CD24、IL-6和hs-CRP對(duì)新生兒急性肺損傷的診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值*

王 軍，孫 紅

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北武漢 430016

新生兒急性肺損傷(ALI)是新生兒期的常見(jiàn)病，為炎癥細(xì)胞、促炎因子等通過(guò)“瀑布式”級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致的全身炎癥反應(yīng)綜合征[1-2]。ALI加重時(shí)稱為急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，此時(shí)機(jī)體可表現(xiàn)為多器官功能障礙，威脅患兒生命[3]。然而，由于ALI的具體發(fā)病機(jī)制尚未明確，臨床對(duì)其尚無(wú)特效的治療方法，多采用消除潛在病因和對(duì)癥支持治療[4-5]。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)新生兒ALI的診斷主要依據(jù)2017年發(fā)布的蒙特勒診斷標(biāo)準(zhǔn)[6-7]，但該標(biāo)準(zhǔn)主要依據(jù)臨床表現(xiàn)及相關(guān)檢查進(jìn)行診斷，如發(fā)病緩急、機(jī)體氧合狀態(tài)、肺水腫狀態(tài)及胸部X線片表現(xiàn)等，這往往需要醫(yī)生擁有豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)才能做出準(zhǔn)確判斷。因缺乏可靠的診斷標(biāo)志物，目前ALI臨床診斷的準(zhǔn)確性較低，常導(dǎo)致患兒錯(cuò)過(guò)最佳診療時(shí)機(jī)，使治愈率降低，病死率增加，給患兒家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。根據(jù)ALI/ARDS疾病病理發(fā)展過(guò)程，ALI為ARDS的初始階段，但并不是所有ALI患兒都會(huì)發(fā)展為ARDS，因此早期診斷ALI并采取有效措施對(duì)阻止疾病向ARDS發(fā)展，降低患兒病死率具有重要意義。近年來(lái)，雖然感染相關(guān)指標(biāo)超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)等對(duì)感染性疾病的診斷價(jià)值已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可[8]，但其特異度仍然有限。因此，新的靶向性較好的標(biāo)志物有待進(jìn)一步被發(fā)掘，而CD24作為損傷相關(guān)模式分子(DAMP)的負(fù)反饋受體，在機(jī)體發(fā)生炎性反應(yīng)時(shí)表達(dá)上調(diào)，通過(guò)抑制機(jī)體的免疫反應(yīng)達(dá)到保護(hù)宿主的作用[9-10]，可作為膿毒癥等感染性疾病早期診斷的重要指標(biāo)[11]。基于此，本研究探討了CD24、IL-6和hs-CRP對(duì)新生兒ALI的早期診斷及預(yù)后評(píng)估價(jià)值，以期為臨床診治工作提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1—12月本院新生兒科收治的ALI患兒152例為研究組，其中男99例，女53例，入院日齡7.36(2.13，18.47)d。根據(jù)蒙特勒診斷標(biāo)準(zhǔn)中引起新生兒ALI的誘因不同，將所有患兒分為間接誘發(fā)組(誘因?yàn)槿毖踔舷?、膿毒癥等)128例和直接誘發(fā)組(誘因?yàn)樘ゼS、羊水、乳汁吸入等)24例。另選取同期進(jìn)行體檢的健康新生兒30例作為對(duì)照組，其中男19例，女11例，入院日齡7.01(2.38，17.82)d。研究組與對(duì)照組入院日齡、性別等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理審批號(hào)：2020R074-E01。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：研究組所有患兒均符合ALI診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，年齡≤30 d，起病急；氧合指數(shù)[氧分壓(PaO2)/吸入氧濃度百分比(FiO2)]≤200 mm Hg；胸部X線片顯示雙肺均有斑片狀陰影；肺動(dòng)脈嵌頓壓≤18 mm Hg或無(wú)左心房壓力增高的臨床證據(jù)；如氧合指數(shù)≤300 mm Hg且滿足上述其他標(biāo)準(zhǔn)也可診斷ALI。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)死亡或放棄治療的患兒；(2)合并有心、肝、腎等器官功能損傷；(3)合并先天畸形；(4)合并先天性遺傳代謝病或染色體疾病。

1.3方法 研究組采集患兒急性發(fā)作入院時(shí)(治療前)及疾病恢復(fù)出院時(shí)(治療后)的靜脈血2 mL，同時(shí)采集對(duì)照組新生兒體檢當(dāng)日靜脈血2 mL。離心取上層血清，采用免疫透射比濁法(西門(mén)子BNⅡ特種蛋白分析儀，德國(guó))檢測(cè)血清hs-CRP水平。取下層細(xì)胞，按1∶1比例加入淋巴細(xì)胞分離液，混勻，3 000 r/min離心20 min，用吸管吸取中間灰白色淋巴細(xì)胞層，3 000 r/min離心5 min，棄上清，獲得單個(gè)核細(xì)胞，加入1 mL Trizol試劑裂解細(xì)胞提取總RNA，將總RNA提取液于-80 ℃冰箱凍存。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，CD24、IL-6和內(nèi)參β-actin引物由武漢擎科生物科技有限公司合成，引物序列見(jiàn)表1。PCR反應(yīng)條件為：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min；4 ℃保存。CD24、IL-6的相對(duì)水平采用2-ΔΔCt法計(jì)算。

表1 CD24、IL-6和β-actin引物序列

2 結(jié) 果

2.1直接誘發(fā)組、間接誘發(fā)組與對(duì)照組臨床資料比較 直接誘發(fā)組和間接誘發(fā)組宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)前感染發(fā)生率高于對(duì)照組，1 min Apgar評(píng)分、氧合指數(shù)及剩余堿低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 直接誘發(fā)組、間接誘發(fā)組與對(duì)照組臨床資料比較

組別n臍帶異常[n(%)]氣管插管[n(%)]Apgar評(píng)分(x±s,分)1min5min血?dú)夥治鲋笜?biāo)氧合指數(shù)(x±s,mmHg)pH(x±s)剩余堿[M(P25,P75),mmol/L]直接誘發(fā)組244(16.67)3(12.50)6±38±1226±1037.3±0.1-5.3(-8.2,-1.7)間接誘發(fā)組12815(11.72)23(17.97)5±28±1205±1267.3±0.1-6.1(-8.9,-1.5)對(duì)照組303(10.00)3(10.00)8±18±1374±1327.3±0.1-2.1(-5.4,-1.7)F/χ2/H1.1811.9363.2280.2108.8730.1878.291P0.2190.0980.0090.9070.0010.9250.026

組別nALT(x±s,U/L)AST(x±s,U/L)BUN(x±s,mmol/L)Cr(x±s,μmol/L)CK-MB(x±s,U/L)直接誘發(fā)組2412.01±4.5927.04±5.762.00±0.4822.26±4.8313.34±6.66間接誘發(fā)組12810.99±4.7629.32±5.161.92±0.3924.61±3.5513.10±4.20對(duì)照組3012.80±4.9425.15±4.152.29±0.7323.45±4.2012.98±6.91F/χ2/H0.4170.8720.9020.6460.276P0.8230.4250.3360.7840.877

2.2治療前研究組與對(duì)照組CD24、IL-6及hs-CRP水平比較 與對(duì)照組比較，治療前研究組CD24、IL-6及hs-CRP水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

2.3直接誘發(fā)組和間接誘發(fā)組治療前后CD24、IL-6及hs-CRP水平比較 治療前間接誘發(fā)組CD24、IL-6水平高于直接誘發(fā)組，hs-CRP水平低于直接誘發(fā)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后直接誘發(fā)組、間接誘發(fā)組CD24、IL-6及hs-CRP水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后直接誘發(fā)組、間接誘發(fā)組CD24、IL-6及hs-CRP水平均低于同組治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 直接誘發(fā)組和間接誘發(fā)組治療前后CD24、IL-6及hs-CRP水平比較

2.4CD24、IL-6和hs-CRP對(duì)ALI的診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值 治療前CD24診斷間接誘發(fā)性ALI的曲線下面積(AUC)為0.988 5，靈敏度為95.31%，特異度為96.67%，高于IL-6及hs-CRP；治療前CD24診斷直接誘發(fā)性ALI的AUC為0.983 3，高于IL-6及hs-CRP。治療后IL-6預(yù)測(cè)間接誘發(fā)性ALI預(yù)后的AUC為0.727 2，高于CD24和hs-CRP；治療后IL-6預(yù)測(cè)直接誘發(fā)性ALI預(yù)后的AUC為0.651 4，高于CD24和hs-CRP。見(jiàn)表4、5和圖2。

注：A為治療前研究組與對(duì)照組CD24水平比較；B為治療前研究組與對(duì)照組IL-6水平比較；C為治療前研究組與對(duì)照組hs-CRP水平比較；*P<0.05。圖1 治療前研究組與對(duì)照組CD24、IL-6及hs-CRP水平比較

表4 治療前CD24、IL-6和hs-CRP對(duì)ALI的診斷價(jià)值

表5 治療后CD24、IL-6和hs-CRP對(duì)ALI的預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值

注：A為治療前CD24、IL-6和hs-CRP診斷間接誘發(fā)性ALI的ROC曲線；B為治療后CD24、IL-6和hs-CRP預(yù)測(cè)間接誘發(fā)性ALI預(yù)后的ROC曲線；C為治療前CD24、IL-6和hs-CRP診斷直接誘發(fā)性ALI的ROC曲線；D為治療后CD24、IL-6和hs-CRP預(yù)測(cè)直接誘發(fā)性ALI預(yù)后的ROC曲線。圖2 采用CD24、IL-6和hs-CRP對(duì)ALI進(jìn)行診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)的ROC曲線

3 討 論

ALI是由外源性和(或)內(nèi)源性因素所致肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞損傷，造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫，從而導(dǎo)致急性低氧性呼吸功能不全或呼吸衰竭[12]。由于新生兒機(jī)體功能尚未發(fā)育完全，而ALI發(fā)病急、病情變化快且病死率高，嚴(yán)重威脅著新生兒的生命安全。研究顯示，ALI在兒童中的發(fā)病率為(2.2～6.0)/100 000.0，但在重癥監(jiān)護(hù)室住院的患兒中ALI發(fā)病率為(7～42)/1 000，ALI患兒的住院病死率為20%～80%，合并膿毒癥時(shí)病死率高達(dá)90%，若同時(shí)并發(fā)4種以上器官功能障礙則病死率為100%[13]。因此，尋找新生兒ALI的早期診斷標(biāo)志物，進(jìn)行早期治療，避免其發(fā)展成為ARDS等嚴(yán)重疾病具有重要意義。

ALI的發(fā)病原因較為復(fù)雜，確切的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，但研究表明ALI患兒表現(xiàn)為機(jī)體代償性抗炎能力降低或代謝紊亂，出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征[14]。因此，ALI并不是一種單純的肺部疾病，而是多種炎癥細(xì)胞及其釋放的炎癥因子所介導(dǎo)的一種肺部綜合性炎癥疾病[15]。CD24為一種高度糖基化的磷脂酰肌醇錨定蛋白，主要表達(dá)于粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等多種細(xì)胞表面，可通過(guò)負(fù)反饋調(diào)節(jié)抑制炎癥因子的過(guò)度活化，維持自身穩(wěn)態(tài)[16]。研究顯示，當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎性反應(yīng)時(shí)，CD24水平明顯升高，并通過(guò)CD24/Siglec10通路抑制核因子-κB的激活，從而阻斷高遷移率族蛋白1(HMGB1)的促炎作用，抑制由HMGB1/TOLL樣受體4(TLR4)介導(dǎo)的炎癥因子的釋放，發(fā)揮組織修復(fù)功能，利于炎癥的轉(zhuǎn)歸[17-18]。近年來(lái)研究表明，CD24可以作為膿毒癥、腫瘤等疾病的早期預(yù)測(cè)標(biāo)志物[11,19]。本研究結(jié)果顯示，治療前ALI患兒CD24水平高于健康新生兒，且治療前間接誘發(fā)性ALI 患兒CD24水平高于直接誘發(fā)性ALI患兒，這可能是由于間接誘發(fā)性ALI大多是由膿毒癥導(dǎo)致，炎性反應(yīng)較為強(qiáng)烈，而CD24作為DAMP的負(fù)反饋受體，可以抑制炎癥因子過(guò)度活化造成的機(jī)體損傷。

IL-6為單核-巨噬細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)胞因子，當(dāng)機(jī)體感染或發(fā)生組織損傷時(shí)其通過(guò)激活B細(xì)胞前體產(chǎn)生抗體，從而清除感染因子并修復(fù)組織損傷，在宿主防御系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用，但持續(xù)過(guò)量的IL-6產(chǎn)生會(huì)引起炎癥性疾病[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，治療前ALI患兒IL-6水平高于健康新生兒，治療后間接與直接誘發(fā)性ALI患兒的IL-6水平均明顯下降。hs-CRP為機(jī)體受到炎癥刺激時(shí)由肝細(xì)胞合成并分泌的一種非特異性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，其水平在感染發(fā)生時(shí)迅速升高，隨著疾病好轉(zhuǎn)而逐漸恢復(fù)正常[21]。本研究結(jié)果顯示，治療前ALI患兒hs-CRP水平高于健康新生兒，且間接誘發(fā)性ALI患兒hs-CRP水平低于直接誘發(fā)性ALI患兒,這可能與新生兒hs-CRP水平主要反映機(jī)體低程度的炎性反應(yīng)有關(guān)[22]。

本研究通過(guò)ROC曲線分析了CD24、IL-6和hs-CRP對(duì)ALI的診斷及預(yù)后評(píng)估價(jià)值，結(jié)果顯示，CD24對(duì)直接與間接誘發(fā)性ALI均具有較高的診斷價(jià)值，AUC分別為0.983 3、0.988 5，高于IL-6和hs-CRP;CD24、IL-6和hs-CRP對(duì)ALI具有一定的預(yù)后評(píng)估價(jià)值，其中IL-6預(yù)測(cè)間接誘發(fā)性ALI預(yù)后的AUC為0.727 2，預(yù)測(cè)直接誘發(fā)性ALI預(yù)后的AUC為0.651 4，高于CD24和hs-CRP，提示IL-6對(duì)ALI患兒預(yù)后監(jiān)測(cè)具有重要意義。

綜上所述，ALI患兒存在CD24、IL-6和hs-CRP水平升高，且經(jīng)治療后上述3項(xiàng)指標(biāo)水平有所下降。CD24是診斷新生兒ALI的良好指標(biāo)，IL-6對(duì)治療后ALI患兒的預(yù)后有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。