手工法細(xì)菌分離接種技術(shù)實(shí)踐教學(xué)心得

靖吉芳，廖奔兵，王富英，梁 亭

（惠州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東 惠州 516025）

微生物學(xué)檢驗(yàn)在感染性疾病的診治方面有重要的指導(dǎo)作用。隨著病原體的新發(fā)和再現(xiàn)現(xiàn)象日趨頻繁，社會(huì)對(duì)微生物檢驗(yàn)技術(shù)人才的需求也大大增加。同時(shí)，隨著知識(shí)水平的提高及維權(quán)意識(shí)的增強(qiáng)，人們對(duì)醫(yī)療服務(wù)質(zhì)量的要求也越來(lái)越高。作為醫(yī)學(xué)人才供給側(cè)的教學(xué)單位，教學(xué)質(zhì)量的好壞直接影響學(xué)生將來(lái)從事相關(guān)工作的服務(wù)水平。盡管隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，微生物檢驗(yàn)技術(shù)的核心項(xiàng)目——細(xì)菌分離接種技術(shù)也得到了一定發(fā)展，出現(xiàn)了半自動(dòng)化、自動(dòng)化細(xì)菌接種儀[1]。但目前在國(guó)內(nèi)大多數(shù)臨床微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室中，依然是以接種環(huán)手工分區(qū)劃線接種法為主[2]。因此，在微生物檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)過(guò)程中，手工法細(xì)菌分離接種技術(shù)仍然為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)學(xué)生應(yīng)熟練掌握的基本技能之一。但由于學(xué)時(shí)限制及師生比例等因素的影響，實(shí)踐教學(xué)過(guò)程中該項(xiàng)目的眾多細(xì)節(jié)掌控不到，因此直接影響到學(xué)生的技能水平。隨著職業(yè)教育的快速發(fā)展，技能競(jìng)賽應(yīng)運(yùn)而生，被認(rèn)為是新時(shí)期職業(yè)教育改革與發(fā)展的重要助推器[3]，備受社會(huì)各界的關(guān)注。技能競(jìng)賽對(duì)教學(xué)質(zhì)量尤其是實(shí)踐教學(xué)質(zhì)量的提高已獲得大多數(shù)院校的認(rèn)可[4-7]。

1 第六屆全國(guó)職業(yè)院?！叭诵l(wèi)杯”檢驗(yàn)技能競(jìng)賽概況

1.1 比賽項(xiàng)目介紹

在全國(guó)職業(yè)院校檢驗(yàn)技能競(jìng)賽組委會(huì)組織領(lǐng)導(dǎo)下，2019年5月25日至27日第六屆全國(guó)職業(yè)院?！叭诵l(wèi)杯”檢驗(yàn)技能競(jìng)賽在江西萍鄉(xiāng)順利舉行。此次比賽分設(shè)中職組、高職組和本科組3個(gè)層次，全國(guó)各地共85所高職院校、256名選手參加了高職組競(jìng)賽，圍繞醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)五大主干課程，高職組設(shè)置了五大比賽項(xiàng)目，分別是：臨床檢驗(yàn)——“白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類及臨床應(yīng)用”，細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)——“細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù)（四區(qū)劃線法）與細(xì)菌鑒定技術(shù)（革蘭染色、鏡檢和鑒定報(bào)告）”，生物化學(xué)檢驗(yàn)——“總蛋白測(cè)定（雙縮脲法）、血糖測(cè)定（葡萄糖氧化酶法）及臨床應(yīng)用”，“形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)及臨床應(yīng)用”，免疫檢驗(yàn)——“乙肝病毒表面抗體檢測(cè)（ELISA）及臨床應(yīng)用”。除“形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)及臨床應(yīng)用”通過(guò)圖片識(shí)別外，其他四項(xiàng)主要采用手工法進(jìn)行操作。

1.2 細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目分?jǐn)?shù)組成

5個(gè)項(xiàng)目均采用百分制，其中細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目的分?jǐn)?shù)由兩部分組成：細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù)35分、細(xì)菌鑒定技術(shù)65分，細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù)得分又由分區(qū)劃線操作和培養(yǎng)結(jié)果兩部分組成，分別為20分、15分，見(jiàn)圖1。

圖1 細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目分?jǐn)?shù)組成

1.3 各項(xiàng)目比賽結(jié)果分析

通過(guò)對(duì)賽后成績(jī)的分析發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù)最高得分33.5分，平均分27.02分。將總分折算為100分后，最高得分95.71分，平均分77.20。與其他項(xiàng)目相比，得分較低，詳見(jiàn)表1。

表1 第六屆全國(guó)職業(yè)院?！叭诵l(wèi)杯”檢驗(yàn)技能競(jìng)賽項(xiàng)目成績(jī)分析

經(jīng)分析，細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù)失分點(diǎn)集中于培養(yǎng)結(jié)果部分，分區(qū)不明顯、不能充分平板面積、單個(gè)菌落過(guò)少等問(wèn)題尤為突出。與其他項(xiàng)目不同的是，細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果部分無(wú)法提前給出標(biāo)準(zhǔn)答案或參考范圍，完全取決于參賽者的現(xiàn)場(chǎng)操作水準(zhǔn)，需要長(zhǎng)期實(shí)踐操作積累，才能臨場(chǎng)發(fā)揮出較好的水平。這一結(jié)果提示，目前學(xué)生對(duì)細(xì)菌分離培養(yǎng)技術(shù)的掌握程度有待進(jìn)一步提高。現(xiàn)結(jié)合教學(xué)中的體會(huì)，針對(duì)以上突出問(wèn)題將該項(xiàng)技術(shù)的實(shí)踐教學(xué)做一總結(jié)。

2 實(shí)踐教學(xué)心得總結(jié)

2.1 對(duì)教材內(nèi)容的回顧及疑問(wèn)

將混雜的細(xì)菌在固體培養(yǎng)基表面分散開(kāi)來(lái)，經(jīng)培養(yǎng)形成單個(gè)菌落的方法稱為分離培養(yǎng)。分離培養(yǎng)是臨床標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌檢驗(yàn)的重要環(huán)節(jié)，只有先分離得到目的菌，才能進(jìn)一步加以鑒定和研究[8]。分離培養(yǎng)常通過(guò)平板劃線接種法來(lái)實(shí)現(xiàn)，平板劃線接種法包括分區(qū)劃線和連續(xù)劃線兩種方法。分區(qū)劃線法適用含菌量較多的標(biāo)本，如糞便、膿汁。具體操作方法是將平板培養(yǎng)基分成4或5個(gè)區(qū)域進(jìn)行劃線，用接種環(huán)蘸取少許標(biāo)本先涂布于平板培養(yǎng)基表面一角，并以此為起點(diǎn)進(jìn)行不重疊連續(xù)劃線作為第一區(qū)，其范圍不得超過(guò)平板的 1/4（四區(qū)劃線）或1/5（五區(qū)劃線）。滅菌接種環(huán)，待冷卻后，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿至適合操作的位置，將接種環(huán)通過(guò)第一區(qū)3～4次，連續(xù)不重疊劃線，作為第二區(qū)。同法依次劃完第三、四區(qū)（或五區(qū)）[9-10]。然而實(shí)踐操作中，學(xué)生對(duì)以上教材內(nèi)容常充滿疑惑，比如：以哪里作為劃線起點(diǎn)？接種范圍如何把握？如何轉(zhuǎn)動(dòng)平板？怎樣才算轉(zhuǎn)至適合操作的位置？如何保證二、三、四區(qū)能分別與前一區(qū)交線而不會(huì)交錯(cuò)？

2.2 實(shí)踐教學(xué)

為直觀顯現(xiàn)教材內(nèi)容，達(dá)到優(yōu)良的接種效果，在實(shí)踐教學(xué)中將這部分教材內(nèi)容補(bǔ)充細(xì)化，并將操作動(dòng)作分解如下。（1）取板：正確的平板拿取是保證后續(xù)操作順利進(jìn)行的前提，拿取方式見(jiàn)圖2。五指自然分開(kāi)，呈機(jī)械抓手狀拿起平板，翻轉(zhuǎn)后五指末端指腹托起平板，而非置于掌心。除拇指外的四根手指可起到定位作用，為便于觀察，用數(shù)字進(jìn)行了位置標(biāo)記，見(jiàn)圖3。

圖2 取板手法

圖3 正面拿板手法

（2）開(kāi)蓋：開(kāi)蓋過(guò)小，不方便劃線接種；開(kāi)蓋過(guò)大，容易污染。具體開(kāi)蓋手法見(jiàn)圖4～5。手持瓊脂平板適當(dāng)傾斜，拇指與中指上推皿蓋，食指下壓皿蓋，無(wú)名指下拉皿底（尾指可置于皿蓋側(cè)緣起輔助平穩(wěn)的作用），使皿蓋與皿底間分開(kāi)2～3 cm寬的縫隙，且開(kāi)口朝向酒精燈，以防污染。

圖4 開(kāi)蓋手法一

圖5 開(kāi)蓋手法二

（3）第一區(qū)劃線接種：學(xué)生在此處容易迷茫，如以哪里作為起點(diǎn)？接種范圍如何把握？答案如圖6所示。食指處為標(biāo)本涂布及劃線的起始位置，“Z”字形連續(xù)劃線至中指處止，此為第一區(qū)。劃線過(guò)程中接種環(huán)左右碰壁回頭，以充分利用平板邊緣面積。劃線完成后結(jié)果見(jiàn)圖7。

圖6 第一區(qū)劃線接種起點(diǎn)

圖7 第一區(qū)劃線接種完成模式

（4）轉(zhuǎn)板：合理轉(zhuǎn)動(dòng)平板方便確定下一區(qū)與上一區(qū)交線的位置，也是充分利用整個(gè)平板面積的保障。轉(zhuǎn)動(dòng)手法為：拇指追食指（見(jiàn)圖 8～9），余指向后繞（見(jiàn)圖 10～11），尾指最后跑，微微調(diào)一調(diào)，大家就位好（見(jiàn)圖12）。此時(shí)食指所處位置便是一區(qū)劃線結(jié)束的位置。

圖8 拇指游離

圖9 追至拇指

圖10 食、中、無(wú)名指游離

圖11 食、中、無(wú)名指后繞到位

圖12 尾指后繞，調(diào)整就位

（5）第二區(qū)劃線接種：此處是學(xué)生迷茫的第二處，怎樣保證2區(qū)與1區(qū)合理交線（數(shù)量、角度）？學(xué)生習(xí)慣尋找1區(qū)劃線痕跡，看見(jiàn)才敢劃第二區(qū)。但“眼見(jiàn)為實(shí)”在此處并不是好的解決辦法，利用手指定位才是王道。如圖13所示，此時(shí)食指所處的位置便是1區(qū)劃線結(jié)束的位置。滅菌接種環(huán)，待冷卻后，以食指稍左處為2區(qū)劃線的起始位置，將接種環(huán)通過(guò)第一區(qū)3～4次，“Z”字形連續(xù)不重疊劃線至中指處止，此為第二區(qū)，完成后結(jié)果見(jiàn)圖14。為充分利用平板面積，劃線過(guò)程中接種環(huán)右側(cè)碰壁回頭，兩區(qū)的交角應(yīng)為120°左右最佳。同樣的方法完成三、四區(qū)劃線接種，結(jié)果如圖15～16所示。

圖13 第二區(qū)劃線接種起點(diǎn)

圖14 第二區(qū)劃線接種完成模式

圖15 第三區(qū)劃線接種拿板手法及完成模式

圖16 第四區(qū)劃線接種拿板手法及完成模式

手工法細(xì)菌分離技術(shù)（四區(qū)劃線法）的基本操作手法可總結(jié)為：五指張開(kāi)來(lái)，定位自然成；合力把蓋開(kāi)，食指起、中指止，“Z”字形線條劃上來(lái)；拇指追食指，余指向后繞，尾指最后跑，微微調(diào)一調(diào)，大家就位好；燒環(huán)冷卻再劃線，切記碰壁才回頭。掌握以上要點(diǎn)是手工法細(xì)菌分離接種技術(shù)的基本要求，能保證有線可交、分區(qū)明顯，是達(dá)到分離目的、獲得盡可能多的單個(gè)菌落的第一步。但要達(dá)到好的分離結(jié)果還必須做到嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作，確保無(wú)污染菌出現(xiàn)；接種力度、角度適宜，不劃破瓊脂；線條密而不重疊（1區(qū)可除外），連接適合，不多交、少交、漏交及錯(cuò)交。在掌握基本手法的基礎(chǔ)上，唯有勤練多練，才能獲得理想的分離效果。

3 結(jié)語(yǔ)

全國(guó)職業(yè)院校技能大賽是促進(jìn)我國(guó)職業(yè)教育質(zhì)量提升的一項(xiàng)重要制度設(shè)計(jì)，是培育“工匠精神”的有效途徑[7]。本文亦是在技能競(jìng)賽的啟發(fā)下結(jié)合實(shí)踐教學(xué)所做的總結(jié)，目的是解決競(jìng)賽反饋出的共性問(wèn)題，彌補(bǔ)教學(xué)中的不足，達(dá)到以賽促教、以賽促學(xué)的效果。同時(shí)，在挖掘技術(shù)細(xì)節(jié)的過(guò)程中培育學(xué)生精益求精的工匠精神，實(shí)現(xiàn)高職學(xué)生職業(yè)技能與職業(yè)精神的融合培養(yǎng)，真正守住教育工作者的初心，履行教書(shū)又育人的職責(zé)。