著異質性，采用隨機效應模型分析，病例組與對照組等位基因T、C比較，差異無統(tǒng)計學意義(Z=1.56,OR=1.299,95%CI：0.935～1.804,P=0.119)。加性模式(TTvs.CC)異質性檢驗顯示，I2=89.3%,P=0.289，效應量分布異質性不顯著，采用固定效應模型分析，病例組與對照組TT、CC基因型比較，差異無統(tǒng)計學意義(Z=1.60，OR=1.718,95%CI：0.884～3.339,P=0.111)。隱性模式(TTvs.CT+CC)異質性檢驗顯示，I2=90.7%,P=0.118,效應量分布異質性不顯著，采用固定效應模型分析，病例組與對照組TT、CT+CC基因型比較，差異無統(tǒng)計學意義(Z=1.51,OR=1.395,95%CI：0.905～2.149,P=0.131)。顯性模式(TT+CTvs.CC)異質性檢驗顯示，I2=74.1%,P=0.085,存在顯著異質性，采用隨機效應模型分析，病例組與對照組TT+CT、CC基因型比較，差異無統(tǒng)計學意義(Z=1.43,OR=1.334,95%CI：0.900～1.978,P=0.151)。人群分層研究顯示，中國漢族人群4種遺傳學模式在病例組與對照組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。伊朗人群研究僅有1篇關于rs2839698 SNP位點與乳腺癌關聯(lián)的文獻，統(tǒng)計分析顯示，等位基因(Z=4.93,OR=2.524，95%CI：1.747～3.645,P<0.001)、加性模式(Z=4.64,OR=6.264，95%CI：2.884～13.605,P<0.001)、隱性模式(Z=4.49,OR=4.405，95%CI：2.307～8.412,P<0.001)、顯性模式(Z=3.19,OR=2.659，95%CI：1.457～4.853,P=0.001)在病例組與對照組間比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

2.3發(fā)表偏倚Begg′s檢驗結果 LncRNA H19基因rs217727 SNP位點4種遺傳模式均無發(fā)表偏倚(P>0.05)。而rs2839698 SNP位點等位基因、加性模式、隱性模式均存在發(fā)表偏倚(P<0.05),顯性模式無發(fā)表偏倚(P=0.067)。見表4。

3 討 論

LncRNA H19基因位于常染色體11p15.5，與胰島素樣生長因子2(IGF2)基因相鄰，僅在母系遺傳染色體上表達。LncRNA H19基因由于存在選擇性剪切，因此包含了3種轉錄本，3種轉錄本都包含了5個外顯子和4個內含子[12,22]。LncRNA H19 RNA轉錄本以調節(jié)RNA或核糖體調節(jié)器的形式發(fā)揮作用，促進細胞凋亡、血管形成、炎癥和細胞死亡等生物學過程的進展[23]。另外，BAO等[24]的基因富集分析發(fā)現，LncRNA H19基因與DNA轉錄、RNA折疊、甲基化等均有關。LncRNA H19基因的表達水平與乳腺癌的發(fā)生、增殖、侵襲、轉移和耐藥有關，血清中LncRNA H19 RNA轉錄水平對乳腺癌的早期診斷、治療和預后具有重要的臨床意義[23]。LIN等[18]發(fā)現，在中國乳腺癌患者的共顯性和顯性模式中，LncRNA H19基因高表達與乳腺癌發(fā)生的風險增加相關，并且在雌激素受體陽性、人表皮生長因子受體2陰性的患者中共顯性和顯性模式差異更明顯。

多項研究發(fā)現，LncRNA H19基因rs217727 SNP位點增加了乳腺癌的患病風險[18-19,25]，進一步研究發(fā)現，乳腺癌組織中LncRNA H19基因的表達水平明顯高于正常對照組織，并且發(fā)現CT或TT基因型有助于提高LncRNA H19基因的表達水平[18]。然而，XIA等[17]驗證了中國漢族人群乳腺癌患病風險與LncRNA H19基因并無關聯(lián)。本研究分析了關于rs217727 SNP位點的5篇文獻，共包括乳腺癌患者3 178例和健康對照者3 392例，結果顯示，rs217727 SNP位點的等位基因、加性模式、顯性模式、隱性模式在病例組和對照組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在隨后的人群分層分析中發(fā)現，中國漢族人群和伊朗人群rs217727 SNP位點4種遺傳學模式在病例組與對照組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。rs2839698位于LncRNA H19基因外顯子區(qū)(3′-未翻譯區(qū))中。YANG等[26]發(fā)現，rs2839698 T等位基因與胃癌發(fā)病的高風險有關，并且CT和TT基因型的血清mRNA表達水平明顯高于CC基因型。本研究分析了3篇關于rs2839698 SNP位點與乳腺癌遺傳易感性的文獻，囊括了2 607例乳腺癌患者和2 827例健康對照者，rs2839698 SNP位點的等位基因、加性模式、顯性模式、隱性模式在病例組和對照組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。進一步行人群分層分析發(fā)現，中國漢族人群rs2839698 SNP位點4種遺傳學模式在病例組與對照組間比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。伊朗人群研究僅有1篇關于rs2839698 SNP位點與乳腺癌關聯(lián)的文獻報道，統(tǒng)計分析發(fā)現，其4種遺傳學模式在病例組與對照組間比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。上述結果的不一致很可能是由于不同研究人群的樣本量不同、遺傳背景差異導致的。

本文尚存在一定的不足之處：(1)納入研究的人群僅包括了中國漢族人群和伊朗人群，覆蓋人群和數據量均較少，Meta分析結果可能存在偏倚。(2)本文納入的文獻數較少，結果仍需要更多、更高質量的研究證實；(3)對照組標本來源包括了醫(yī)院人群和社區(qū)人群，但未進行對照組來源的亞組分析。后續(xù)筆者將持續(xù)關注LncRNA H19基因rs217727和rs2839698 SNP位點與乳腺癌遺傳易感性的文獻報道，對更大樣本量和多種群的研究進行Meta分析，獲得更加明確的關聯(lián)結果。

綜上所述，中國漢族人群LncRNA H19基因rs217727和rs2839698 SNP位點等位基因、加性模式、顯性模式、隱性模式與乳腺癌遺傳易感性均無關。