P16蛋白聯(lián)合高危型人乳頭瘤病毒測(cè)定在宮頸疾病中的篩查效果及診斷效能研究

江亞寧

(湖南省婦幼保健院，湖南 長(zhǎng)沙 410000)

宮頸是女性重要的內(nèi)生殖器，而宮頸疾病是指宮頸區(qū)域發(fā)生的病變，包括炎癥、損傷、腫瘤等，是女性常見的疾患之一[1]?；颊甙l(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，臨床多表現(xiàn)為白帶增多、下腹及腰骶部疼痛、外陰瘙癢及排尿困難，影響患者生活[2]。陰道鏡活組織檢查是宮頸疾病患者常用的檢查方法，并將其視為“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是該檢查方法風(fēng)險(xiǎn)性、創(chuàng)傷性較大，導(dǎo)致患者診斷耐受性、依從性較差。研究表明[3]，P16蛋白屬于腫瘤相關(guān)基因蛋白，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中呈過表達(dá)現(xiàn)象。P16蛋白與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)基因用于宮頸疾病篩查，具有方法簡(jiǎn)單、易于操作、能減少經(jīng)濟(jì)支出等優(yōu)點(diǎn)[4]。因此，本研究探討了P16蛋白聯(lián)合HPV測(cè)定在宮頸疾病中的篩查應(yīng)用效果及診斷價(jià)值，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年3月—2019年4月宮頸病變患者240 例，年齡(47.84±4.71) 歲；宮頸上皮內(nèi)瘤變CINⅠ 83 例，CINⅡ 104 例，CINⅢ 34 例，鱗癌19 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合宮頸疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，且患者均經(jīng)陰道鏡檢查最終確診；能遵醫(yī)囑完成P16和HPV檢查，且患者均能耐受；意識(shí)清楚，能與醫(yī)生進(jìn)行溝通、交流。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并已經(jīng)確診的宮頸癌患者、入院資料不全者；精神狀態(tài)異?；颊?。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

所有患者入院后均取病灶組織與病灶旁組織(≥3 cm)，石蠟包埋后，常規(guī)制備切片，備用。

1.2.2 P16蛋白測(cè)定

采用免疫組化技術(shù)測(cè)定不同組織中P16蛋白陽性表達(dá)水平。取上述獲得的病灶組織與癌旁組織，利用多聚甲醛4%常溫下固定，經(jīng)石蠟包埋后制備4 μm切片，向切片中加入濃度為3%的過氧化氫(H2O2)阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，分別加入P16一抗(以PBS代替一抗作陰性對(duì)照)，4 ℃下過夜，然后加入生物素標(biāo)記的P16二抗，常溫下完成10 min孵育，用DAB顯色后進(jìn)行蘇木素染色，用中性樹膠常規(guī)封固。免疫組化染色下隨機(jī)取10 個(gè)非重疊視野，完成細(xì)胞陽性比例計(jì)算[5]。判斷方法：P16陽性信號(hào)位于胞核或胞漿，上述抗體的陽性對(duì)照染色強(qiáng)度均記為2+；對(duì)于待測(cè)腫瘤細(xì)胞無信號(hào)為0，弱于對(duì)照組記為1+，等于記為2+，強(qiáng)于記為3+。估算陽性區(qū)域百分比。0和1+為陰性，2+和3+為陽性[6]。

1.2.3 HPV定量檢測(cè)

借助美國(guó)Digene公司提供的HPV試劑盒完成13 種高危HPV亞型檢測(cè)，包括HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68。但是，該方法不能對(duì)單一HPV進(jìn)行分型，對(duì)于任何一種高危型人乳頭瘤病毒基因檢測(cè)(HPV-DNA)超過設(shè)定的閾值或正常值時(shí)，測(cè)定結(jié)果視為陽性[7]。

1.2.4 診斷效能

繪制接受者操作性(ROC)曲線，分析P16蛋白聯(lián)合HPV檢測(cè)在宮頸疾病中的診斷敏感性、特異性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 宮頸疾病不同組織P16蛋白陽性率比較

宮頸疾病病灶組織中P16蛋白陽性患者183 例(76.25%)，高于病灶旁組織[P16蛋白陽性5例(2.08%)](P<0.05)。免疫組化結(jié)果表明：宮頸疾病組織中多數(shù)細(xì)胞呈陽性，染色呈褐色；而在病灶旁組織中陽性細(xì)胞較少，呈淡黃色(見圖1)。

A B

2.2 不同類型宮頸疾病HPV陽性率比較

240 例患者均完成HPV檢測(cè)，結(jié)果表明：HPV陽性患者184 例(陽性率76.67%)。HPV陽性率前三位為鱗癌、CINⅢ和CINⅡ，分別占100.00%，91.18%和90.38%(見表1)。

表1 不同類型宮頸疾病HPV陽性率比較

2.3 P16蛋白聯(lián)合HPV測(cè)定在宮頸疾病中的診斷效能

ROC曲線結(jié)果表明：P16蛋白聯(lián)合HPV測(cè)定宮頸疾病診斷敏感性、特異性均高于單一P16蛋白和HPV檢測(cè)(P<0.05)(見表2)。

表2 P16蛋白聯(lián)合HPV測(cè)定在宮頸疾病中的診斷效能

3 討 論

近年來，P16聯(lián)合HPV測(cè)定在宮頸疾病中廣泛應(yīng)用，且效果理想[8]。本研究中，宮頸疾病病灶組織中P16蛋白陽性患者183 例(陽性率76.25%)，高于病灶旁組織(P16蛋白陽性5 例，陽性率2.08%)(P<0.05)；免疫組化結(jié)果表明：宮頸疾病組織中多數(shù)細(xì)胞呈陽性，染色呈褐色，而在病灶旁組織中陽性細(xì)胞較少，呈淡黃色，說明P16聯(lián)合HPV測(cè)定能為臨床診療宮頸疾病提供參考依據(jù)。P16是一種抑癌基因，能參與細(xì)胞周期G1期的抑制，促進(jìn)凋亡與修復(fù)。同時(shí)，P16能通過經(jīng)典信號(hào)途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞周期的抑制作用，從而引起該途徑失控，細(xì)胞過度增殖。研究表明[9]：高危型HPV能誘導(dǎo)P16蛋白過表達(dá)，而過度表達(dá)的P16亦可引起P16-pRb(抑癌基因)反饋循環(huán)破壞，難以發(fā)揮腫瘤抑制作用。HPV是一種能特異性地感染人皮膚、黏膜鱗狀上皮細(xì)胞，引起多種良、惡性病變的DNA病毒。同時(shí)，HPV感染是宮頸鱗癌、上皮肉瘤發(fā)生的必要條件，持續(xù)的HPV感染能增加宮頸癌發(fā)生率。本研究結(jié)果表明：HPV陽性患者184 例，陽性率為76.67%。HPV陽性率前三位分別為鱗癌、CINⅢ和CINⅡ，分別占100.00%，91.18%和90.38%。臨床上將P16蛋白聯(lián)合HPV測(cè)定用于宮頸疾病中能發(fā)揮不同測(cè)定方法的優(yōu)勢(shì)，可獲得較高的診斷效能。本研究中，ROC曲線結(jié)果表明：P16蛋白聯(lián)合HPV測(cè)定宮頸疾病診斷敏感性、特異性，均高于單一P16蛋白和HPV檢測(cè)(P<0.05)。因此，宮頸疾病患者加強(qiáng)P16蛋白、HPV檢測(cè)能幫助患者確診，避免延誤最佳診療時(shí)機(jī)[10]。

綜上所述，P16蛋白在宮頸疾病組織中呈高表達(dá)，聯(lián)合HPV檢測(cè)診斷宮頸疾病組織具有較高的診斷敏感性、特異性，能為臨床診療提供參考依據(jù)。